Theo thống kê, gần80%Các chất hữu cơ và vô cơ có thể được tách ra bằng sắc ký lỏng hiệu quả cao, trong đóC18Cột sắc ký là loại cột sắc ký phổ biến nhất được sử dụng trong HPLC. Dưới đây.C18Giới thiệu về lựa chọn, bảo dưỡng và sửa chữa cột sắc phổ.

Một,C18Lựa chọn cột

C18Lựa chọn chủ yếu xem xét2Một vấn đề, đó là ảnh hưởng của chất độn cột và quy cách cột đối với cột sắc phổ.

Các tính chất vật lý của chất độn cột có ảnh hưởng quan trọng đến hành vi sắc ký của chất độn. Các tính chất vật lý chính của chất độn bao gồm: độ hạt, khẩu độ, khối lượng lỗ, hóa học pha liên kết, hàm lượng carbon và xử lý alkyl hóa.

(1)Độ hạt đề cập đến kích thước của đường kính hạt của chất độn cột. Trên thực tế, kích thước hạt được đánh dấu trên cột sắc ký là một giá trị trung bình. Như kích thước hạt.5μmTuy nhiên, không phải tất cả các hạt trong cột đều có đường kính.5μmTrên thực tế, có một mức độ phân bố hạt. Độ phân bố này có tác dụng quan trọng đối với việc chống áp lực của cột và hiệu ứng của cột. Nói chung, độ hạt trung bình càng nhỏ, độ phân bố hạt càng nhỏ, hiệu ứng cột sắc ký càng cao và áp suất ngược càng cao. hiện tạiC18Kích thước hạt đóng gói cột trong4～10μmGiữa.

(2)Kích thước lỗ đề cập đến khoảng cách lỗ giữa các hạt đóng gói. Khẩu độ nói chung là khẩu độ trung bình của chất độn. Sự phân bố đường kính lỗ chân lông trung bình sau khi đóng gói hình cầu tương đối hẹp, cấu trúc giường cột đồng đều, hiệu quả cột cao và khả năng tái tạo tốt; Bao bì vô định hình phân bố khẩu độ trung bình rộng hơn, cấu trúc giường cột không đồng đều, tốc độ tuyến tính pha dòng chảy không đồng đều, dải phổ mở rộng. Kích thước khẩu độ trung bình có ảnh hưởng lớn đến việc tách các hợp chất đại phân tử, có thể có hiệu ứng thoát phân tử khi tách các mẫu có chứa các phân tử lớn hơn hoặc có hiệu ứng hấp phụ ảnh hưởng đến tỷ lệ phục hồi và độ chính xác định lượng. Do đó, khi tách các mẫu như protein hoặc polypeptide bằng sắc ký phản chiếu, nên cân nhắc chọn khẩu độ lớn.(như30 nm)Chất độn trụ phản chiếu. Khối lượng lỗ như một thông số của tính xốp silicone, nó có thể được sử dụng làm tham chiếu khi phân tích các hợp chất phân tử lớn hơn, và khối lượng lỗ lớn hơn của chất độn cột phản xạ được chọn.

(3)Chất độn pha liên kết hóa học chiếm một vị trí cực kỳ quan trọng trong sắc ký lỏng hiệu quả cao. Nó có thể liên kết các nhóm hữu cơ có phân cực lớn hơn và sử dụng các dung môi có phân cực nhỏ hơn làm pha chảy. Bạn cũng có thể liên kết các nhóm hữu cơ có tính phân cực nhỏ, chọn dung môi có tính phân cực lớn hơn làm pha lưu động.C18Cột sắc ký là loại liên kết silan hóa(Si-O-Si-C)Tồn tại, loại phản ứng liên kết này hiện nay được ứng dụng phổ biến nhất. Chẳng hạn như mười tám alkyl trichlorosilane và silicone đa lỗ đầy đủM-Porasil-C18Phản ứng tạo ra pha liên kết hóa học alkyl, tên thương mại làM-Bondapak-C18。

