Nhãn hiệu tế bào biểu mô phế nang loại II của con người

Tế bào biểu mô khí quản ở người

I. Thuộc tính cơ bản của tế bào

Môi trường: với FBS, phụ gia tăng trưởng, Penicillin, Streptomycin, vv

Tần số thay đổi chất lỏng: thay đổi chất lỏng mỗi 2-3 ngày

Đặc tính truyền: Có thể truyền 2-3 thế hệ

Chất lỏng tiêu hóa: 0,25% tryptan leukogenase

Điều kiện nuôi: pha khí: không khí, 95%; CO2，5%

Giới thiệu tế bào: tế bào biểu mô khí quản của con người được phân lập từ mô khí quản; Khí quản (Trachea), một phần của cơ quan hô hấp; Hình ống hình trụ hơi bằng phẳng ở vách sau. Phía trên bằng xương cổ thứ sáu, nối liền với sụn hình vòng; Từ phía dưới đến chỗ giao nhau giữa đốt sống ngực thứ tư, thứ năm (tương đương với mặt phẳng góc ngực), chia làm phế quản chính bên trái, bên phải, chỗ phân nhánh gọi là chạc khí quản. Khí quản chủ yếu do 14 - 16 sụn bán vòng cấu thành, có tính đàn hồi, sụn là vòng sụn hình chữ "C", lỗ hổng về phía sau, các vòng sụn kết nối với nhau bằng dây chằng, lỗ hổng phía sau vòng được kết nối bởi cơ trơn và mô liên kết dày đặc, duy trì trạng thái mở liên tục. Ống lót bằng màng nhầy, bề mặt được bao phủ bởi biểu mô lông mao, chất nhầy tiết ra từ màng nhầy có thể dính vào các hạt bụi hút vào không khí, lông mao liên tục xoay về phía cổ họng để loại bỏ chất nhầy và bụi để làm sạch khí hít vào. Biểu mô khí quản là tuyến phòng thủ đầu tiên của đường thở tiếp xúc với môi trường bên ngoài, không chỉ là tế bào mục tiêu của các tác nhân gây bệnh, tác động của môi trường viêm, mà còn là tế bào hiệu ứng tổng hợp, giải phóng nhiều môi trường viêm và cytokine để tham gia vào phản ứng viêm và miễn dịch đường thở. Các tế bào biểu mô khí quản nguyên thủy được nuôi cấy trong ống nghiệm có sự tương đồng lớn về cấu trúc hình thái và hoạt động chức năng với các mô trong cơ thể và do đó rất quan trọng trong các nghiên cứu cơ bản và lâm sàng.

Ý tưởng về nuôi cấy tách tế bào nguyên thủy:

Tài liệu - Tách rời - Nuôi dưỡng - Xác định

Đầu tiên, mô được lấy ra khỏi cơ thể và phân tán thành các tế bào đơn sau khi xử lý bằng tryptan-albase/collagen, sau đó được nuôi cấy trong môi trường thích hợp để xác định tế bào sau khi tế bào nhân lên một hệ số nhất định.

Các bước thử nghiệm:

Một, lấy chuột đực SD 7 - 10 D, bị trật khớp xương cổ chết, ngâm trong 75% ethanol khử trùng 3 - 5 phút.

Thứ hai, trong một bàn làm việc siêu sạch, đầu chuột được đặt trong một đĩa petri thủy tinh, sau khi mở hộp sọ, toàn bộ não được lấy ra và đặt trong đĩa petri thủy tinh PBS được làm lạnh trước để loại bỏ tiểu não và não giữa.

Thứ ba, lăn bán cầu não chậm trên giấy lọc khô để loại bỏ màng não mềm và mạch máu lớn màng não, rồi đặt vào đĩa thủy tinh PBS mới đựng sẵn.

Bốn, dùng nhíp giải phẫu nhỏ để loại bỏ chất trắng não, mạch máu lớn còn sót lại và màng não mềm, giữ lại vỏ não.

V. Vỏ não được đặt trong DMEM, cắt thành kích thước khoảng 1mm3, đặt vào ống ly tâm 50ml, thêm dung dịch enzyme hỗn hợp I (0,05-0,1% loại II collagen, 0,025-0,05% loại IV collagen, 200-400U DNaseI), sau khi pha trộn 37 ℃ tiêu hóa tắm nước 1-1,5h.

6, nhiệt độ phòng 1 000 × g ly tâm 8 phút, khử chất lỏng.

Bảy, kết tủa thêm 20% BSA lơ lửng nặng, trộn đều, 1000 × g, 20 phút, ly tâm 4 ℃, để làm sạch.

VIII. Kết tủa được thêm vào 4ml hỗn hợp enzyme lỏng II (0,05-0,1% collagen/phân tán enzyme, 0,05-0,1% collagen loại I, 100-300U DNaseI) đình chỉ nặng, trộn đều, tiêu hóa bồn tắm 37 ℃ 0,5-1h, 700 × g nhiệt độ phòng ly tâm 6 phút, khử chất lỏng.

Kết tủa được thêm vào 2ml dung dịch nuôi cấy DMEM lơ lửng và trộn đều, trải trên 12ml 50% Percoll (25.000 × g, 60 phút, 4 ℃), 1000 × g, 4 ℃ ly tâm 10 phút.

X. Mức độ màu trắng và vàng trên lớp hồng cầu gần đáy là đoạn vi mạch máu tinh khiết, sau khi hút DMEM được rửa sạch hai lần (ly tâm 1000 × rpm, 6 phút, nhiệt độ phòng), khử chất lỏng.

Thêm dung dịch nuôi cấy DMEM (20% FBS, 4ug/ml) để treo lại, tiêm vào đĩa tế bào được ủ qua đêm có chứa 5% huyết thanh chuột 37 ℃ 37 ℃ và thay thế môi trường hỗn hợp không chứa chất này sau 24 giờ trong môi trường tĩnh tại 37 ℃, 5% CO2, sau đó thay thế vào ngày hôm sau.

Lưu ý:

1. Nuôi cấy dựa trên điều kiện 4 ℃ có thể được bảo quản trong 3-6 tháng.

2. Trong quá trình nuôi cấy tế bào, hãy cẩn thận để duy trì hoạt động vô trùng.

Trong quá trình nuôi cấy di truyền, thời gian tiêu hóa enzyme yi không nên quá dài, nếu không nó sẽ ảnh hưởng đến thành tế bào và trạng thái tăng trưởng của nó.

4. Đề nghị khách hàng chụp vài bức ảnh tế bào mỗi bội số trong 3 ngày đầu tiên sau khi nhận được tế bào, ghi lại trạng thái tế bào, dễ dàng giao tiếp với bộ phận kỹ thuật; Do nguyên nhân vận chuyển, tế bào nhạy cảm cá nhân sẽ xuất hiện tình huống không ổn định, xin liên hệ với chúng tôi kịp thời, thông báo chi tiết tình huống cụ thể của tế bào, để nhân viên kỹ thuật của chúng tôi theo dõi, thăm lại cho đến khi vấn đề được giải quyết.

Sản phẩm công ty đang bán: