110 8503-1 3AAV Tỷ lệ vỏ rỗng Cột tách Saidoris BIA

Hôm nay, chúng ta sẽ xem xét lý do tại sao chọn cột tổng thể tốt hơn so với cột làm đầy hạt xốp truyền thống khi thực hiện tối ưu hóa axit nucleic?Lời bài hát: Put A FirstSản xuất toàn bộ cột tinh khiết axit nucleic nguyên tắc hoạt hình, hình ảnh sống động và dễ hiểu, nhiều điểm quan trọng trong bài viết này, được mô tả trong hoạt hình. Nếu như xem xong hoạt hình, không có hứng thú, vậy không cần phải xem văn tự phía dưới nữa, bởi vì văn chương quá dài, tốn thời gian tốn sức.

=Cột đầy hạt xốp và cột tích hợp

Các khái niệm cơ bản về khuếch tán và đối lưu

Truyền khuếch tán trong môi trường xốp

Trong sắc ký, khoảng cách giữa pha cố định và pha chảy là rất nhỏ, ở cấp độ nano đến micron, nhưng khoảng cách này là rất lớn đối với môi trường xốp dựa trên sự khuếch tán để đạt được quá trình truyền khối lượng của các phân tử sinh học. Trong cột sắc ký chứa đầy các hạt xốp,Sự khuếch tán là cách các phân tử hòa tan di chuyển vào và ra khỏi bên trong khẩu độ hạt（Bởi vì tốc độ dòng chảy bên trong khẩu độ là 0），Các phân tử dung môi càng lớn, sự khuếch tán càng chậm, thì khả năng liên kết động của môi trường xốp pha cố định càng thấp.

Hơn nữa,Trong sắc ký hạt xốp, sự tương tác của khối lượng đối lưu và khối lượng khuếch tán cũng có thể dẫn đến giảm khả năng liên kết của môi trường pha cố định. Nó có một khoảng thời gian rất ngắn để khuếch tán vào bên trong các hạt xốp trước khi đối lưu cuốn trôi các đại phân tử sinh học. Tốc độ dòng chảy càng nhanh, thời gian cửa sổ sẽ càng ngắn, chất tan không kịp khuếch tán vào bên trong khẩu độ hạt, nó đã bị cuốn trôi bởi đối lưu, vì vậy khả năng kết hợp của hạt sẽ thấp hơn. Việc giảm công suất liên kết của môi trường pha rắn sắc ký do giảm hệ số khuếch tán đại phân tử sinh học có thể được bù đắp bằng cách giảm tốc độ dòng chảy. Tổng kết lại,Trong môi trường hạt xốp, công suất kết hợp cố định tỷ lệ nghịch với tốc độ dòng chảy và kích thước dung môi。

Chuyển khối lượng không đồng nhất xảy ra trong các hạt xốp và nếu tốc độ dòng chảy quá nhanh, quá trình khuếch tán chậm không thể đạt được sự cân bằng nồng độ của các phân tử hòa tan bên trong khẩu độ hạt và giữa các lỗ rỗng hạt.

Ảnh hưởng của tốc độ dòng chảy đối với khả năng liên kết động của môi trường pha cố định. Trái: Hiệu quả truyền tải vật liệu khuếch tán giảm do tốc độ dòng chảy tăng và khả năng kết hợp của môi trường xốp giảm khi tốc độ dòng chảy tăng. Bên phải: trong cột tổng thể là chất đối lưu, công suất kết hợp của môi trường pha rắn không bị ảnh hưởng bởi tốc độ dòng chảy. Lưu ý: Đường cong ở đây được gọi là Breakthrough Curve, tọa độ dọc đề cập đến lượng protein bị mất trong tổng số protein do quá tải và tọa độ ngang đề cập đến lượng protein được nạp trên mỗi ml ma trận (mg protein load/medium volume (mg/ml))

Sự khác biệt giữa khẩu độ trung bình pha rắn và diện tích bề mặt kết hợp

Các chất đại phân tử, chẳng hạn như axit nucleic, có khả năng liên kết cao hơn trong toàn bộ cột.Cột tổng thể cung cấp cho các đại phân tử sinh học một liên kết lớn hơn diện tích bề mặt liên quan. Đối với cột tổng thể, toàn bộ diện tích bề mặt của đường ống bên trong có thể được liên kết bởi các phân tử hòa tan.

