- Thông tin E-mail
- Điện thoại
-
Địa chỉ
Khu mới Phố Đông Thượng Hải
Danh mục sản phẩm
Thượng Hải Bebo Công nghệ sinh học Công ty TNHH
Bộ chiết xuất protein tổng số Tính năng Thận trọng
Có thể đàm phánCập nhật vào05/06
- Mô hình
- Thiên nhiên của nhà sản xuất
- Nhà sản xuất
- Danh mục sản phẩm
- Nơi xuất xứ
Tổng quan
Bộ chiết xuất protein tổng thể chứa các công thức có khả năng hòa tan hiệu quả các thành phần màng tế bào, bao gồm màng tế bào chất, màng nhân và các màng bào quan khác nhau. Hỗn hợp các chất ức chế protease chứa trong bộ dụng cụ này ngăn chặn sự suy thoái protein của protease, cung cấp sự đảm bảo cho việc chiết xuất protein có độ tinh khiết cao.
Chi tiết sản phẩm
Bảo quản nhiệt độ2-8℃
Bộ chiết xuất protein tổng sốLưu ý
1. Chất ức chế protease cũng có thể được lưu trữ ở 2-8 ℃ trước khi sử dụng mà không mở nắp. Lưu trữ ở -20 ℃ sau khi sử dụng nắp mở.
2. Chất ức chế protease là trạng thái rắn ở nhiệt độ thấp 2-8 ℃. Sau khi lấy ra khỏi tủ lạnh, nó trở lại nhiệt độ phòng hoặc tắm nước ngắn 37 ℃. Sau khi trở thành trạng thái lỏng, ly tâm đến đáy ống và mở nắp lại.
3. Sau khi tháo niêm phong thuốc thử, xin hãy sử dụng càng sớm càng tốt!
2. Chất ức chế protease là trạng thái rắn ở nhiệt độ thấp 2-8 ℃. Sau khi lấy ra khỏi tủ lạnh, nó trở lại nhiệt độ phòng hoặc tắm nước ngắn 37 ℃. Sau khi trở thành trạng thái lỏng, ly tâm đến đáy ống và mở nắp lại.
3. Sau khi tháo niêm phong thuốc thử, xin hãy sử dụng càng sớm càng tốt!
Ngày hết hạn
một năm
Phương pháp phát hiện
WB, IP, đồng IP, ELISA, EMSA 等
Mẫu áp dụng
Tế bào/mô động vật
Bộ chiết xuất protein tổng sốĐặc điểm sản phẩm
1. Dễ sử dụng, trích xuất protein từ các tế bào, mô không cần phải trải qua quá trình mài mòn, đông lạnh lặp đi lặp lại, siêu âm phá vỡ và tiền xử lý khác.
2. Quá trình chiết xuất đơn giản và thuận tiện, rút ngắn thời gian chiết xuất protein xuống còn 30 phút - 1 giờ.
3. Với chất ổn định protein, protein chiết xuất ổn định.
4. Khi phát hiện nồng độ protein bằng tia cực tím, nhiễu nền thấp.
5. Tổng chiết xuất protein chứa nhiều thành phần hiệu quả, có thể giải phóng đầy đủ protein bào tương, protein hạt nhân và protein màng, nhưng cũng có thể kết hợp với protein phát hành để ngăn chặn sự kết tủa.
6. Chất ức chế protease ức chế sự suy thoái của protein và công thức ức chế protease được tối ưu hóa. Hỗn hợp ức chế protease chứa 6 chất ức chế protease độc lập AEBSF, Aprotinin, Leupeptin, Pepstatin A, Bestatin, E-64, mỗi chất ức chế cụ thể ức chế một hoặc một số hoạt động protease. Thành phần được tối ưu hóa của hỗn hợp này cho phép nó ức chế gần như tất cả các hoạt động protease quan trọng, bao gồm protease, semiprotase, aspartate protease, propionyl amino peptidase, v.v.
