Tế bào sau khi nhận được xử lý

Tế bào sau khi nuôi cấy đến trạng thái tốt thì đổ đầy dịch nuôi cấy và niêm phong miệng chai là biện pháp vận chuyển tế bào tốt nhất. Sau khi nhận được tế bào trở lại phòng thí nghiệm của mình, trước tiên mở bao bì bên ngoài ra, dùng75% cồn phun toàn bộ chai khử trùng và đặt trong bàn siêu sạch, hoạt động vô trùng nghiêm ngặt，Tủ văn hóa đứng2-4 giờ. quan sát dưới gương: không vượt quáỞ mức độ hội tụ 80%, chất lỏng nuôi cấy có thể được đóng chaiThu thập đến ống ly tâmTrong đó, tham giaMôi trường 6ml, đặt vào37Nuôi dưỡng lồng ấp CO2; Hơn 80% độ hội tụ, tùy theo tình huống truyền lại hoặc đông lạnh, thao tác cụ thể xem trình tự nuôi dưỡng tế bào.（Chú ý gửi hàng là bình bồi dưỡng kín, cho vào hộp bồi dưỡng bồi dưỡng nhớ vặn nắp bình bồi dưỡng, sau khi truyền đời đề nghị một bình dùng cơ sở bồi dưỡng bên trong bình gốc, một bình khác dùng cơ sở bồi dưỡng tự mình phối.）

Các bước nuôi cấy tế bào

1）Tế bào hồi sức: sẽ chứaCác ống lưu trữ đông lạnh của hệ thống treo tế bào 1 mL nhanh chóng lắc và tan băng trong bồn tắm nước 37 ℃, trộn đều với môi trường 5 mL. Ly tâm trong 5 phút ở 1000RPM, loại bỏ chất lỏng, bổ sung4-6mLCơ sở bồi dưỡng sau đó thổi đều. Sau đó, tất cả đình chỉ tế bào sau đó được thêm vào chai nuôi cấy để nuôi cấy qua đêm (hoặc đình chỉ tế bào được thêm vào)Trong đĩa 6cm）Bồi dưỡng qua đêm. Thay dịch vào ngày hôm sau và kiểm tra mật độ tế bào.

2）Di truyền tế bào: Nếu mật độ tế bào đạt80 - 90%, có thể tiến hành bồi dưỡng truyền đời.

1, Đối với các tế bào dán tường, thế hệ có thể tham khảo các phương pháp sau:

1. Bỏ đi nuôi cấy, rửa sạch tế bào bằng PBS không chứa canxi, ion magiê 1 - 2 lần.

2. Cộng1-2 ml dịch tiêu hóa (0.25% Trypsin - 0,53 mM EDTA) trong chai nuôi cấy, được tiêu hóa trong một hộp nuôi cấy 37 ℃.1-2 phútSau đó quan sát tình trạng tiêu hóa tế bào dưới kính hiển vi, nếu phần lớn tế bào trở nên tròn và rơi ra, nhanh chóng lấy lại bàn điều khiển, gõ nhẹ vài cái vào bình nuôi cấy.Trên 5mlBao gồm10% huyết thanhMôi trường chấm dứt tiêu hóa.

3. Nhẹ nhàng thổi các tế bào, sau khi tách ra hút ra, ly tâm trong điều kiện 1000RPM trong 8-10 phút, loại bỏ chất lỏng, bổ sung 1-2mL nuôi cấy và thổi đều.

4. Nhấn5-6ml/lọ bổ sung dung dịch nuôi cấy, chia dung dịch đình chỉ tế bào theo tỷ lệ 1: 2 cho hàm lượng mới5-6Trong đĩa mới hoặc trong chai của dịch nuôi cấy.

2Đối vớiTrang chủTế bào, di truyền có thể tham khảo các phương pháp sau:

Phương pháp 1: Thu thập tế bàoLy tâm trong 8-10 phút trong điều kiện 1000RPM, loại bỏ chất lỏng sạch, bổ sung 1-2ml dung dịch nuôi cấy và thổi đều, truyền dịch tế bào được chia theo tỷ lệ 1: 2 đến 1: 5 vào đĩa hoặc chai mới có chứa 8ml môi trường.

Phương pháp 2: Có thể lựa chọn một nửa phương pháp thay dịch, sau khi bỏ một nửa môi trường nuôi cấy, treo các tế bào còn lại, treo các tế bàoTỷ lệ 1:2 đến 1:3 được chia thành đĩa hoặc chai mới có chứa 8ml.

PS:Nếu khách hàng nhận được2ml tế bào ống nhỏ, sau khi nhận được tế bào, khử trùng toàn bộ ống bằng cách phun rượu 75% và đặt vào bàn siêu sạch hoặc tủ an toàn, hoạt động vô trùng nghiêm ngặt; Chuyển các tế bào ống nhỏ sang chai nuôi cấy T25 hoặc6cm đĩa petri, thêm5Trộn đều môi trường bên trái và bên phải, sau khi cấy qua đêm, kiểm tra mật độ tế bào: nếu mật độ không vượt quá80%, thay dịch tiếp tục bồi dưỡng, tùy thuộc vào tình hình truyền lại hoặc đông lạnh. Nếu mật độ vượt quá80%, có thể truyền trực tiếp (phương pháp giống như trên).

3、Tế bào đông lạnh:（Ghi chú: Phương pháp đông lạnh không huyết thanh, phương pháp đông lạnh không huyết thanh xin tham khảo số hàng của tôi:C7001）

1、tế bào phát triển để che một chai nuôi cấyỞ 80% diện tích, bỏ 25 cm2 dung dịch nuôi cấy trong chai, rửa tế bào bằng PBS một lần;

2、thêm vào0,25% dịch tiêu hóa trypsin khoảng 1 ml vào chai nuôi cấy, xem dưới kính hiển vi đảo ngược, sau khi tế bào co lại và tròn, thêm dịch nuôi cấy để chấm dứt tiêu hóa, nhẹ nhàng thổi tế bào để nó rơi ra, sau đó chuyển huyền phù vào ống ly tâm 15ml, ly tâm 1000rpm trong 5 phút;

3、Đình chỉ lại các tế bào với một lượng thích hợp chất lưu trữ đông lạnh và đặt chúng trong ống lưu trữ đông lạnh;

4、Đầu tiên đặt ống đông lạnh tế bào vào-20oC 1,5h, sau đó di chuyển đến -80oC。