Bộ xét nghiệm virus calicivirus cho mèo

Bộ xét nghiệm virus calicivirus cho mèoĐặc điểm kỹ thuật đóng gói] 25T/hộp&50T/hộp

[Nguyên tắc kiểm tra]

Bộ xét nghiệm virus calicivirus cho mèoBộ dụng cụ này được thiết kế cho các đầu dò mồi và đèn hiệu phân tử cụ thể cho gen này, trong đó phản ứng PCR được thực hiện và giải phóng tín hiệu huỳnh quang trong trường hợp DNA này có trong mẫu được kiểm tra. Sử dụng thiết bị để theo dõi thời gian thực và đầu ra tín hiệu huỳnh quang tương ứng trong quá trình PCR, để đạt được phân tích định tính của kết quả phát hiện.

(Thành phần chính)

[Điều kiện bảo quản và ngày hết hạn] Bảo quản tránh ánh sáng dưới 20 ℃, tránh đóng băng và tan chảy lặp đi lặp lại, thời hạn hiệu lực là 12 tháng.

[Dụng cụ áp dụng] Dòng ABI, Dòng Bio-Rad, Dòng Agilent Stratagene MX, Roche LightCycler R480, Cepheid SmartCycler, Dòng Rotor-Gene, Máy đo PCR định lượng huỳnh quang thời gian thực đa kênh như Hàng Châu Bozi Series.

[Yêu cầu mẫu]

1. Nếu sử dụng mẫu vật ban đầu để thử nghiệm. Mẫu vật (dịch não tủy, máu tĩnh mạch, dịch khớp của bệnh nhân; máu tĩnh mạch của động vật bị bệnh, sữa; khuẩn lạc, rêu, v.v.) nên là mẫu vật ban đầu được thu thập tươi và treo bằng nước khử trùng hoặc nước muối khử trùng.

2. Nếu xét nghiệm PCR được yêu cầu sau khi tăng vi khuẩn, mẫu vật ban đầu nên được tăng vi khuẩn bằng cách sử dụng dung dịch tăng vi khuẩn chọn lọc.

Nếu mẫu vật không thể được kiểm tra ngay sau khi thu thập, nó có thể được đặt trong tủ lạnh 2-8 ℃ qua đêm để bảo quản; Nếu cần bảo quản lâu dài, mẫu vật nên được đông lạnh ở -20 ℃~-80 ℃.

[Phương pháp kiểm tra]

1. Chuẩn bị thuốc thử (khu vực chuẩn bị thuốc thử)

(1) Lấy bộ dụng cụ ra khỏi tủ lạnh, lấy tác nhân cần thiết cho thí nghiệm ra khỏi bộ, tan chảy hoàn toàn và trộn đều và ly tâm ngay lập tức để loại bỏ chất lỏng gắn vào tường ống.

(2) Tính toán số lượng phản ứng (n) cần thiết cho thí nghiệm đó và tính toán số lượng tác nhân khác nhau cần thiết cho thí nghiệm đó dựa trên hệ thống phản ứng được hiển thị trong bảng sau.

n=Kiểm soát âm tính (1T)+Kiểm soát dương tính (1T)+Dự trữ lỗi (1T)+Số mẫu

c) Thêm thuốc thử nói trên vào ống ly tâm vô trùng, trộn đều rồi ly tâm tức thời. Phân phối thuốc thử vào ống phản ứng PCR theo khối lượng 20μL/ống.

(4) Chuyển ống phản ứng PCR đến khu vực xử lý mẫu sau khi đóng nắp ống phản ứng PCR. Các thuốc thử còn lại được đưa trở lại tủ lạnh dưới -20oC để bảo quản đông lạnh.

2. Chuẩn bị mẫu (khu vực xử lý mẫu)

Dùng bộ dụng cụ chiết xuất DNA/RNA chiết xuất axit nucleic là được, thao tác cụ thể được thực hiện theo hướng dẫn sử dụng bộ dụng cụ.

3. Thêm mẫu

Trong các ống mẫu phản ứng PCR được chuẩn bị ở trên, mỗi mẫu DNA được xử lý 5 μl và thể tích cuối cùng 25 μl/ống được thêm vào, và nắp phản ứng PCR được trộn đều sau khi ly tâm tốc độ thấp tức thời, chuyển sang dụng cụ PCR. Kiểm soát âm tính và chăm sóc dương tính thì mỗi bộ 5μL có kiểm soát âm tính hoặc kiểm soát dương tính, thể tích cuối cùng là 25μL/ống, sau khi trộn nắp phản ứng PCR, ly tâm tốc độ thấp tức thời, chuyển sang dụng cụ PCR.

4. PCR (vùng mở rộng PCR)

(1) Lấy ống phản ứng PCR đã chuẩn bị sẵn trong khu vực xử lý mẫu, đặt ở vị trí tương ứng của khe mẫu của máy đo PCR định lượng huỳnh quang thời gian thực và ghi lại thứ tự đặt.

