tế bào thận của cá macrosaurus; PCK

Tên sản phẩm: Tế bào thận cá macrophyllus; PCK

Danh mục sản phẩm: Các dòng tế bào khác

Đặc tính tăng trưởng: Tăng trưởng gắn tường

Hệ thống nuôi cấy: DMEM (đường cao)+10% FBS, 28° hoặc 21°

Phương pháp truyền: 1: 2 truyền

Điều kiện đông lạnh: Không có huyết thanh tế bào đông lạnh

Đặc điểm kỹ thuật: 1 × 10 ^ 6cells/T25 chai nuôi cấy

Số hàng: CS - C2906

Phương pháp bảo quản tế bào đông lạnh:
Phương pháp bảo quản lạnh I: ống đông lạnh được đặt ở 4 ℃ 30~60 phút (-20 ℃ 30 phút *) - 80 ℃ 16~18 giờ (hoặc qua đêm) lưu trữ lâu dài trong bể nitơ lỏng vaporphase.
Phương pháp bảo quản lạnh 2: ống đông lạnh được đặt trong máy làm mát có thể lập trình của chương trình đã thiết lập mỗi phút giảm 1-3 ℃ xuống dưới -80 ℃, sau đó đặt vào bể chứa nitơ lỏng vapor phase để lưu trữ lâu dài. * -20 ℃ không được vượt quá 1 giờ để ngăn chặn tinh thể băng quá lớn, dẫn đến tế bào chết với số lượng lớn, cũng có thể bỏ qua bước này trực tiếp bỏ vào tủ lạnh -80 ℃, chỉ có tỷ lệ sống giảm một chút.

Mô biểu bì được hình thành từ lớp phôi ngoài thời kỳ phôi thai, có tác dụng chống ma sát và chống tổn thương. Công ty Công nghệ cung cấp tổng RNA chất lượng cao, chuỗi cDNA chuẩn bị PCR, protein và các thành phần phụ của chúng từ mô biểu bì thai nhi của chuột tươi hoặc đông lạnh. Tất cả các sản phẩm đều trải qua quy trình QA/QC nghiêm ngặt trước khi vận chuyển để đảm bảo chất lượng của chúng. Những sản phẩm này có thể được sử dụng trực tiếp để nhân bản gen, phân tích biểu đồ biểu hiện và nghiên cứu các thí nghiệm sinh học phân tử khác nhau.
Chuẩn bị RNA tổng thể:RNA được phân lập bằng thuốc thử Trizol từ Qiagen RNeasy Kit và sau đó được tinh chế bằng Qiagen RNA Clean Kit. Tổng số mẫu RNA do công ty cung cấp được đính kèm với tổng nồng độ mẫu RNA, tổng hàm lượng, ảnh điện di, kết quả đo giá trị OD, v.v.

Chuẩn bị cDNA:RNA tổng hợp được tinh chế để tổng hợp chuỗi cDNA được phiên mã ngược trong hệ thống phản ứng tổng hợp 50 ul, bao gồm enzyme phiên mã ngược MMLV và mồi ngẫu nhiên và RNA tổng cộng 10 mg. Kết thúc phản ứng RT sau 10 phút phản ứng 68 ℃. Sử dụng 1x RT Buffer để vận chuyển cDNA, 1 ul cDNA là đủ cho một phản ứng PCR. Tất cả các sản phẩm cDNA đều trải qua phân tích QA/QC nghiêm ngặt trước khi đơn đặt hàng được vận chuyển, đảm bảo chất lượng sản phẩm.

Chuẩn bị protein:Sử dụng Modified RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin) Chuẩn bị chất lỏng lysis mô biểu bì của thai nhi chuột, ly tâm loại bỏ các mảnh mô, xác định nồng độ protein bằng bộ xét nghiệm protein Bio-Rad, pha loãng protein mô với protein không khử Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6,8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0,002% Bromphenol Blue) cộng thêm 5% beta-mercapoetylethanol và PMSF, -80 độ.

