Chuột Interleukin 1β (IL-1β) ELISA Kit

1.Loại mẫu và bộ sưu tập:

Huyết thanh：Đặt mẫu máu đầy đủ thu thập trong ống tách huyết thanh ở nhiệt độ phòng0.5-2giờ hoặc4℃Qua đêm, và1000×gLy tâm20 Phút, lấy ra là được, hoặc đặt vào trong.-20℃hoặc-80℃Bảo quản, nhưng nên tránh đông lạnh nhiều lần.
Huyết tương：VớiEDTAhoặc heparin được thu thập mẫu vật như một chất chống đông máu và sau khi thu thập mẫu vật30Trong vòng vài phút.2-8℃ 1000×gLy tâm15Phút, lấy ra là có thể phát hiện, hoặc đặt vào trong.-20℃hoặc-80℃Bảo quản, nhưng nên tránh đông lạnh nhiều lần.

Tổ chức cân bằng:Với pre-coldPBS (0,01M, pH = 7,4)Rửa sạch các mô, loại bỏ máu còn lại (các tế bào hồng cầu phân hủy trong san lấp mặt bằng sẽ ảnh hưởng đến kết quả đo), sau khi cân sẽ cắt mô với khối lượng tương ứngPBS(Thông thường nhấn1:9Tỷ lệ cân nặng, ví dụ như......Từ 1gCác mẫu mô tương ứng9 mLcủaPBSThể tích cụ thể có thể điều chỉnh thích hợp theo nhu cầu thí nghiệm và ghi chép lại. Đề nghị trongPBS(Thêm chất ức chế protein) Thêm vào máy cân bằng thủy tinh, nghiền đầy đủ trên băng. Để phá vỡ các tế bào mô hơn nữa, có thể siêu âm phá vỡ một hỗn hợp đồng nhất, hoặc đông lạnh nhiều lần. Cuối cùng là dung dịch cân bằng.5000×gLy tâm5~10phút,Lấy ra là có thể kiểm tra,Hoặc đặt Thượng Thanh-20℃ hoặc-80℃ Bảo quản, nhưng nên tránh đóng băng và tan chảy lặp đi lặp lại。

Chất lỏng lysis tế bào: Hút dung dịch nuôi cấy.PBS (0,01 M, pH 7,4) rửa sạch tế bào. Cạo các tế bào bằng cách thêm 2-5 mL PBS (0,01 M, pH 7,4). Các tế bào lơ lửng có thể được bỏ qua. Thu thập đình chỉ tế bào, 4 ℃ 1000 × g ly tâm 10 phút, loại bỏ môi trường và làm sạch với PBS làm mát trước 3 lần. Với một lượng vừa phải PBS làm mát trước hoặc dung dịch lysis tế bào không biến tính (chất ức chế protease được thêm vào trước khi sử dụng) các tế bào treo lại, thường cần 150-250 μL PBS treo lại cho khối lượng tế bào của một tấm 6 lỗ. Đặt mẫu vào -20 ℃ hoặc -80 ℃, để mẫu đông lạnh, sau đó để mẫu rã đông ở nhiệt độ phòng, đông lạnh và tan chảy 3 lần lặp đi lặp lại, để các tế bào phân giải đầy đủ, cũng có thể phá vỡ mẫu siêu âm để đạt được mục đích phân giải. 4 ℃ 10000 × g ly tâm 10 phút, loại bỏ các mảnh tế bào, lấy sạch có thể được phát hiện,Hoặc đặt Thượng Thanh-20℃ hoặc-80℃ Bảo quản, nhưng nên tránh đóng băng và tan chảy lặp đi lặp lại。

Nuôi cấy tế bào hoặc các mẫu vật sinh học khác:xin1000×gLy tâm20Phút, lấy ra là có thể phát hiện, hoặc đặt vào trong.-20℃ hoặc-80Bảo quản độ C, nhưng nên tránh đông lạnh nhiều lần.

2.Bảo quản mẫu và ổn định

Mẫu in2-8℃Trong điều kiện có thể lưu trữ72h， ở- 20℃hoặc-80℃Có thể lưu trữ6 tháng vàtrên đây. Sau khi thu thập mẫu, không phải một lần phát hiện kết thúc, xin vui lòng đóng băng lưu trữ theo liều lượng một lần, tránh đóng băng và tan chảy lặp đi lặp lại.

Bước:

1. Số: mẫu tương ứng với micropores theo thứ tự số, mỗi tấm nên đặt đối chiếu âm tính2 lỗ, đối chiếu dương tính 2 lỗ, đối chiếu trống 1 lỗ (đối chiếu trống không thêm mẫu và thuốc thử enzyme, các bước còn lại hoạt động giống nhau）。

2. Thêm mẫu: thêm đối chiếu âm tính, đối chiếu dương tính vào lỗ đối chiếu âm, dương tính50μl。 Sau đó, pha loãng mẫu 40 μl được thêm vào lỗ mẫu, sau đó 10 μl được thêm vào mẫu cần thử. Thêm mẫu vào đáy lỗ tiêu chuẩn, cố gắng không chạm đến vách lỗ, nhẹ nhàng lắc lư trộn đều.

