GeneCopoeia (gen phục hồi) cung cấp các bản sao biểu hiện mục tiêu dựa trên hành động của miRNA * genome, bao gồm cơ sở dữ liệu công cộng. Nhân bản biểu hiện mục tiêu miRNA chứa trình tự 3'-UTR (tức là vị trí hoạt động miRNA) hạ lưu của gen báo cáo điều khiển bởi trình khởi động SV40 (fluorescenase của đom đóm). Một gen báo cáo thứ hai, renilla luciferase, có thể được sử dụng để theo dõi chuyển nhiễm, biểu hiện hiệu quả và có thể được sử dụng như một nhân tố nội bộ.
Mục tiêu miRNA bộ gen người thể hiện các đặc điểm của nhân bản
Kết quả của hành động miRNA trên điều hòa gen mục tiêu tiềm năng có thể thu được thông qua phân tích hoạt động của lucifferase đom đóm. Biểu hiện sự sao chép nhân bản sau khi hình thành mRNA khảm Firefly luciferase ORF và 3'UTR, nếu miRNA đặc biệt có thể liên kết bổ sung với chuỗi 3'-UTR, hoạt động của protein mã hóa luciferase ORF trong khảm cũng được điều chỉnh tương ứng, vì vậy thông qua phát hiện cường độ phát sáng của luciferase có thể xác định định lượng hiệu quả điều chỉnh mRNA của miRNA tương ứng với mục tiêu.
Ứng dụng nhân bản tiền chất miRNA và biểu hiện mục tiêu
- Điều hòa biểu hiện gen: Điều hòa biểu hiện gen của một hoặc toàn bộ miRNA được đưa vào tế bào nuôi cấy bằng cách truyền nhiễm hoặc nhiễm các hạt virus, thực hiện điều hòa biểu hiện gen của một miRNA hoặc nhiều miRNA. Nghiên cứu các điều kiện cụ thể hoặc cơ thể hóa các hiệu ứng và chức năng được quy định của miRNA
- Xác nhận và xác định gen mục tiêu miRNA: Xác minh nhân bản biểu hiện bằng cách sử dụng mục tiêu miRNA để sàng lọc và xác nhận các gen mục tiêu hoạt động miRNA quy mô lớn. Một miRNA có thể hoạt động trên tất cả các mục tiêu và 3'-UTR tất cả các miRNA có thể hoạt động trên một mRNA