Ứng dụng tiềm năng: <1>Nhân bản PCR của các gen đã biết; <2>Chọn lọc mRNA; <3>Nhân bản gen và trình tự mục tiêu; <4>Western and Northern Blot； <5>Xét nghiệm protein và proteomics; B5-03=giá trị thông số Ki, (cài 3)

Xử lý tế bào:

1) Tế bào hồi sức: Nhanh chóng đặt ống chứa 1 mL đình chỉ tế bào vào bồn tắm nước 37 ℃ (mặt nước phải thấp hơn nắp ống) lắc tan băng, di chuyển vào ống ly tâm 15ml đã chuẩn bị trước có chứa 4 mL môi trường trộn đều. Ly tâm trong điều kiện 1000RPM trong 4 phút, loại bỏ chất lỏng, thêm vào môi trường 1mL và thổi đều. Tất cả đình chỉ tế bào sau đó được chuyển vào một chai nuôi cấy có chứa 5ml môi trường để nuôi cấy qua đêm. Thay dịch vào ngày hôm sau và kiểm tra mật độ tế bào.
2) Di truyền tế bào: Nếu mật độ tế bào đạt 80% -90%, nuôi cấy di truyền có thể được thực hiện.
Đối với các tế bào lơ lửng, di truyền có thể tham khảo các phương pháp sau:
Phương pháp 1: Thu thập tế bào, 1000RPM, ly tâm ở nhiệt độ bình thường trong 5 phút, loại bỏ chất lỏng thượng thanh, bổ sung 1-2mL dung dịch nuôi cấy sau đó thổi đều, truyền dịch tế bào theo tỷ lệ 1: 2 đến 1: 5 được chia vào đĩa hoặc chai mới có chứa 8ml dung dịch nuôi cấy.
Phương pháp 2: Có thể lựa chọn phương thức thay đổi một nửa, sau khi bỏ đi một nửa môi trường, treo các tế bào còn lại lên, chia dịch tế bào theo tỷ lệ 1: 2 đến 1: 3 vào đĩa hoặc chai mới có chứa môi trường 8ml.
3) Đóng băng tế bào: Khi tế bào phát triển tốt, có thể đóng băng tế bào. Khi các tế bào đình chỉ đông lạnh, các tế bào nên được thu thập, 1000RPM, ly tâm trong điều kiện nhiệt độ bình thường trong 5 phút, bảo quản một lượng nhỏ chất lỏng thượng lưu (để ngăn chặn sự hấp thụ tế bào), thêm một phần môi trường tươi, thổi đều, thêm vào ống đông lạnh, thêm 10% DMSO lắc vào ống đông lạnh sau khi đông lạnh. Môi trường đông lạnh
Môi trường đông lạnh được khuyến nghị phải được sử dụng khi đóng băng tế bào. Môi trường đông lạnh nên chứa các chất bảo vệ đông lạnh như DMSO hoặc glycerin. Môi trường đông lạnh * được xây dựng đặc biệt cũng có sẵn.
1) Môi trường đông lạnh tế bào là một môi trường đông lạnh sẵn sàng sử dụng * cho các tế bào động vật có vú có tỷ lệ huyết thanh bò thai và huyết thanh bò được tối ưu hóa để cải thiện sức sống của tế bào cũng như hiệu quả hồi sinh tế bào sau khi tan băng.
2) Môi trường đông lạnh là một môi trường đông lạnh được xác định về mặt hóa học, không có protein, vô trùng với 10% DMSO, thích hợp cho sự đông lạnh của nhiều loại tế bào gốc và tế bào gốc (ngoại trừ melanocytes).
Quy trình hoạt động:
1.1 Tác nhân và dụng cụ chính: Kính hiển vi chênh lệch ngược (Nhật Bản olympus imt-413), hộp ấp co2 (Nhật Bản yamato it-61).
1.2 Nuôi cấy hồi sức và đông lạnh tế bào hek-293:
1.2.1 Nuôi cấy hồi sức tế bào lấy ống lưu trữ đông lạnh ra khỏi bể nitơ lỏng, ngay lập tức đưa vào bồn nước 37 độ C và lắc liên tục để làm cho nó tan chảy nhanh chóng. Ống lưu trữ đông lạnh tế bào hòa tan được lấy ra, sau khi khử trùng bằng rượu được mở ra, hấp thụ dung dịch đông lạnh của tế bào hòa tan, thêm dung dịch nuôi cấy trước (37 ℃ làm nóng trước, 8~10 lần thể tích) vào ống ly tâm, hơi thổi và trộn đều, sau đó 1000rpm 5 phút, loại bỏ thanh lọc, thêm một lượng thích hợp dung dịch nuôi cấy, thổi vào huyền phù tế bào, tiêm chủng với mật độ 1 × 105/ml trong chai nuôi cấy 25cm2, nuôi cấy ở 37 ℃, 5% co2 và độ ẩm bão hòa.
1.2.2 nuôi cấy tế bào hek-293 của tế bào gốc 48h thay đổi dịch 1 lần, tế bào dài đến 60% đến 70% khi hợp nhất, tiêu hóa 0,25% trong 1-2 phút, chai nuôi cấy lại với lòng bàn tay nhẹ nhàng gõ để làm cho các tế bào thoát thành, đình chỉ, phân tán, để làm cho các tế bào phân tán hơn nữa có thể được thổi ống nhẹ nhàng thổi vài lần, để có được đình chỉ tế bào, sau đó thêm một lượng lớn của môi trường nuôi cấy, trộn đều nhẹ nhàng, ống hút được lắp ráp hỗn hợp dịch, khuếch đại tế bào.
1.3 Quan sát hình thái tế bào được quan sát dưới kính hiển vi đảo ngược và ghi lại sự tăng trưởng và đặc điểm hình thái của tế bào.
1,4 tế bào đếm tế bào tiêu hóa thông thường, đợi tế bào tròn, tách vách và nổi lên, thêm vào một ít cơ sở nuôi cấy ly tâm, lại dùng BBS treo lại và thổi để tạo thành dịch huyền tế bào. Một đình chỉ tế bào dấu vết được thêm vào một bên của nắp đậy bảng đếm tế bào và số lượng tế bào hình vuông lớn bốn góc của bảng đếm được tính toán theo công thức bằng cách quan sát bằng kính mục tiêu 10 × 10. Số tế bào/ml nguyên dịch=(tổng/4 của số tế bào quad) × 104.
Tỷ lệ dán tường của tế bào 1,5 chỉ số tế bào trong giai đoạn sinh trưởng, tiêu hóa thành đình chỉ tế bào đơn 0,25%, sau khi đếm lần lượt được tiêm vào 12 chai nuôi cấy 25cm2, cứ hai giờ ngẫu nhiên lấy ra 3 chai tế bào, hút môi trường nuôi cấy và tế bào không dán tường, thêm enzyme tiêu hóa tụy tiêu hóa, đếm tế bào dán tường, lấy giá trị trung bình, theo công thức: tỷ lệ dán tường (%)=(số tế bào dán tường/số tế bào tiêm chủng) × 100%, tính toán tỷ lệ dán tường.
1.6 Các tế bào trong giai đoạn tăng trưởng theo cấp số nhân cong tăng trưởng được tạo ra bằng cách tiêu hóa một hệ thống treo tế bào đơn, được tiêm vào tấm 24 lỗ với 1 × 104/lỗ, mỗi lỗ được thêm 1 ml môi trường. Lấy ngẫu nhiên 3 lỗ mỗi ngày, đếm số lượng tế bào trên mỗi lỗ và tính trung bình. Đếm liên tục 10d để vẽ đường cong tăng trưởng tế bào.

