Tế bào nhỏ ung thư dạ dày ECC10

Tế bào nhỏ của con người Tế bào ung thư dạ dàyECC10

Giới thiệu:Các dòng tế bào người có nguồn gốc từ ung thư dạ dày (ung thư tế bào nhỏ). Creatinine kinase thể hiện enzyme đồng công trong não, v.v.

Số hàng：Thông tin WS-S1438

quy cách：1 × 10⁶ tế bào/T25 chai nuôi cấy

I. Thông tin cơ bản về tế bào

- Nguồn tế bào: Dạ dày

- Hình thái tế bào: giống bạch huyết, tăng trưởng lơ lửng

- Nội dung tế bào:>1 × 10⁶ tế bào/chai

- Đặc điểm kỹ thuật đóng gói: Chai nuôi cấy T25/Ống lưu trữ đông lạnh 1mL

- Sử dụng sản phẩm: chỉ dành cho nghiên cứu khoa học,Không được sử dụng như một sản phẩm điều trị cho bệnh động vật hoặc con người.

B5-05=giá trị thông số Kd, (cài 2)

1. Môi trường

Môi trường RPMI1640; 10% huyết thanh bò thai; 1% đôi kháng

Serum khuyến cáo:Sản phẩm WinSera FBS500 - WP-002

2. Điều kiện nuôi dưỡng

- Pha khí: 95% không khí+5% CO₂ Nhiệt độ: 37 ℃; Độ ẩm buồng nuôi cấy: 70% - 80%

3. Lưu trữ và lưu trữ đông lạnh

- Dung dịch đông lạnh: 90% huyết thanh bò thai+10% DMSO (hiện tại)

- Điều kiện bảo quản: Nitơ lỏng được bảo quản lâu dài

III. Hình thức vận chuyển và xử lý tiếp nhận

1. Vận chuyển ở nhiệt độ bình thường (T25 chai tế bào sống)

Sau khi nhận được tế bào, trước tiên Thân chai nuôi cấy T25 để khử trùng bề mặt; Đặt chai văn hóa trong một tủ để yên 2-3 giờ; Quan sát mật độ tế bào và tình trạng tăng trưởng, chụp 2-3 bức ảnh rõ ràng để bán; Mật độ tế bào đạt tiêu chuẩn là có thể tiến hành truyền đời, tỷ lệ truyền đời giai đoạn đầu đề nghị là 1:2; Sau khi các tế bào phát triển đầy đủ một lần nữa, một lọ đầy đủ các tế bào được đông lạnh thành 1 ống lưu trữ đông lạnh 1mL và chai còn lại tiếp tục truyền lại; Đề nghị sau khi đông lạnh 2 - 3 tế bào hạt lặp đi lặp lại, lại tiến hành thí nghiệm khuếch đại, tránh do tình huống đột phát dẫn đến tế bào bị đứt đoạn.

Lưu ý: Môi trường vận chuyển (môi trường truyền dịch) không còn có thể được sử dụng để nuôi cấy tế bào, hãy thay thế bằng môi trường mới được điều chế theo các điều kiện nuôi cấy tế bào được hướng dẫn để nuôi cấy tế bào. Nhận được lời khuyên di truyền sau tế bào Chai nuôi cấy T25 được truyền theo tỷ lệ 1: 2.

2. Vận chuyển đá khô (tế bào lưu trữ đông lạnh)

Vận chuyển thường xuyên là 2 ống lưu trữ đông lạnh, đề nghị phục hồi 1 ống, lưu trữ 1 ống dự phòng; Nếu phục hồi chi phí thất bại, hoạt động chi nhánh thứ hai theo đúng quy trình phục hồi tiêu chuẩn của nhà sản xuất; Nếu cả hai lần phục hồi đều thất bại, hãy lưu lại hình ảnh toàn bộ quá trình phục hồi ngay lập tức và thông báo cho doanh số bán hàng.

IV. Các bước nuôi cấy tế bào

1. Phục hồi tế bào đông lạnh

- Đặt ống đông treo tế bào 1 mL trong bồn tắm nước 37 ℃, lắc nhanh cho đến khi tan băng;

- Trộn đều nhẹ nhàng trong ống ly tâm với môi trường 4-6mL;

- Ly tâm 1000RPM 3-5 phút, loại bỏ chất lỏng;

- Treo lại tế bào với môi trường, tiêm vào chai/đĩa có chứa môi trường 6-8mL;

- Nuôi cấy qua đêm ở 37 độ C, ngày hôm sau quan sát tình trạng tăng trưởng và mật độ tế bào dưới kính hiển vi.

2. Đối với việc truyền tế bào dán tường có thể tham khảo các phương pháp sau: (mật độ tế bào 80% - 90% có thể truyền lại)

- Bỏ đi nuôi cấy, rửa sạch tế bào bằng PBS không chứa ion canxi, magiê 1-2 lần.

- Thêm 0,25% (w/v) yi protease - 0,53 mM EDTA trong chai nuôi cấy (chai T25 1 - 2mL, chai T75 2 - 3mL), đặt trong tủ nuôi cấy 37 ℃ tiêu hóa trong 1 - 2 phút (các tế bào khó tiêu hóa có thể kéo dài thời gian tiêu hóa thích hợp), sau đó quan sát quá trình tiêu hóa tế bào dưới kính hiển vi, nếu hầu hết các tế bào tròn và rơi ra, nhanh chóng lấy lại bàn điều khiển, sau vài lần chạm vào chai, thêm 3 - 4ml môi trường chứa 10% FBS để chấm dứt tiêu hóa.

- Nhẹ nhàng đánh đều sau khi hút ra, ly tâm 3-5 phút trong điều kiện 1000RPM, bỏ đi chất lỏng, bổ sung 1-2mL chất lỏng nuôi cấy sau đó thổi đều. Đình chỉ tế bào được chia thành chai T25 mới theo tỷ lệ 1: 2, thêm 6 - 8ml môi trường mới được cấu hình theo yêu cầu của hướng dẫn để duy trì sự tăng trưởng của tế bào, truyền thừa tiếp theo được thực hiện theo tỷ lệ 1: 2 - 1: 5 tùy thuộc vào tình hình thực tế.

3. Đối với các tế bào lơ lửng, di truyền có thể tham khảo các phương pháp sau:

- Lưu ý: Tỷ lệ truyền được đề nghị cho thế hệ thứ cấp là 1: 2, sau này tỷ lệ truyền có thể được quyết định theo nhu cầu của khách hàng.

Phương pháp 1: Thu thập tế bào, ly tâm trong điều kiện 1000RPM trong 4 phút, loại bỏ chất lỏng thượng lưu, bổ sung 1-2mL dung dịch nuôi cấy sau đó thổi đều, truyền dịch tế bào theo tỷ lệ 1:2 đến 1:5 vào đĩa hoặc chai mới chứa 8ml dung dịch nuôi cấy.

Phương pháp 2: Có thể lựa chọn phương thức thay đổi một nửa, sau khi bỏ đi một nửa môi trường, treo các tế bào còn lại lên, chia dịch tế bào theo tỷ lệ từ 1:2 đến 1:3 vào đĩa hoặc chai mới có chứa môi trường 8ml.

4. Đóng băng tế bào: Sau khi nhận được tế bào, nên đóng băng một số hạt giống tế bào trong quá trình nuôi cấy 3 thế hệ đầu tiên để sử dụng trong các thí nghiệm tiếp theo.

V. Lưu ý về an toàn sinh học

1. Tất cả các tế bào động vật được coi là có khả năng gây nguy hiểm sinh học và phải được vận hành trong tủ an toàn sinh học cấp er để bảo vệ cá nhân tốt; Tất cả các chất thải và dụng cụ tiếp xúc với tế bào có thể được loại bỏ sau khi khử trùng.

2- Khi hồi sức tế bào đông lạnh, phải đeo găng tay bảo vệ, mặt nạ bảo vệ Fu và Hu; Ống lưu trữ đông chìm trong nitơ lỏng có thể bị rò rỉ và đổ vào nitơ lỏng. Khi tan băng, khí hóa nitơ lỏng dễ dẫn đến bể chứa, nắp chai bị vỡ gây trầy xước cho nhân viên và các thương tích khác, cần phải thận trọng khi vận hành.