2. Quá trình chiết xuất đơn giản và thuận tiện, rút ngắn thời gian chiết xuất protein xuống còn 30 phút - 1 giờ.
3. Với chất ổn định protein, protein chiết xuất ổn định.
4. Khi phát hiện nồng độ protein bằng tia cực tím, nhiễu nền thấp.
5. Tổng chiết xuất protein chứa nhiều thành phần hiệu quả, có thể giải phóng đầy đủ protein bào tương, protein hạt nhân và protein màng, nhưng cũng có thể kết hợp với protein phát hành để ngăn chặn sự kết tủa.
6. Chất ức chế protease ức chế sự suy thoái của protein và công thức ức chế protease được tối ưu hóa. Hỗn hợp ức chế protease chứa 6 chất ức chế protease độc lập AEBSF, Aprotinin, Leupeptin, Pepstatin A, Bestatin, E-64, mỗi chất ức chế cụ thể ức chế một hoặc một số hoạt động protease. Thành phần được tối ưu hóa của hỗn hợp này cho phép nó ức chế gần như tất cả các hoạt động protease quan trọng, bao gồm protease, semiprotase, aspartate protease, propionyl amino peptidase, v.v.
Ứng dụng sản phẩm
WB, IP, đồng IP, ELISA, EMSA 等
Chuẩn bị dụng cụ
1. Máy ly tâm
2. Dao động
3. Máy san lấp mặt bằng/Máy san lấp mặt bằng
4. Máy trộn Scroll
5. Pipette
6. Tủ lạnh
7. Hộp đá
2. Dao động
3. Máy san lấp mặt bằng/Máy san lấp mặt bằng
4. Máy trộn Scroll
5. Pipette
6. Tủ lạnh
7. Hộp đá
Chuẩn bị thuốc thử
1. Bộ đệm PBS
2. Bộ định lượng protein
2. Bộ định lượng protein
Chuẩn bị hàng tiêu dùng
1. Ống ly tâm
2. Đầu hút
3. Găng tay dùng một lần
2. Đầu hút
3. Găng tay dùng một lần
Thận trọng khi sử dụng
Thuốc thử gắn ống ly tâm nắp vặn xin vui lòng ly tâm một thời gian ngắn trước khi mở nắp, ném chất lỏng trên tường bên trong nắp xuống đáy ống, tránh chất lỏng rơi khi mở nắp.
Chất ức chế protease ở trạng thái rắn ở 2-8 ℃, sau khi lấy từ tủ lạnh trở lại nhiệt độ phòng hoặc tắm nước ngắn 37 ℃, trở thành trạng thái lỏng sau khi ly tâm đến đáy ống và mở nắp.
Tất cả các tác nhân trong quá trình thử nghiệm phải được làm lạnh trước; Tất cả các dụng cụ phải để tủ lạnh - 20 độ C trước khi làm lạnh. Toàn bộ quá trình phải giữ mẫu ở nhiệt độ thấp.
Giải pháp trong quá trình lưu trữ chất ức chế protease, nếu có kết tủa, không ảnh hưởng đến việc sử dụng và sử dụng bình thường sau khi hòa tan.
Nếu bộ dụng cụ không thể được sử dụng hết trong một thời gian ngắn, hỗn hợp ức chế protease không thể được thêm vào tất cả các chiết xuất cùng một lúc.
Bạn có thể thêm vào các chất ức chế protease khác theo yêu cầu thực nghiệm của mình.
Thí nghiệm hạ lưu Nếu tiến hành kiểm tra hoạt động enzyme của protease hoặc phosphatase cụ thể, chất chiết xuất có thể không có chất ức chế protease hoặc chất ức chế phosphatase, chú ý rằng quá trình chiết xuất duy trì hoạt động ở nhiệt độ thấp và rút ngắn thời gian ly tâm.
Tham gia thí nghiệm Western Blot có thể chọn beta-action, GAPDH và Tubulin.