Đây là các sản phẩm liên quan:

EstradiolBenzoate Benzoate Bộ xét nghiệm kháng thể bệnh lở mồm long móng cho gia súc

Acifluorfene Trifluorocarboxyl Grass Ether Cừu Thử nghiệm kháng thể lở mồm long móng

D-Ribose D-ribose 1,2,3-triglyceride

Trái cây Oleanolic Acid Oxyton 17β-hydroxy-4-androstene-3-17-este
tế bào thận của cá macrosaurus; PCKXét nghiệm lipase người A2 elisa ≥4190% như được xác định bởi SDS-PAGE 2,5-dip-benzodial

Hộp thử nghiệm enzyme chuyển vị glucose của con người elisa ≥4191% được xác định bởi SDS-PAGE 4-chloro-6-yl-5-fluoropyrimidine

Inositol 3 kinase elisa thử nghiệm hộp ≥4192% như determined bởi SDS-PAGE L-(+) - amidan

Adenosine nhân tạo kích hoạt protein kinase elisa Kit ≥4194% như được xác định bởi SDS-PAGE N, N'- (4,4'-subyldiphenyl) Bismaleylamide

Bộ điều chỉnh tín hiệu ngoại bào của con người kinase elisa ≥4195% như được xác định bởi SDS-PAGE-O-Trifluorobenzene

