NCI-H522 (Tế bào ung thư phổi không tế bào nhỏ ở người)

NCI-H522 (Tế bào ung thư phổi không tế bào nhỏ ở người)

Thương hiệu: Shanghai Yanzun Biology
Số lượng tế bào: 1x10^6 cells
Sức sống tế bào: 95% (Viability by Trypan Blue Exclusion)
Tên tế bào:NCI-H522 (Tế bào ung thư phổi không tế bào nhỏ ở người)

Nguồn gốc loài: People
Tuổi giới tính: Nam, 58
Nguồn mô: Phổi
Đặc tính tăng trưởng: Tăng trưởng gắn tường
Hình thái tế bào: Biểu mô
Thông số kỹ thuật tế bào: 1 X 106cells/T25 hoặc 1 mL
Điều kiện nuôi cấy: RPMI-1640+10% fetal bovine serum (FBS)
37 ℃, 5% CO2
Điều kiện đóng băng: 90% FBS+10% DMSO
Phương pháp truyền lại: 1:3 đến 1:6 truyền lại, 1-2 ngày truyền lại

Hoạt động nuôi cấy tế bào
Vận chuyển đá khô: Sau khi nhận được tế bào cần chuyển ngay vào bảo quản nitơ lỏng, hoặc tủ lạnh -80 ° C lưu trữ trong thời gian ngắn, hoặc hồi sức trực tiếp.
Vận chuyển ở nhiệt độ bình thường: ngay sau khi nhận được tế bào, vui lòng lấy chai nuôi cấy tế bào ra khỏi hộp và làm theo các bước dưới đây để nuôi cấy
Di truyền tế bào: mật độ tế bào lên tới 80-90%, có thể nuôi cấy di truyền
Các bước để nuôi cấy tế bào trong chai
Đối với các tế bào nuôi cấy dán tường, trước khi gửi, chúng tôi sẽ lấp đầy môi trường bằng toàn bộ chai để giảm sự mất mát của các tế bào dán tường trong quá trình vận chuyển sản phẩm.
1. Sau khi nhận được tế bào, hãy chú ý quan sát xem có ô nhiễm hay không. Đặt chai nuôi cấy dưới kính hiển vi đảo ngược để kiểm tra cẩn thận xem có bị đục hay không, có bị nhiễm vi khuẩn hay không. Bởi vì trong quá trình vận chuyển có va chạm, và một số tế bào cũng rất nhạy cảm với sự thay đổi nhiệt độ, có thể có một số tế bào rơi ra trôi nổi, những tế bào này vẫn là tế bào sống, không loại bỏ, có thể được làm giàu bằng cách ly tâm để sử dụng sau này.
2. Đối với các tế bào dán tường, trong môi trường tủ an toàn sinh học, môi trường dư thừa trong chai nuôi cấy được loại bỏ bằng bơm chân không, đến khoảng 5-8mL còn lại, sau đó chọn môi trường phù hợp với hàm lượng CO2 37 ℃ để nuôi cấy, tháo nắp chai. Nếu các tế bào đã phát triển đầy đủ trong chai, hãy truyền lại ngay lập tức.
3. Đối với các tế bào lơ lửng, trong môi trường tủ an toàn sinh học, chuyển các tế bào trong chai nuôi cấy sang ống ly tâm, 150 g ly tâm trong 5 phút, sau khi loại bỏ thanh lọc, thổi các tế bào với môi trường 5 mL, chuyển sang chai nuôi cấy mới, sau đó được đặt trong môi trường nuôi cấy nhiệt độ không đổi 37 ℃ với hàm lượng CO2 thích hợp.
Các bước hoạt động của tế bào lưu trữ đông lạnh
Lưu ý: Để đảm bảo tỷ lệ sống cao của tế bào, vui lòng rã đông nuôi cấy ngay sau khi nhận được sản phẩm.