Tốc độ máy ly tâm được biểu diễn bằng lực ly tâm tương đối (RCF, × g) và tốc độ quay mỗi phút (RPM, r/phút), một số máy ly tâm được đặt với RPM và chuyển đổi hiển thị × g, nhưng một số máy ly tâm không có chức năng chuyển đổi tự động. Cần phải chuyển đổi theo công thức sau: g=r × 1,118 × 10-5 × rpm2 (r là bán kính ly tâm hiệu dụng, tức là chiều dài từ trục ly tâm đến vị trí trung tâm dưới cùng của ống thu ly tâm, tính bằng cm) Ví dụ: tốc độ quay là 3000rpm, bán kính ly tâm hiệu quả là 10 cm, thì lực ly tâm tương đối (RCF, × g) là=10 × 1,118 × 10-5 × 30002=1006,2 (× g).
Chất ức chế protease ở trạng thái rắn ở 2-8 ℃, sau khi lấy từ tủ lạnh trở lại nhiệt độ phòng hoặc tắm nước ngắn 37 ℃, trở thành trạng thái lỏng sau khi ly tâm đến đáy ống và mở nắp.
Tất cả các tác nhân trong quá trình thử nghiệm phải được làm lạnh trước; Tất cả các dụng cụ phải để tủ lạnh - 20 độ C trước khi làm lạnh. Toàn bộ quá trình phải giữ mẫu ở nhiệt độ thấp.
Giải pháp trong quá trình lưu trữ chất ức chế protease, nếu có kết tủa, không ảnh hưởng đến việc sử dụng và sử dụng bình thường sau khi hòa tan.
Nếu bộ dụng cụ không thể được sử dụng hết trong một thời gian ngắn, hỗn hợp ức chế protease không thể được thêm vào tất cả các chiết xuất cùng một lúc.
Bạn có thể thêm vào các chất ức chế protease khác theo yêu cầu thực nghiệm của mình.
Thí nghiệm hạ lưu Nếu tiến hành kiểm tra hoạt động enzyme của protease hoặc phosphatase cụ thể, chất chiết xuất có thể không có chất ức chế protease hoặc chất ức chế phosphatase, chú ý rằng quá trình chiết xuất duy trì hoạt động ở nhiệt độ thấp và rút ngắn thời gian ly tâm.
Tham gia thí nghiệm Western Blot có thể chọn beta-action, GAPDH và Tubulin.
Tốc độ máy ly tâm được biểu diễn bằng lực ly tâm tương đối (RCF, × g) và tốc độ quay mỗi phút (RPM, r/phút), một số máy ly tâm được đặt với RPM và chuyển đổi hiển thị × g, nhưng một số máy ly tâm không có chức năng chuyển đổi tự động. Cần phải chuyển đổi theo công thức sau: g=r × 1,118 × 10-5 × rpm2 (r là bán kính ly tâm hiệu dụng, tức là chiều dài từ trục ly tâm đến vị trí trung tâm dưới cùng của ống thu ly tâm, tính bằng cm) Ví dụ: tốc độ quay là 3000rpm, bán kính ly tâm hiệu quả là 10 cm, thì lực ly tâm tương đối (RCF, × g) là=10 × 1,118 × 10-5 × 30002=1006,2 (× g).
Cách sử dụng
Tổng chiết xuất protein mẫu tế bào:
Chiết xuất protein tế bào lơ lửng:
1. Chuẩn bị chiết xuất:
Hỗn hợp ức chế protease 2μl và hỗn hợp ức chế phosphatase 2μl được thêm vào mỗi 500μl chiết xuất protein tổng thể lạnh, trộn đều trên băng dự phòng.
2. Lấy 5 × 106 tế bào, ly tâm ở 4 ℃, 2500 × g trong 5 phút, cẩn thận hấp thụ môi trường, hút khô càng nhiều càng tốt, thu thập tế bào.
3. Rửa các tế bào hai lần với PBS lạnh, hút khô và làm sạch càng nhiều càng tốt sau mỗi lần rửa.
4. Mỗi 5 × 106-1 × 107 tế bào (khoảng 50 mg tế bào/50 μl khối lượng kết tủa tế bào) được thêm vào 500μl chiết xuất protein tổng thể lạnh, sau khi thổi và trộn đều, dao động trong điều kiện 4 ℃ trong 20-30 phút, cho đến khi tế bào phân giải đầy đủ, không có kết tủa tế bào đáng chú ý.
