Trong quá trình lấy mẫu vi sinh vật, ô nhiễm chéo có thể bắt nguồn từ dư lượng thiết bị, hoạt động của con người, vi sinh vật môi trường hoặc ô nhiễm lẫn nhau giữa các mẫu, đòi hỏi phải thực hiện các biện pháp chống ô nhiễm nghiêm ngặt từ toàn bộ quy trình. Sau đây là hướng dẫn thao tác tiêu chuẩn hóa và các điểm kỹ thuật được chia thành cảnh:
I. Thiết bị và vật tư tiêu hao khử trùng trước khi lấy mẫu
1. Đặc điểm kỹ thuật khử trùng phần cứng
Thiết bị tái sử dụng:
Đầu lấy mẫu kim loại (chẳng hạn như bộ lấy mẫu tác động): khử trùng bằng hơi nước 121 ℃ trong 20 phút (GB/T38512-2020) hoặc đốt bằng ethanol 70%+ngọn lửa (thích hợp để xử lý khẩn cấp tại chỗ).
Các bộ phận bằng nhựa (chẳng hạn như đường bơm mẫu): ngâm axit peroxyacetic 0,1% trong 30 phút, sau đó rửa sạch bằng nước vô trùng 3 lần, phơi khô sau khi chiếu xạ tia cực tím (254nm, ≥30 phút).
Vật tư dùng một lần:
Đĩa petri, túi lấy mẫu và các sản phẩm khử trùng khác cần được chiếu xạ (chiếu xạ coban-60, liều ≥25kGy), kiểm tra tính toàn vẹn của bao bì trước khi tháo niêm phong (tiêu chuẩn ISO11607-1).
2. Xác minh hiệu quả khử trùng
Theo dõi sinh học sau mỗi lần khử trùng: đặt bào tử Bacillus thermophilus ATCC7953 và nuôi cấy sau khi khử trùng (56 ° C, 48 giờ), số lượng khuẩn lạc nên là 0 (GB8599-2021).
II. Hệ thống chống ô nhiễm hoạt động tại địa điểm lấy mẫu
1. Hướng dẫn vận hành vô trùng nhân sự
Yêu cầu bảo vệ cấp 3:
Môi trường chung: Mặc quần áo thử nghiệm dùng một lần+găng tay y tế (như găng tay nitrile) và lau bề mặt găng tay bằng ethanol 75% trước khi lấy mẫu.
Môi trường có nguy cơ cao (ví dụ: mẫu lâm sàng): Cần mặc quần áo cách ly vô trùng+kính bảo hộ+găng tay hai lớp và thay găng tay bên ngoài mỗi lần lấy mẫu.
Quy tắc hành động:
Khi lấy mẫu cánh tay tránh vượt qua phía trên miệng lấy mẫu, giữ đầu lấy mẫu cách cơ thể ≥30cm, hướng thở và miệng lấy mẫu ở góc 90 °.
Cấm chải tóc, chạm vào mặt trong khu vực lấy mẫu, nếu cần điều chỉnh thiết bị, cần thay găng tay hoặc khử trùng tay trước.
2. Phân vùng không gian và kiểm soát luồng không khí
Phân chia vùng lấy mẫu:
Thiết lập khu vực hoạt động vô trùng 50cm × 50cm, phun ethanol 75% lên mặt bàn để tạo thành một vành đai khử trùng, đặt mẫu ở giữa khu vực.
Các tình huống có độ sạch cao, chẳng hạn như phòng sạch lớp ISO5, cần được vận hành bên trong bàn làm việc dòng chảy nhiều lớp (tốc độ gió 0,36-0,54m/s) hoặc tủ an toàn sinh học (BSC-Class II).
Kiểm soát nhiễu luồng không khí:
Đóng cửa sổ và cửa ra vào trước khi lấy mẫu, ngừng hoạt động của hệ thống điều hòa không khí trong 10 phút (tránh luồng không khí mang vi sinh vật bên ngoài), kiểm soát việc di chuyển của nhân viên cách đó 1 mét.
III. Biện pháp cách ly của quá trình thu thập mẫu
1. Đề án chống chéo lấy mẫu theo lô
Khử trùng khoảng cách lô:
Sau khi hoàn thành 1 mẫu lấy mẫu, sử dụng 75% ethanol để lau vỏ lấy mẫu, miệng lấy mẫu và bàn điều hành, sau 5 phút để thực hiện việc thu thập mẫu tiếp theo.
Nếu thu thập các loại mẫu khác nhau (ví dụ như mẫu môi trường và mẫu lâm sàng), bạn cần thay thế toàn bộ đầu lấy mẫu và đường ống để tránh nhầm lẫn vi sinh vật còn lại.
2. Kỹ thuật cách ly cho các mẫu đặc biệt
Xử lý mẫu nồng độ cao:
Khi xử lý các mẫu có tải trọng cao như nước thải, phân, v.v., hãy sử dụng bộ lấy mẫu với bộ lọc áp suất âm (như MilliporeEZ-Pak), niêm phong hộp mực ngay sau khi lấy mẫu để ngăn chặn sự lây lan của bình xịt.
Lấy mẫu vi khuẩn gây bệnh:
Sử dụng đầu lấy mẫu an toàn sinh học (chẳng hạn như bộ lấy mẫu kín với bộ lọc HEPA), sau khi lấy mẫu được đưa vào bể kim loại chống rò rỉ (giấy thấm bên trong+dung dịch natri hypochlorite 0,5%).