Trong cột sắc ký môi trường xốp, các phân tử dung môi có thể tiếp cận toàn bộ diện tích bề mặt bên ngoài hạt mà không gặp trở ngại, nhưng diện tích bề mặt bên ngoài chỉ chiếm 2% diện tích bề mặt bên trong khẩu độ hạt. Chỉ có khẩu độ hạt lớn hơn mới có thể chứa các phân tử hòa tan lớn hơn, nhưng,Để các phân tử dung môi liên kết không giới hạn với bề mặt bên trong của khẩu độ hạt, cần phải có khẩu độ trung bình của hạt lớn hơn mười lần so với các phân tử dung môi.Nhiều. Rất hiếm khi môi trường xốp có khẩu độ trên 100nm, vì khẩu độ quá lớn làm giảm sự ổn định của hạt.

Kích thước dung môi và kích thước khẩu độ hạt ảnh hưởng nghiêm trọng đến khả năng liên kết của phương tiện truyền thông

Plasma DNA hấp phụ trên bề mặt của môi trường

Vì vậy,Từ chất lượng kết hợp của khẩu độ hạt và diện tích đơn vị trung bình,Cột tổng thể phù hợp hơn với dung môi phân tử lớnBởi vì nó có thể cung cấp dung lượng kết hợp môi trường cao hơn. VàĐối với phân tử nhỏ（lòng trắng trứng）Nói cách khác, môi trường đa lỗ có khả năng kết hợp hiệu quả hơn.。

Sự khác biệt về công suất liên kết của các phân tử dung môi có kích thước khác nhau trong cột tổng thể và môi trường xốp

Laminar trong cột tích hợp và nhiễu loạn trong môi trường xốpDo sự hiện diện của ma sát, tốc độ dòng chảy bề mặt của môi trường là 0, càng xa bề mặt môi trường, tốc độ dòng chảy lớp càng nhanh, gây ra sự phân tán của dòng chảy lớp.

Phân tán là kẻ thù của độ phân giải sắc ký。Trong cột tổng thể, chỉ có sự phân tán tầng mờ nhạt tồn tạiĐể nó có thể hòa tan với các phân tử lớn nhỏ, với tốc độ dòng chảy khác nhau,Tất cả đều có độ phân giải sắc ký tốtNgược lại,Nhiều nguồn phân tán hơn và ở mức độ nghiêm trọng hơn được tạo ra trong môi trường xốpChủ yếuBao gồm khuếch tán không hiệu quả và phân tán xoáy。Với sự gia tăng tốc độ dòng chảy, sự gia tăng của các phân tử hòa tan, sự khuếch tán càng chậm, mức độ phân tán tổng thể càng nghiêm trọng,Độ phân giải càng thấp。

Các phương tiện truyền thông khác nhau, tốc độ dòng chảy khác nhau, gây ra các loại phân tán khác nhau, do đó ảnh hưởng đến độ phân giải sắc ký.Độ phân giải của cột tổng thể sẽ không bị ảnh hưởng bởi các phân tử hòa tan và tốc độ dòng chảy

Lực cắt xoáy được tạo ra bởi khoảng cách hạt xốp

Tóm tắt

Cột tích hợp được sử dụng như một pha cố định sắc ký thế hệ thứ 4, có lợi thế đặc biệt trong việc tách nhanh các đại phân tử sinh học tinh khiết so với môi trường xốp truyền thống, tính chất tinh khiết vượt trội của cột tổng thể được xác định bởi các đặc tính nội tại, dựa trên cách truyền khối lượng đối lưu và khả năng liên kết hiệu quả cao (đặc biệt là các đại phân tử sinh học); Độ phân giải cao không phụ thuộc vào kích thước dung môi, tốc độ chất lỏng; Không giới hạn khẩu độ, diện tích bề mặt có thể kết hợp rộng rãi; Lực cắt yếu. Việc tiếp cận các phân tử DNA và RNA plasmid chất lượng cao và tinh khiết là một nguồn quan trọng của quá trình đối với vắc-xin DNA hoặc vắc-xin RNA. Do khối lượng và đường kính khổng lồ, việc phát triển các quá trình tinh chế phân tử DNA plasmid hoặc RNA là một lựa chọn rất tốt khi các cột tổng thể hoạt động * nhiều hơn được phát triển.