(4)Hàm lượng carbon là hàm lượng carbon trong chất độn. Kỹ thuật đo lường truyền thống là làm nóng chất độn cho đến khi phá vỡ liên kết hydrocarbon, sau đó tính toán hàm lượng carbon bằng cách xác định trọng lượng bị mất hoặc carbon dioxide hình thành. Hàm lượng carbon có thể được tăng lên bằng cách tăng chiều dài của liên kết carbon hoặc bằng cách tăng mật độ liên kết. Hàm lượng carbon tăng và giá trị giữ lại của cột tăng lên. Hành vi sắc ký của pha liên kết có liên quan đến mật độ liên kết, cũng liên quan đến mật độ silicone và diện tích bề mặt của chất độn, mật độ của chất độn càng cao, lượng silicone cần thiết để lấp đầy cột càng nhiều, hàm lượng carbon của cột càng cao. Nếu dùng2Các loại chất độn có mật độ khác nhau và hàm lượng carbon giống nhau sẽ làm đầy các cột, và hành vi giữ lại của chúng sẽ khác nhau rõ rệt. Do đó, không đủ để dự đoán hành vi sắc ký chỉ bằng hàm lượng carbon.

(5) C18Thuốc thử silan hóa là một trong những lớn hơn2 nmCác phân tử lớn, do đó, sẽ được liên kết với một cơ sở silanol liền kềC18Thuốc thử silan hóa tạo ra sức đề kháng lập thể nghiêm trọng. Kết quả là có một lượng lớn các nhóm silanol còn lại trên bề mặt silica gel mà không phản ứng với các thuốc thử silic hóa, và các nhóm silanol phân cực này, trong một số điều kiện sắc ký nhất định, tương tác với các hợp chất cơ bản gây ra sự kéo dài hình núi, có thể ảnh hưởng đến kết quả phân tích định lượng. Những vấn đề này có thể được khắc phục một phần bằng cách xử lý alkyl hóa. Quá trình alkyl hóa là một phản ứng độc lập được thực hiện trên pha liên kết để giảm nhóm silanol trên bề mặt silica gel. Các phân tử nhỏ được sử dụng để xử lý alkyl(như trimethylsilane)Thuốc thử, sức cản không gian của nó nhỏ hơn nhiều.C18Nhóm. Hầu hết các giai đoạn cố định chỉ30%Vị trí liên kết có thể được ghi đè. Thông qua một số tác nhân hóa học cực kỳ hoạt động và điều kiện phản ứng đặc biệt, mức độ bao phủ cao nhất được báo cáo là có thể đạt được.50%. Một sự hiểu biết tốt về các đặc tính vật lý của pha liên kết silicone sẽ giúp chọn cột sắc ký phù hợp trong phản ứng của sắc ký lỏng hiệu quả cao. Nhìn bề ngoàiC18Mặc dù các nhóm chức năng hóa học giống nhau, nhưng trên thực tế các thương hiệu khác nhauC18Hiệu suất cột có thể khác nhau đáng kể, dẫn đến kết quả tách biệt khác nhau.

Việc lựa chọn chất độn cột liên quan đến khả năng tách sắc ký, trong khi việc lựa chọn thông số kỹ thuật cột ảnh hưởng trực tiếp đến tốc độ phân tích, khả năng tách, khả năng phát hiện và tiêu thụ dung môi trên mỗi phân tích, v.v. Thông số kỹ thuật cột bao gồm hai khía cạnh: đường kính bên trong cột và chiều dài cột. Đường kính bên trong của cột, loại phân tích thường là2～6 mm,Loại chuẩn bị20 mmNgười lớn có thể đạt tới.80 mm; Chiều dài cột, loại phân tích5～30 cm,Loại chuẩn bị15～50 cm. Nói chung, đường kính bên trong cột không ảnh hưởng đến mối quan hệ giữa mức độ tách và thời gian phân tích. Ngày nay, công nghệ cột đã phát triển để các cột có đường kính bên trong cột khác nhau có thể có hiệu suất tương tự. Các cột có đường kính bên trong khác nhau lại có đặc điểm riêng, đối với cùng một thời gian phân tích và độ phân tách mà nói, cột có đường kính bên trong lớn tiêu hao nhiều dung môi hơn cột có đường kính bên trong nhỏ. Mặt khác, các cột có đường kính bên trong nhỏ hơn cũng yêu cầu ít mẫu hơn cho cùng một tín hiệu phát hiện. Do đó, trong số lượng mẫu có *, có thể sử dụng cột đường kính trong nhỏ. Chiều dài cột tăng mặc dù có thể cải thiện hiệu quả tách, nhưng lực cản cũng theo đó tăng lên, phải nâng cao áp suất đầu vào. Áp suất cột là trở ngại chính ảnh hưởng đến cả việc tăng độ tách và giảm thời gian phân tích. Độ phân tách, thời gian phân tích và áp suất cột ba điều kiện lẫn nhau, chọn tốt hai trong số đó, thì3Một nhân tố cũng đã chọn xong. Cột dài có thể cho độ phân ly cao, cột ngắn có thể cung cấp tách biệt nhanh chóng, chúng ta có thể chọn cột sắc ký thích hợp theo tình hình mẫu.

C18Nguyên tắc cơ bản của việc lựa chọn cột:

(1)Việc lựa chọn chất độn được xử lý bằng cách kiềm hóa niêm phong có thể ngăn chặn hiện tượng kéo dài của các hợp chất kiềm.

(2)Chọn cột có hàm lượng carbon cao, tăng giá trị lưu giữ.

(3)Chọn bài viết ngắn hơn(như5 cm，7,5 cm)。

(4)Chọn chất độn với kích thước hạt nhỏ.

(5)Đối với các thành phần có trọng lượng phân tử lớn, hãy chọn các cột có kích thước lỗ lớn.

Hai,C18Sử dụng hàng ngày và bảo trì cột

Trong công việc phân tích tách hàng ngày, việc sử dụng cột sắc ký đúng cách có ảnh hưởng trực tiếp đến tuổi thọ của cột sắc ký hay không. Giới thiệuC18Những điều cần lưu ý trong quá trình sử dụng hàng ngày của cột.

(1)Khi xếp dỡ, thay thế cột, hành động phải nhẹ, thắt chặt đầu nối phải vừa phải. Rung động cơ học mạnh phải được ngăn chặn để không tạo ra khoảng trống trên giường cột.

(2)Nếu dụng cụ được sử dụng để phân tích thông thường, các loại mẫu bị hạn chế, nhưng số lần phân tích nhiều hơn, bạn có thể cấu hình cho từng loại phân tích thông thường.1Cột chuyên dụng, như vậy giúp kéo dài tuổi thọ của cột.

(3)Nếu sử dụng thiết bị điều khiển nhiệt độ cột, cần chú ý để nóng lên sau khi đi vào pháp dòng chảy.

(4)Pha lưu động trước khi sử dụng cần tiến hành xử lý khử khí, để tránh giảm hiệu quả cột và ảnh hưởng đến việc phát hiện. Dung dịch mẫu cần được xử lý trước và lọc thích hợp để giảm ô nhiễm cột và tắc nghẽn.

(5)Khi thay thế các loại pha chảy, cần chú ý đến độ hòa tan lẫn nhau của dung môi để ngăn ngừa hiện tượng muối phân.

(6)Áp suất vận hành thực tế của cột phải thấp hơn áp suất tối đa khi đóng gói, tốt nhất là dưới một nửa áp suất tối đa. thường không vượt quá20 593.965～29 419,95 kPa. ở áp suất thấp(≤14 709,975 kPa)Sử dụng phạm vi, có thể giữ được hiệu quả trụ cao trong thời gian dài.

(7) C18Cột sắc ký thuộc về cột sắc ký liên kết không phân cực, pha chảypHGiá trị phải được kiểm soát chặt chẽ trong2～7Trong lúc đó, để tránh làm hư hại cột trụ.

(8)Sau khi hoàn thành công việc phân tích tách, không nên ngừng hoạt động ngay lập tức, cần phải rửa sạch hệ thống phân tích sắc ký kịp thời, nói chung0,5 giờTrên đây, để loại bỏ tạp chất trong cột sắc phổ.

(9)Nếu có muối trong pha chảy, trước tiên hãy rửa kỹ bằng nước. Nếu là Amino(như trimethylamine hoặc tetrabutylamine)Thêm vào dòng chảy, để sử dụng50%Methanol và0.05%Dung dịch axit photphoric trộn dung môi để rửa sạch, không chỉ với nước.

(10) C18Thông thường dùng methanol làm dung môi bảo quản, đề phòng cột khô nứt mà hư hỏng. Nghiêm cấm giữ nước hoặc dung dịch đệm trong dòng chảy sắc ký trong một thời gian dài.

(11)Chọn phù hợpC18Cột bảo vệ để bảo vệ cột phân tích khỏi các hạt tạp chất và các chất gây nhiễu hấp phụ không thể đảo ngược. Độ hạt của chất độn bên trong cột bảo vệ phải phù hợp với độ hạt của chất độn cột phân tích.

(12)Thời gian bảo quản cột không nên quá dài. Ngắn hạn không cầnC18Cột, rửa bằng methanol30～60 phútSau đó niêm phong hai đầu trụ. Cột không dùng trong thời gian dài, một là áp dụng phương pháp rửa định kỳ, rồi bịt kín; Hai là sau khi rửa, hai đầu cột đều được trang bị1Chỉ có một công suất nhất định chứa đầy methanol(Chỉ lắp một đầu thôi.)Để bổ sung sự bốc hơi của dung môi trong cột trong thời gian lưu trữ dài hơn.

Ba,C18Sửa chữa cột

Cột sắc ký trong quá trình sử dụng hàng ngày, mặc dù được bảo vệ nghiêm ngặt, mẫu và pha chảy mặc dù đã được xử lý trước, nhưng sau một thời gian dài sử dụng, vẫn khó tránh được ô nhiễm cột, mất pha cố định, nút thắt, sụp đổ cột và giảm hiệu quả cột, v.v. Một số có thể được sửa chữa để khôi phục một phần hiệu ứng cột.

1,Công nghệ tái tạo ô nhiễm cột

Sau khi ô nhiễm cột sắc ký, nó có thể được rửa sạch với dung môi thích hợp để tái tạo hiệu ứng cột.C18Cột phương pháp rửa tái sinh thông thường là: tương ứng với methanol, trichlorojia-ane, methanolNước mỗi60 mLLần lượt qua cột sắc ký, rồi dùng methanol.60 mLSau khi cân bằng cột sắc ký, hiệu ứng cột sẽ trở lại bình thường. Khi cần thiết, theo bản chất ô nhiễm cột(Chẳng hạn như ô nhiễm hữu cơ, ô nhiễm muối, v.v.)Áp dụng.0,05 mol / L H2SO4、0,5 mol / L H3PO4hoặc0,1 mol / L EDTARửa sạch muối natri, sau đó rửa sạch bằng nước và cuối cùng cô lập sau khi cân bằng cột sắc ký với methanol. Đối với ô nhiễm nặngC18cột, có thể sử dụng nước, methanol, chloroform, ethane sau khi rửa lần lượt, đảo ngược theo thứ tự và rửa lại1Mỗi lần sử dụng dung môi60 mLKhông kết nối với máy dò, cuối cùng niêm phong bằng cột sắc phổ cân bằng Giáp Thuần.

2,Sửa chữa ô nhiễm cột

Khi tái tạo ô nhiễm cột không hiệu quả hoặc ô nhiễm cột được biết là nghiêm trọng, có thể sử dụng phương pháp sửa chữa cột để giải quyết, nhưng độ sâu ô nhiễm cột không nên vượt quá5 mm. Phương pháp là đào một phần ô nhiễm bằng xẻng nhỏ được chế tạo đặc biệt, sau đó trộn pha cố định và dòng chảy giống như chất độn cột để tạo thành bột nhão, sau đó cẩn thận bổ sung pha cố định bột nhão vào phần bị đào(Cố gắng làm cho giai đoạn cố định được lấp đầy gần với mức độ chặt chẽ của bản gốc.)Sửa mặt bằng là được. Nếu đường kính của các bảng màn ở hai đầu cột nhất trí, bạn có thể sử dụng thời gian bình thường để sử dụng các bảng màu, mục đích là sử dụng tác dụng dòng chảy, khôi phục mức độ chặt chẽ của giường cột.

3,Sửa chữa sụp đổ cột

Có rất nhiều nguyên nhân khiến cột sụp đổ. Đối với sự sụp đổ không quá nghiêm trọng, nếu khẩu độ của tấm sàng ở cả hai đầu cột là nhất quán, cột có thể được đảo ngược để sử dụng thời gian chung, hiệu suất có thể được khôi phục. Khi sụp đổ nghiêm trọng(5 mm)左右)Bạn có thể sửa chữa phương pháp sửa chữa ô nhiễm cột là được.