5. Ly tâm ở 4 ℃, 12000 × g trong 15 phút.
6. Hít vào một ống ly tâm sạch sẽ khác, có thể thu được tổng protein.
7. Sau khi định lượng các chất chiết xuất protein nói trên được phân phối trong tủ lạnh -80 ℃ để bảo quản dự phòng hoặc sử dụng trực tiếp cho các thí nghiệm hạ lưu.
Chiết xuất protein tế bào dán tường:
1. Chuẩn bị chiết xuất:
Hỗn hợp ức chế protease 2μl và hỗn hợp ức chế phosphatase 2μl được thêm vào mỗi 500μl chiết xuất protein tổng thể lạnh, trộn đều trên băng dự phòng.
2. Cẩn thận hấp thụ dịch nuôi cấy tế bào dán tường.
3. Rửa các tế bào hai lần với PBS lạnh và hút khô PBS càng nhiều càng tốt sau mỗi lần giặt.
4. Thêm một lượng vừa phải chiết xuất protein tổng hợp lạnh, dao động trong 15-30 phút, cho đến khi tế bào phân hủy đầy đủ, cạo một lần bằng dao cạo tế bào, hút chất lỏng phân hủy vào một ống ly tâm sạch khác.
5. Ly tâm ở 4 ℃, 12000 × g trong 15 phút.
6. Hút Thượng Thanh vào một ống ly tâm sạch sẽ khác, tức là nhận được tổng protein.
7. Sau khi định lượng các chất chiết xuất protein nói trên được phân phối trong tủ lạnh -80 ℃ để bảo quản dự phòng hoặc sử dụng trực tiếp cho các thí nghiệm hạ lưu.
Tổng chiết xuất protein mẫu mô:
1. Chuẩn bị chiết xuất:
Hỗn hợp ức chế protease 2μl và hỗn hợp ức chế phosphatase 2μl được thêm vào mỗi 500μl chiết xuất protein tổng thể lạnh, trộn đều trên băng dự phòng.
2. Lấy 50-100 mg mẫu mô, rửa sạch bằng PBS, sau đó cắt càng nhiều càng tốt bằng dao, thêm 500μl chiết xuất protein tổng thể, san lấp mặt bằng mô/san lấp mặt bằng máy san lấp mặt bằng để không có chất rắn có thể nhìn thấy bằng mắt thường.
3. Hút bùn san lấp mặt bằng mô vào một ống ly tâm sạch trước khi làm mát, dao động trong 10-20 phút ở 4 ℃.
4. Ly tâm trong 15 phút ở 4 ℃, 10000-14000 × g.
5. Hút Thượng Thanh vào một ống ly tâm sạch sẽ khác, tức là nhận được tổng protein.
6. Sau khi định lượng các chất chiết xuất protein nói trên được phân phối trong tủ lạnh -80 ℃ để bảo quản dự phòng hoặc sử dụng trực tiếp cho các thí nghiệm hạ lưu.
Chiết xuất protein tế bào lơ lửng:
1. Chuẩn bị chiết xuất:
Hỗn hợp ức chế protease 2μl và hỗn hợp ức chế phosphatase 2μl được thêm vào mỗi 500μl chiết xuất protein tổng thể lạnh, trộn đều trên băng dự phòng.
2. Lấy 5 × 106 tế bào, ly tâm ở 4 ℃, 2500 × g trong 5 phút, cẩn thận hấp thụ môi trường, hút khô càng nhiều càng tốt, thu thập tế bào.
3. Rửa các tế bào hai lần với PBS lạnh, hút khô và làm sạch càng nhiều càng tốt sau mỗi lần rửa.
4. Mỗi 5 × 106-1 × 107 tế bào (khoảng 50 mg tế bào/50 μl khối lượng kết tủa tế bào) được thêm vào 500μl chiết xuất protein tổng thể lạnh, sau khi thổi và trộn đều, dao động trong điều kiện 4 ℃ trong 20-30 phút, cho đến khi tế bào phân giải đầy đủ, không có kết tủa tế bào đáng chú ý.