Nhân hóa yếu tố hạt nhân κB ức chế protein αelisa Cart ≥4196% as determined by SDS-PAGE Dimyl II-Generation Amino Kẽm

Bộ xét nghiệm Protein kinase C elisa ≥4197% được xác định bởi SDS-PAGE 2,4,5-triylthiazole

Fructokinase Elisa Cart ≥4198% được xác định bởi SDS-PAGE 6-Hydroxy-2-Naphthalene Sulfonatium

Xét nghiệm Glycerol Transpose Enzyme 2 elisa ≥4199% được xác định bởi SDS-PAGE 4-flo-3-ylphenylaldehyde

Xét nghiệm Lymphocytokine Elisa ≥4200% được xác định bởi SDS-PAGE 2,3-Dipyridine

Hộp xét nghiệm chemokine elisa ≥4201% được xác định bởi SDS-PAGE dựa trên 3-ester

Human lymphocyte Antigen 6 Complex locus A elisa thử nghiệm ≥4202% as determined by SDS-PAGE L-valine tert muối muối

Kháng nguyên liên quan đến chức năng tế bào lympho của con người 3 elisa ≥4203% được xác định bởi SDS-PAGE 3,4,5-triflobenrile

Kháng nguyên liên quan đến chức năng tế bào lympho của con người 2 elisa test box ≥4204% as determined by SDS-PAGE 4-ylbenzoboron

Báo cáo thí nghiệm:
Một, tách ra và bồi dưỡng:
Trong điều kiện vô trùng, mô tâm nhĩ chuột SD 1-3d tuổi được lấy ra, sau đó khối mô này được làm sạch 2 lần bằng PBS, sau đó sẽ có kích thước khoảng 1 mm 3;
2, thêm 4 mL enzyme tiêu hóa dịch (0,1% 0,1% loại I collagen) vào khối mô, treo 10 giây, tiêu hóa trong 10 phút ở 37 ℃, sau đó thổi bằng ống nhỏ giọt để làm đình chỉ tế bào đơn, kết tủa tự nhiên và thu thập thanh lọc, với 10% FBS môi trường chấm dứt tiêu hóa sau khi đặt 4 ℃;;
3, các mô còn lại thêm 3~4mL enzyme tiêu hóa dịch, treo trong 10 giây, sau khi đặt 37 ℃ tiêu hóa trong 10 phút, theo các phương pháp trên thu thập thanh lọc và chấm dứt tiêu hóa sau khi đặt 4 ℃, lặp lại bước này 2-3 lần, cho đến khi mô * được tiêu hóa;
4, lọc chất lỏng tiêu hóa tế bào bằng lưới thép không gỉ 200 lưới, ly tâm 1200r/phút 10 phút, loại bỏ và làm sạch, các tế bào kết tủa được sử dụng với 10% FBS DMEM/F12 phương tiện truyền thông đình chỉ, tiêm trong 25cm2 chai, đặt ở 37 ℃, 5% CO2 nuôi cấy;
5. Sau khi dán tường vi sai 1h, hút môi trường nuôi cấy, theo yêu cầu thí nghiệm để tiêm vào tấm 6 lỗ để tiếp tục nuôi cấy;
Giám định huỳnh quang miễn dịch:
Khi tế bào cơ nhĩ phát triển đến 80% dung hợp, loại bỏ môi trường, rửa sạch tế bào bằng PBS ấm 2 lần, mỗi lần 10 phút, sau đó cố định tế bào bằng 4% paraformaldehyde ở nhiệt độ phòng trong 15 phút;
2, PBS rửa tế bào 2 lần, mỗi lần 10 phút, sau đó ở 4 ℃, với 0,1% Triton X-100 xuyên qua màng 15 phút;
PBS xả tế bào 2 lần, mỗi lần 10 phút, sau đó ở nhiệt độ phòng, đóng tế bào với 4% BSA trong 30 phút;
Pha loãng alpha-actin theo tỷ lệ 1: 100, sau đó đặt nó trong tủ lạnh 4 ° C để ủ tế bào qua đêm;
5, PBS tuôn ra các tế bào 3 lần, mỗi lần 10 phút, pha loãng kháng thuốc kháng alpha-actin theo tỷ lệ 1: 150, đặt ở 37 ℃ trong 1 giờ;
Rửa bằng PBS 3 lần, mỗi lần 10 phút, sau đó xem hình ảnh dưới kính hiển vi huỳnh quang ngược và chụp ảnh.