(2) Nhấn bảng để thiết lập các thông số liên quan đến khuếch đại axit nucleic của thiết bị để khuếch đại PCR.

Lưu ý: Máy PCR huỳnh quang dòng ABI không chọn hiệu chỉnh ROX khi thiết lập, thiết lập nhóm dập tắt để chọn None.

REFERENCES [Tên bảng tham chiếu] (

1. Đánh giá hiệu quả của bộ dụng cụ:

(1) Đối chứng dương tính: có đường cong khuếch đại loại S điển hình hoặc giá trị Ct ≤35.

(2) Kiểm soát âm tính: Giá trị Ct>38 hoặc không có giá trị Ct, đường thẳng hoặc đường chéo nhẹ, không có thời gian tăng trưởng theo cấp số nhân.

2. Kết quả tiêu bản phán định:

(1) dương tính: Kết quả xét nghiệm mẫu vật có giá trị Ct ≤ 35 hoặc có thời gian tăng trưởng theo cấp số nhân rõ rệt.

(2) Đáng ngờ: Kết quả xét nghiệm mẫu vật có giá trị Ct trong khoảng 35-38. Tại thời điểm này, mẫu vật nên được kiểm tra lặp lại, chẳng hạn như kết quả thí nghiệm lặp lại giá trị Ct vẫn trong phạm vi 35-38, với thời gian tăng trưởng theo cấp số nhân rõ ràng, nó được đánh giá là dương tính, nếu không thì âm tính.

(3) Âm tính: Kết quả xét nghiệm mẫu vật có giá trị Ct>38 hoặc không có giá trị Ct.

(Giải thích kết quả kiểm tra)

(Những hạn chế của phương pháp kiểm tra)

Kết quả âm tính giả có thể xảy ra khi nồng độ axit nucleic được kiểm tra trong mẫu thử thấp hơn bộ dụng cụ này.

2. Phương thức vận hành không đúng của mẫu vật được kiểm tra trong quá trình thu thập, vận chuyển, lưu trữ và xử lý dễ dẫn đến suy thoái DNA và tạo ra kết quả âm tính giả.

3. mẫu trong quá trình thu thập, vận chuyển, lưu trữ và xử lý xảy ra ô nhiễm chéo, sau đó dễ dàng có được kết quả dương tính giả.

Giới hạn phát hiện sản phẩm là 103 Copies/mL và giá trị CV của sản phẩm là ≤3%.

[Lưu ý]

1. Các phòng thí nghiệm sử dụng bộ dụng cụ này phải được quản lý chặt chẽ theo các quy tắc quản lý phòng thí nghiệm kiểm tra mở rộng gen có liên quan được ban hành bởi các bộ phận liên quan của quốc gia;

2. Để tránh sự suy thoái RNA, quá trình xử lý mẫu phải được vận hành trong điều kiện 0-4 ℃, và kiểm tra trên máy ngay sau khi hoàn thành thí nghiệm; Thiết bị tiêu hao được sử dụng trong quá trình xử lý mẫu phải được xử lý không có ribozyme;

3. Tất cả các mặt hàng trong khu vực là đặc biệt và không được sử dụng chéo để tránh ô nhiễm; Sau khi phát hiện, bàn làm việc nên được làm sạch ngay lập tức;

4. Khi hấp thụ chất lỏng phản ứng, nên cố gắng tránh tạo bọt khí; Trước khi lên máy PCR, cần chú ý kiểm tra xem mỗi ống phản ứng có được che kín hay không, để tránh sự bốc hơi của chất lỏng gây ra kết quả không chính xác;

5. Bộ dụng cụ Tất cả các tác nhân nên được trộn đều và tan chảy đầy đủ ở nhiệt độ bình thường trước khi sử dụng và nên được ly tâm ngay lập tức;

6. Kiểm soát âm tính và dương tính được kết hợp trong bộ dụng cụ nên được chuyển hoàn toàn đến khu vực chuẩn bị mẫu trước khi sử dụng đầu tiên và được lưu trữ riêng;

7. Để ngăn chặn sự can thiệp huỳnh quang, nên tránh tiếp xúc trực tiếp với ống phản ứng PCR bằng tay trần và nên tránh bất kỳ dấu hiệu nào trên ống phản ứng PCR;

8. Đầu hút được sử dụng trong quá trình phát hiện, nên được đánh trực tiếp vào xi lanh chất thải chứa axit hypochloric 10%, ống phản ứng PCR kết thúc phát hiện, tránh mở nắp và khử trùng với các vật phẩm thải khác sau khi vứt bỏ; Bàn làm việc và các vật dụng thí nghiệm khác nhau nên được khử trùng thường xuyên bằng axit hypoclorơ 10%, rượu 75% hoặc đèn UV;

Các thông số liên quan đến việc mở rộng thiết bị phải được thiết lập theo các yêu cầu liên quan của hướng dẫn này; Thuốc thử số lô khác nhau không thể trộn lẫn; và được sử dụng trong thời gian có hiệu lực. Sản phẩm chỉ dùng cho nghiên cứu khoa học.