3. Ôn dục: niêm phong tấm phía sau với màng niêm phong37Nhiệt độ 3.0phút。

4. Phân phối chất lỏng: sẽ30 lần dung dịch tẩy rửa đậm đặc dùng nước cất pha loãng 30 lần dự phòng.

5. Tẩy rửa: Cẩn thận bóc màng niêm phong, bỏ đi chất lỏng,Sấy khô,Mỗi lỗ đầy chất tẩy rửa,Để yênSau 30 giây bỏ đi, lặp lại 5 lần, chụp khô.

6. Enzyme: Mỗi lỗ được thêm vào thuốc thử Enzyme50μl， Ngoại trừ lỗ trống。

7. Ôn dục: niêm phong tấm phía sau với màng niêm phong37Nhiệt độ 3.0phút。

8. Tẩy rửa: Cẩn thận bóc màng niêm phong, bỏ đi chất lỏng,Sấy khô,Mỗi lỗ đầy chất tẩy rửa,Để yênSau 30 giây bỏ đi, lặp lại 5 lần, chụp khô.

9. Kết xuất màu: Mỗi lỗ được thêm chất kết xuất màu đầu tiênA50μlThêm chất kết màu vào.B50μlNhẹ nhàng chấn động trộn đều,37℃ tránh ánh sáng hiển thị màu 10-20phút.

10.Chấm dứt: Mỗi lỗ cộng với chấm dứtChất lỏng50 mLChấm dứt phản ứng(Lúc này màu xanh lập tức chuyển sang màu vàng)。

11.Xác định: Zero trong lỗ trống,450NmBước sóng đo các lỗ theo thứ tựhútHàm lượng (ODGiá trị). Xét nghiệm nên được thực hiện sau khi chấm dứt dịch15Tiến hành trong vòng vài phút.

Chú ý:

1. Chuẩn bị thuốc thử: Bộ dụng cụ được lấy ra khỏi môi trường lạnh nên được cân bằng ở nhiệt độ phòngCó thể sử dụng sau 15-30 phút. Chuẩn bị một lần thí nghiệm cần thiết, những thứ khác có thể tháo ra từ tấm vi lỗ, niêm phong, lưu trữ theo yêu cầu của hướng dẫn sử dụng, để chuẩn bị sử dụng lần sau.

2. Thêm mẫu: Vui lòng sử dụng đầu hút khử trùng dùng một lần trong hoạt động thí nghiệm để tránh ô nhiễm. Khi thêm mẫu chú ý không được có bong bóng khí sinh ra, thêm mẫu vào đáy tấm tiêu chuẩn, cố gắng không chạm đến vách lỗ, nhẹ nhàng lắc lư trộn đều. Giống như việc bổ sung thuốc thử phản ứng, khoảng thời gian giữa lỗ đầu tiên và lỗ cuối cùng trong quá trình lấy mẫu càng nhỏ càng tốt (thường được kiểm soát ởTrong vòng 10 phút), nếu nó quá lớn, nó sẽ dẫn đến thời gian "pre-temperature" khác nhau, ảnh hưởng đáng kể đến độ chính xác và độ lặp lại của phép đo. Để đo lường chính xác, đề nghị thiết lập các lỗ hồi để thực nghiệm.

3. Nhiệt độ: Để ngăn ngừa sự bay hơi của mẫu, hãy đặt tấm tiêu chuẩn enzyme với nắp hoặc màng phủ trong hộp ướt khi thử nghiệm, để tránh sự bay hơi của chất lỏng, sau khi rửa tấm nên tiến hành các hoạt động tiếp theo càng sớm càng tốt, bất cứ lúc nào cũng nên tránh tấm tiêu chuẩn enzyme ở trạng thái khô, trong khi đó thời gian và nhiệt độ ấm áp nhất định phải được tuân thủ nghiêm ngặt.

4. Rửa:Chất tẩy rửa mạnhcó thểSẽ cóKết tinhkết tủa, có thể được làm ấm trong bồn tắm nước khi pha loãngKhi giặt không ảnh hưởng đến kết quả. Giặt đầy đủ là rất quan trọng, trong mỗi lần giặt, đều phải vứt khô dung dịch giặt. Chất lỏng rửa còn lại trong lỗ phản ứng trong quá trình giặt nên được vỗ khô trên giấy thấm, không đặt giấy thấm trực tiếp vào lỗ phản ứng để hút nước, đồng thời, hãy nhẹ nhàng xóa chất lỏng còn lại và dấu ngón tay ở đáy tấm để tránh ảnh hưởng đến việc đọc máy đánh dấu enzyme cuối cùng. Nếu sử dụng máy giặt tự động, sau khi sử dụng thành thạo trước khi sử dụng trong quá trình thử nghiệm chính thức.

5. Kiểm soát thời gian phản ứng: sau khi thêm chất nền, hãy quan sát sự thay đổi màu sắc của lỗ phản ứng theo thời gian, chẳng hạn như quan sát thấy màu tối hơn, hãy thêm phản ứng chấm dứt dịch trước, tránh phản ứng quá mạnh và ảnh hưởng đến việc đọc mật độ quang của máy đo tiêu chuẩn enzyme.

6. Chất nền: Chất nền vui lòng bảo quản tránh ánh sáng, tránh ánh sáng mạnh và trực tiếp khi lưu trữ và sưởi ấm.