5. Ly tâm ở 4 ℃, 12000 × g trong 15 phút.
6. Hít vào một ống ly tâm sạch sẽ khác, có thể thu được tổng protein.
7. Sau khi định lượng các chất chiết xuất protein nói trên được phân phối trong tủ lạnh -80 ℃ để bảo quản dự phòng hoặc sử dụng trực tiếp cho các thí nghiệm hạ lưu.
Chiết xuất protein tế bào dán tường:
1. Chuẩn bị chiết xuất:
Hỗn hợp ức chế protease 2μl và hỗn hợp ức chế phosphatase 2μl được thêm vào mỗi 500μl chiết xuất protein tổng thể lạnh, trộn đều trên băng dự phòng.
2. Cẩn thận hấp thụ dịch nuôi cấy tế bào dán tường.
3. Rửa các tế bào hai lần với PBS lạnh và hút khô PBS càng nhiều càng tốt sau mỗi lần giặt.
4. Thêm một lượng vừa phải chiết xuất protein tổng hợp lạnh, dao động trong 15-30 phút, cho đến khi tế bào phân hủy đầy đủ, cạo một lần bằng dao cạo tế bào, hút chất lỏng phân hủy vào một ống ly tâm sạch khác.
5. Ly tâm ở 4 ℃, 12000 × g trong 15 phút.
6. Hút Thượng Thanh vào một ống ly tâm sạch sẽ khác, tức là nhận được tổng protein.
7. Sau khi định lượng các chất chiết xuất protein nói trên được phân phối trong tủ lạnh -80 ℃ để bảo quản dự phòng hoặc sử dụng trực tiếp cho các thí nghiệm hạ lưu.
Tổng chiết xuất protein mẫu mô:
1. Chuẩn bị chiết xuất:
Hỗn hợp ức chế protease 2μl và hỗn hợp ức chế phosphatase 2μl được thêm vào mỗi 500μl chiết xuất protein tổng thể lạnh, trộn đều trên băng dự phòng.
2. Lấy 50-100 mg mẫu mô, rửa sạch bằng PBS, sau đó cắt càng nhiều càng tốt bằng dao, thêm 500μl chiết xuất protein tổng thể, san lấp mặt bằng mô/san lấp mặt bằng máy san lấp mặt bằng để không có chất rắn có thể nhìn thấy bằng mắt thường.
3. Hút bùn san lấp mặt bằng mô vào một ống ly tâm sạch trước khi làm mát, dao động trong 10-20 phút ở 4 ℃.
4. Ly tâm trong 15 phút ở 4 ℃, 10000-14000 × g.
5. Hút Thượng Thanh vào một ống ly tâm sạch sẽ khác, tức là nhận được tổng protein.
6. Sau khi định lượng các chất chiết xuất protein nói trên được phân phối trong tủ lạnh -80 ℃ để bảo quản dự phòng hoặc sử dụng trực tiếp cho các thí nghiệm hạ lưu.
Phân tích FAQ
1. Nồng độ protein thấp?
Có thể không có cracking khi xử lý một số mẫu mô, dẫn đến nồng độ protein thấp. Chỉ cần kéo dài thời gian xử lý thuốc thử A thích hợp là được. Xử lý trong điều kiện dao động liên tục, không có bộ dao động cũng có thể cách nhau vài phút dùng đầu hút trộn đều.
2. Tốc độ phân giải tế bào chậm?
Để đảm bảo đầy đủ hoạt động của protein thu được từ chiết xuất, chiết xuất sử dụng công thức protein bảo vệ, khả năng cracking nhẹ và một loạt các ứng dụng hạ nguồn. Kéo dài thời gian tách thích hợp là được.
3. Sử dụng phương pháp nào để định lượng protein?
Đề nghị sử dụng phương pháp BCA. Không phù hợp với phương pháp Bradford vì thuốc thử A chứa các thành phần can thiệp vào phương pháp Bradford, dẫn đến định lượng không chính xác. Nếu bạn đã lọc máu hoặc thay đổi hệ thống đệm bằng cột khử muối, bạn có thể sử dụng phương pháp Bradford.
4. Sự lắng đọng keo xảy ra khi chiết xuất?
Đôi khi một lượng nhỏ chất keo trong suốt xuất hiện trong các sản phẩm xử lý chiết xuất protein, một hiện tượng bình thường. Chất keo trong suốt này là phức hợp có chứa DNA của bộ gen, v. v. Trong trường hợp không phát hiện và DNA bộ gen liên kết đặc biệt chặt chẽ với các protein cụ thể, có thể trực tiếp lấy ly tâm và tiến hành các thí nghiệm tiếp theo; Nếu cần phát hiện và liên kết bộ gen với protein đặc biệt chặt chẽ, nó có thể được sonication, 300w/10 giây cách nhau 10 giây, siêu âm trong 3 phút, sau đó ly tâm tẩy rửa cho các thí nghiệm tiếp theo. Sonication là không cần thiết khi phát hiện một số yếu tố phiên mã phổ biến, chẳng hạn như NF-kappaB, p53, v.v.
5. Protein chiết xuất có hoạt động không?
Bộ dụng cụ này không chứa các thành phần khử cặn ion, không phá hủy cấu trúc của protein, không phá hủy các tương tác ban đầu giữa protein, protein duy trì cấu trúc và hoạt động tự nhiên của nó.
Có thể không có cracking khi xử lý một số mẫu mô, dẫn đến nồng độ protein thấp. Chỉ cần kéo dài thời gian xử lý thuốc thử A thích hợp là được. Xử lý trong điều kiện dao động liên tục, không có bộ dao động cũng có thể cách nhau vài phút dùng đầu hút trộn đều.
2. Tốc độ phân giải tế bào chậm?
Để đảm bảo đầy đủ hoạt động của protein thu được từ chiết xuất, chiết xuất sử dụng công thức protein bảo vệ, khả năng cracking nhẹ và một loạt các ứng dụng hạ nguồn. Kéo dài thời gian tách thích hợp là được.
3. Sử dụng phương pháp nào để định lượng protein?
Đề nghị sử dụng phương pháp BCA. Không phù hợp với phương pháp Bradford vì thuốc thử A chứa các thành phần can thiệp vào phương pháp Bradford, dẫn đến định lượng không chính xác. Nếu bạn đã lọc máu hoặc thay đổi hệ thống đệm bằng cột khử muối, bạn có thể sử dụng phương pháp Bradford.
4. Sự lắng đọng keo xảy ra khi chiết xuất?
Đôi khi một lượng nhỏ chất keo trong suốt xuất hiện trong các sản phẩm xử lý chiết xuất protein, một hiện tượng bình thường. Chất keo trong suốt này là phức hợp có chứa DNA của bộ gen, v. v. Trong trường hợp không phát hiện và DNA bộ gen liên kết đặc biệt chặt chẽ với các protein cụ thể, có thể trực tiếp lấy ly tâm và tiến hành các thí nghiệm tiếp theo; Nếu cần phát hiện và liên kết bộ gen với protein đặc biệt chặt chẽ, nó có thể được sonication, 300w/10 giây cách nhau 10 giây, siêu âm trong 3 phút, sau đó ly tâm tẩy rửa cho các thí nghiệm tiếp theo. Sonication là không cần thiết khi phát hiện một số yếu tố phiên mã phổ biến, chẳng hạn như NF-kappaB, p53, v.v.
5. Protein chiết xuất có hoạt động không?
Bộ dụng cụ này không chứa các thành phần khử cặn ion, không phá hủy cấu trúc của protein, không phá hủy các tương tác ban đầu giữa protein, protein duy trì cấu trúc và hoạt động tự nhiên của nó.