1. Đặt ống lưu trữ đông lạnh trong bồn tắm nước 37 độ C lắc qua lắc lại, nhanh chóng tan băng. Để tránh ô nhiễm, hãy đảm bảo rằng miệng ống đông lạnh được đặt trên mặt nước. Làm tan băng nhanh chóng, khoảng 1 phút.
2. Sau khi chất lỏng tan chảy trong ống lưu trữ đông lạnh, lấy ra ngay lập tức, sử dụng rượu phun để lau bề mặt của ống lưu trữ đông lạnh. Bắt đầu từ bước này, các thao tác tiếp theo phải được hoàn thành trong tủ an toàn sinh học.
3. Chuyển chất lỏng từ ống lưu trữ đông lạnh vào ống ly tâm có chứa môi trường hoàn thiện 5mL, 150 g ly tâm trong 5 phút, loại bỏ thanh lọc bằng bơm chân không.
4. Sử dụng môi trường để treo lại các tế bào và chuyển sang chai nuôi cấy mới. Để đảm bảo sự sống sót của sự hồi sinh tế bào, hãy sử dụng môi trường sau khi đun nóng trước khi tắm nước ở 37 độ C.
5. Nuôi cấy các tế bào trong một môi trường nhiệt độ không đổi 37 ° C với CO2 thích hợp.
Nuôi cấy tế bào dán tường
1. Hút và bỏ môi trường nuôi cấy trong chai, thêm vào PBS rửa sạch một lần.
2. Thêm 1 mL dung dịch Trypsin-EDTA 0,25 (w/v) và ủ trong môi trường 37 ℃ cho đến khi các tế bào tách ra khỏi thành. Quá trình này mất khoảng 3-5 phút.
3. Thêm môi trường hoàn thiện 2mL để trung hòa trypsin và thổi nhẹ để thổi các tế bào ra khỏi bề mặt của chai và phân tán chúng.
4. Thu thập đình chỉ tế bào vào ống ly tâm 15mL, ly tâm 150 g trong 5 phút, loại bỏ sự sạch sẽ bằng bơm chân không. Lấy một lượng môi trường thích hợp để treo lại các tế bào và chuyển sang một chai nuôi cấy mới để nuôi cấy.
Di truyền tế bào lơ lửng có thể tham khảo các phương pháp sau:
I. Phương pháp truyền trực tiếp
Khi các tế bào lơ lửng phát triển đến 80%~90% (huyền phù tế bào chuyển sang màu vàng), nó có thể được truyền lại;
2. Hút huyền phù tế bào bị loại bỏ bằng ống hút 1/2~1/3;
3. Thêm vào một lượng vừa phải cơ sở bồi dưỡng tươi mới, tiếp tục bồi dưỡng.
B5-05=giá trị thông số Kd, (cài 2)
1. Chuyển đình chỉ tế bào vào ống ly tâm;
2. 150 g ly tâm 5 phút, loại bỏ chất lỏng trong lớp trên;
3. Sử dụng các tế bào treo lại môi trường tươi;
4. Ống hút hấp thụ một lượng vừa phải huyền dịch tế bào, cho vào bình nuôi dưỡng mới, lại thêm vào một lượng vừa phải cơ sở nuôi dưỡng tươi mới, tiếp tục nuôi dưỡng.
Hoạt động đông lạnh tế bào
1. Ly tâm 1000 vòng/phút 5 phút để loại bỏ sự sạch sẽ. Thêm 1 mL huyết thanh treo lại tế bào, theo số lượng tế bào thêm huyết thanh và DMSO, nhẹ nhàng trộn đều, nồng độ DMSO cuối cùng là 10%, mật độ tế bào không thấp hơn 1 x 106/mL, mỗi ống lưu trữ đông lạnh lưu trữ 1 mL huyền phù tế bào, chú ý đến ống lưu trữ đông lạnh để đánh dấu tốt;
Đặt ống đông lạnh vào hộp làm mát chương trình, đặt trong tủ lạnh -80 ° C, sau ít nhất 2 giờ chuyển sang lưu trữ nitơ lỏng

Một số tế bào liên quan như sau: