Xét nghiệm apoptosis Kit Tế bào apoptosis Annexin V

Có thể đàm phánCập nhật vào05/06

Mô hình

Thiên nhiên của nhà sản xuất: Nhà sản xuất

Danh mục sản phẩm

Nơi xuất xứ

Tư vấn trực tuyến

Tổng quan

Bộ xét nghiệm apoptosis Annexin V-APC là một protein gắn phospholipid phụ thuộc Ca2+có trọng lượng phân tử 35-36kD, liên kết đặc hiệu với PS ái lực cao được lật ra ngoài màng trong quá trình apoptosis tế bào. PS transversion xảy ra trước khi nhân bị vỡ, phân mảnh DNA và sự xuất hiện của các protein liên quan đến apoptosis, làm cho Annexin V liên kết với PS sớm apoptosis. .....

Chi tiết sản phẩm

Annexin V chếtGiới thiệu Kit thử nghiệm

Nhiệt độ bảo quản:2-8 ℃ tránh ánh sáng

Annexin V chếtBộ phát hiệnLưu ý

1. Không sử dụng lâu dài có thể bảo quản ở nhiệt độ -20 độ C.
2. Chất nhuộm Annexin V-APC tránh đông lạnh lặp đi lặp lại. Nhiều lần đông lạnh sẽ dẫn đến thất bại.
3. Annexin V-APC nhuộm chất lỏng khi cần bảo quản lâu dài có thể được bảo quản sau khi chia nhỏ -20 ℃, tùy thuộc vào việc sử dụng.
4. Sau khi tháo niêm phong thuốc thử, xin hãy sử dụng càng sớm càng tốt!

Ngày hết hạn

1 năm

Phương pháp phát hiện

1. Máy đo tế bào dòng chảy
2. Laser đồng tập trung
3. Kính hiển vi huỳnh quang

Mẫu áp dụng

1. tế bào lơ lửng
2. tế bào dán tường

Tính năng sản phẩm

1. Thuận tiện: có sẵn Flow Cellometer hoặc phát hiện kính hiển vi huỳnh quang;
2. Nhanh chóng: thí nghiệm có thể được hoàn thành trong vòng 1 giờ;
3. Chính xác: có thể phân biệt chính xác tế bào sống, tế bào apoptosis và tế bào hoại tử, và đếm tỷ lệ của các nhóm tế bào.

Ứng dụng sản phẩm

1. Máy đo tế bào dòng chảy
2. Laser đồng tập trung
3. Kính hiển vi huỳnh quang

Chuẩn bị dụng cụ

1. Flow Cellometer hoặc kính hiển vi huỳnh quang hoặc laser co-focus
2. Máy ly tâm
3. Pipette
4. Tủ lạnh
5. Hộp đá

Chuẩn bị thuốc thử

1. Bộ đệm PBS (pH7.4, dung dịch muối đệm phosphate 10mM thường được sử dụng trong phòng thí nghiệm (1X))
Giải pháp muối cân bằng Hank (Hank's Balanced Salt Solution)

Chuẩn bị hàng tiêu dùng

1. Ống ly tâm
2. Đầu hút
3. Găng tay dùng một lần
4. Giấy nhôm

Annexin V chếtBộ phát hiệnThận trọng khi sử dụng

1. Đại lý của ống thuốc thử vi lượng nắp xoắn ốc xin vui lòng ly tâm ngắn trước khi mở nắp, thu thập chất lỏng trên tường bên trong nắp đến đáy ống, tránh mất chất lỏng khi mở nắp dẫn đến lượng thuốc thử không đủ.
2. Xử lý tế bào cần được vận hành cẩn thận, cố gắng tránh thiệt hại nhân tạo cho tế bào. Lực ly tâm dưới điều kiện không tổn thất tế bào càng nhỏ càng tốt, tế bào treo nặng là động tác phải nhẹ nhàng, tránh nhiều lần thổi kịch liệt. Không sử dụng Scroll Oscillator.
3. Annexin V-FITC (etc) và Propidium iodide (etc) là các chất nhạy cảm với ánh sáng, trong khi hoạt động, hãy cẩn thận để tránh ánh sáng, giảm thiểu thời gian chúng tiếp xúc với ánh sáng. Có thể sử dụng hộp đá có nắp đậy hoặc giấy nhôm để tránh ánh sáng nếu cần thiết. Giữ các tế bào trong môi trường tránh ánh sáng sau khi đánh dấu. Tiếp xúc ngắn với ánh sáng (<30 giây) trong quá trình pipet là chấp nhận được.
4. Vì apoptosis là một quá trình nhanh chóng và năng động, phân tích được thực hiện ngay sau khi nhuộm.

5. Phát hiện apoptosis bằng bộ dụng cụ Annexin V-FITC (v.v.) cần nhắm mục tiêu vào các tế bào sống. Không cố định các tế bào, hoạt động cố định có thể gây nhiễu kết quả.

