Nguyên lý BCA là các ion đồng hóa trị hai, trong điều kiện kiềm, có thể được giảm bởi protein thành ion đồng hóa trị một, và tương tác giữa ion đồng hóa trị một và Giải pháp BCA A (chứa BCA) tạo ra phản ứng màu nhạy cảm. BCA của hai phân tử cô lập một ion đồng, tạo thành một phức hợp phản ứng màu tím. Phức hợp hòa tan trong nước này cho thấy độ hấp thụ ánh sáng mạnh ở 562nm, và độ hấp thụ và nồng độ protein có mối quan hệ tuyến tính tốt trên một phạm vi rộng, vì vậy nồng độ protein có thể được suy ra dựa trên giá trị hấp thụ ánh sáng.