Dịch vụ chuẩn bị kháng thể đơn dòng

Các kháng thể đơn dòng (MAb) là các kháng thể được tạo ra bởi nhóm kháng nguyên chuyên biệt, còn được gọi là kỹ thuật khối u lai có nguồn gốc từ năm 1975 và được thành lập bởi G. KOHLER và Milstein. Nguyên tắc chính là sử dụng các tế bào B sản xuất kháng thể để kết hợp với các tế bào khối u để tạo ra các kháng thể.

Chuẩn bị kháng đơn dòng bằng kỹ thuật hybridoma là các bước chính để nhắm mục tiêu bao gồm:

(1) Chuẩn bị kháng nguyên,

(2) Động vật miễn dịch,

(3) Chuẩn bị các tế bào lá lách miễn dịch và tế bào u tủy,

d) Tế bào dung hợp;

(5) Chọn nuôi cấy tế bào khối u lai,

(6) Sàng lọc các tế bào khối u lai;

(7) Cloning tế bào khối u lai;

(8) Xác định kháng thể đơn dòng;

(9) Thành lập dòng tế bào khối u lai tiết kháng thể đơn dòng:

(10) Chuẩn bị số lượng lớn các kháng thể đơn dòng.

Quá trình chuẩn bị kháng thể đơn dòng:

Động vật miễn dịch động vật miễn dịch là quá trình sử dụng kháng nguyên miễn dịch chuột để làm cho chuột sản xuất tế bào lympho B nhạy cảm. Thông thường, chuột cái Balb/C 6-8 tuần tuổi được chọn để tiêm miễn dịch theo phác đồ miễn dịch đã được thiết lập trước. Kháng nguyên đi vào cơ quan miễn dịch ngoại vi thông qua tuần hoàn máu hoặc bạch huyết, kích thích nhân bản tế bào lympho B tương ứng, kích hoạt, nhân lên và biệt hóa thành tế bào lympho B nhạy cảm.

2. Tế bào dung hợp áp dụng phương pháp lấy máu nhãn cầu để xử tử chuột, thao tác vô khuẩn lấy lá lách ra, nghiền nát trong đĩa phẳng, chuẩn bị huyền dịch tế bào lá lách. Các tế bào homeomyeloma chuẩn bị được trộn với các tế bào lá lách của chuột theo tỷ lệ nhất định và polyethylene glycol được thêm vào. Dưới polyethylene glycol, các tế bào lympho khác nhau có thể hợp nhất với các tế bào u tủy để hình thành các tế bào u lai.

3. Mục đích bồi dưỡng chọn lọc là sàng lọc tế bào khối u tạp giao dung hợp, thường áp dụng phương pháp bồi dưỡng chọn lọc HAT. Trong môi trường HAT, các tế bào u tủy không hợp nhất chết vì thiếu hypoxanthine guanine phosphoribosyltransferase và không thể tổng hợp DNA bằng cách sử dụng các con đường khắc phục. Các tế bào lympho không hợp nhất mặc dù có hypoxanthine guanine phosphoribosyltransferase, nhưng bản thân chúng không thể tồn tại lâu dài bên ngoài cơ thể và dần dần chết đi. Chỉ có các tế bào khối u lai hợp nhất có thể tồn tại và nhân lên trong môi trường HAT do thu được hypoxanthine guanine phosphoribosyltransferase từ các tế bào lá lách và có đặc tính là các tế bào u tủy có thể nhân lên vô hạn.

4, sàng lọc nhân bản khối u lai dương tính và nhân bản hóa tế bào khối u lai phát triển trong môi trường nuôi cấy HAT, chỉ có một số ít là tế bào tiết ra kháng thể đơn dòng đặc hiệu dự định trước, do đó, phải được sàng lọc và nhân bản hóa. Nuôi cấy nhân bản của các tế bào khối u lai thường được thực hiện bằng phương pháp pha loãng hạn chế. Các tế bào khối u lai dương tính tạo ra các kháng thể đơn dòng mong muốn được sàng lọc và nhân bản khuếch đại được thực hiện bằng cách sử dụng các phương pháp miễn dịch nhạy cảm, nhanh chóng và đặc hiệu.

Sau khi xác định đầy đủ các loại globulin miễn dịch, phân lớp, đặc hiệu, ái lực, xác định epitope và phân tử của kháng nguyên đơn dòng mà nó tiết ra, đông lạnh kịp thời được thực hiện.

5、Chuẩn bị số lượng lớn kháng thể đơn dòng Chuẩn bị số lượng lớn kháng thể đơn dòng Điều quan trọng là sử dụng phương pháp dụ dỗ và cơ thể động vật

Phương pháp bồi dưỡng bên ngoài.

(1) Chuột Balb/C được tiêm vào khoang bụng đầu tiên. 5ml đá khô lỏng hoặc decanten để tiền xử lý. Sau 1-2 tuần, các tế bào khối u lai được tiêm trong khoang bụng. Các tế bào khối u lai nhân lên trong khoang bụng của chuột và tạo ra và tiết ra các kháng thể đơn dòng. Khoảng 1-2 tuần, có thể thấy bụng chuột phình to. Một số lượng lớn các kháng thể đơn dòng có thể thu được bằng cách bơm nước bụng bằng ống tiêm.

b) Phương pháp nuôi cấy ngoài cơ thể đặt tế bào khối u lai trong bình nuôi cấy để nuôi cấy. Trong quá trình nuôi cấy, các tế bào khối u lai tạo ra và tiết ra kháng thể đơn dòng, thu thập chất lỏng nuôi cấy, ly tâm loại bỏ các tế bào và các mảnh vỡ của chúng, và các kháng thể đơn dòng mong muốn có sẵn. Nhưng phương pháp này tạo ra một lượng kháng thể hạn chế. Trong những năm gần đây, các kỹ thuật và thiết bị nuôi cấy mới khác nhau đã liên tục xuất hiện, làm tăng đáng kể sản xuất kháng thể. Sau khi tế bào khối u tạp giao dung hợp, phải tiến hành sàng lọc mới có thể sử dụng. Tế bào khối u lai chia làm hai lần: một, sàng lọc tế bào khối u lai; Hai, sàng lọc ra tế bào khối u tạp giao có thể sản sinh kháng thể đặc biệt trong các tế bào khối u tạp giao sơ tuyển, phương pháp và nguyên lý của hai lần sàng lọc này không giống nhau.

Một số dịch vụ thử nghiệm