Phương pháp sử dụng

Mẫu nhuộm:
1. Thu thập ly tâm các tế bào lơ lửng. Máy ly tâm 300 × g -500 × g lực, 2-8 ° C, thời gian ly tâm 5 phút, môi trường bị bỏ rơi.
2. Rửa tế bào hai lần với PBS lạnh. (300 × g -400 × g, 2-8 ° C, thời gian ly tâm 5 phút để thu thập tế bào).
3. Đình chỉ các tế bào với 100 μl 1X Annexin V ràng buộc ở nồng độ khoảng 1-5 X 106 cells/ml.
4. Thêm 5 μl Annexin V-APC nhuộm vào hệ thống treo tế bào, ủ trong 5-15 phút trong điều kiện tránh ánh sáng 2-8 ° C sau khi trộn đều nhẹ nhàng.
5. Ủ nhẹ nhàng trong điều kiện tránh ánh sáng 2-8 ° C trong 1-3 phút sau khi thêm dung dịch nhuộm PI (hoặc 7-AAD). (Bước này chọn làm, căn cứ vào nhu cầu thí nghiệm cũng có thể chỉ làm đơn nhuộm APC).
Thêm 400μl PBS hoặc 1X Annexin V bondage và trộn đều.
7. Phát hiện ngay lập tức với Flow Cellometer.

Phân tích Flow Cellometer:
Các tế bào được xử lý tại thời điểm này có thể được phân tích trên máy đo tế bào dòng chảy.
Dựa theo thao tác kiểm tra apoptosis thông thường là được.
Annexin V-APC có bước sóng kích thích huỳnh quang 652 m, bước sóng phát xạ 670 m; PI có bước sóng kích thích huỳnh quang 535 m, bước sóng phát xạ 620 m.

Trước khi thử nghiệm trên máy bay, cần chuẩn bị mẫu QC với các tế bào được kiểm tra để thiết lập bù huỳnh quang của máy đo dòng chảy và thiết lập phạm vi của cửa chéo:
(I) Các tế bào không được chuyển đổi như GFP
① Ống trắng: tế bào nhóm đối chứng âm tính, không có tế bào nhuộm. Không có Annexin V/APC, PI. Để điều chỉnh điện áp.
② Ống đơn nhiễm: Các tế bào có apoptosis rõ ràng, chỉ được nhuộm bằng Annexin V/APC. Để điều chỉnh bồi thường.
Ống nhuộm đơn: Có tế bào chết rụng rõ rệt, chỉ thêm màu PI. Để điều chỉnh bồi thường
④ Ống phát hiện: Các tế bào điều trị được kiểm tra, cộng với Annexin V/APC, PI. Sau khi điều chỉnh bù điện áp bằng ống trống và ống nam đơn, bạn sẽ có được dữ liệu dòng chảy cần thiết.

(II) Chuyển đổi tế bào GFP
① Ống trắng không nhiễm: tế bào không nhiễm, tế bào kiểm soát âm tính, tế bào không nhiễm. Không có Annexin V/APC, PI. Để điều chỉnh điện áp.
② Chuyển sang ống trắng GFP: Chuyển sang các tế bào nhóm đối chứng của GFP, các tế bào không bị nhuộm. Không có Annexin V/APC, PI. Để điều chỉnh bồi thường
③ Ống đơn nhiễm không chuyển đổi: Các tế bào không chuyển đổi và apoptosis rõ ràng, chỉ được nhuộm bằng Annexin V/APC. Để điều chỉnh bồi thường.
④ Ống nhuộm đơn không chuyển đổi: Các tế bào không chuyển đổi và có apoptosis rõ ràng, chỉ được nhuộm bằng PI. Để điều chỉnh bồi thường
Ống thử nghiệm: Các tế bào được kiểm tra, cộng với Annexin V/APC, PI. Sau khi điều chỉnh bù điện áp bằng ống trống và ống nam đơn, bạn sẽ có được dữ liệu dòng chảy cần thiết.

Phân tích FAQ

Trong quá trình thử nghiệm, Annexin V không có màu hoặc có tỷ lệ dương tính thấp. Những lý do có thể là:
1. Flow Cellometer/Microscope được thiết lập không đúng cách để phát hiện. Điều chỉnh sử dụng các thiết lập công cụ thích hợp.
2. Xác định xem chất gây cảm ứng trong thí nghiệm có thể tạo ra apoptosis hay không. Điều này có thể được loại trừ bằng cách thiết lập kiểm soát thuốc dương tính với tác dụng gây ra apoptosis chính xác.
3. Các tế bào không bắt đầu apoptosis. Xác định lại thời điểm khởi động apoptosis sau khi cảm ứng (thí nghiệm thời gian).
4. Số lượng tế bào hơi ít. Tăng số lượng tế bào.
5. Tế bào dán tường tiêu hóa không đúng. Sự kết hợp của Annexin V và PS đòi hỏi các ion Ca2+trong dung dịch liên kết có chứa Ca2+, quá trình tiêu hóa EDTA sẽ ảnh hưởng đến nhuộm màu, khuyến nghị sử dụng không có EDTA hoặc rửa sạch bằng PBS sau khi tiêu hóa.

Tỷ lệ dương tính trong quá trình thí nghiệm hơi cao. Những lý do có thể là:
1. Flow Cellometer/Microscope được thiết lập không đúng cách để phát hiện. Điều chỉnh sử dụng các thiết lập công cụ thích hợp.
2. Sức sống của tế bào quá kém. Các thí nghiệm cho thấy tỷ lệ tế bào dương tính kép AnnexinV+/PI+sau khi nhuộm các tế bào đối chứng không gây ra apoptosis là quá cao, có thể là do chính các tế bào có sức sống kém. Đề nghị dùng màu xanh Đài Loan để tính toán sức sống của tế bào, tế bào từ chối màu xanh Đài Loan nên lớn hơn 95%. Nếu sức sống thấp, nên phục hồi lại tế bào, thông thường các tế bào vừa phục hồi phải được truyền ít nhất 3 lần trước khi tiến hành thí nghiệm.

Sản phẩm tương tự Khuyến nghị