Máy tách polypeptideHoạt động sử dụng bao gồm hiệu chuẩn và chuẩn bị thiết bị, xử lý thuốc thử và mẫu, thực hiện phản ứng nứt, tinh chế sản phẩm và bảo trì thiết bị năm liên kết cốt lõi,Máy tách polypeptideCác bước thao tác cụ thể và lưu ý như sau:
I. Chuẩn bị và hiệu chuẩn thiết bị
Kiểm tra tính toàn vẹn thành phần
Kiểm tra dây nguồn, lò phản ứng, máy bơm, van và các bộ phận khác trong tình trạng tốt trước khi khởi động để đảm bảo không bị hỏng hoặc lỏng lẻo. Ví dụ, nếu vòng đệm lò phản ứng bị lão hóa, cần phải được thay thế ngay lập tức để tránh rò rỉ khí trong quá trình nứt.
Xác nhận rằng bình chứa dung môi được kết nối chặt chẽ với đường ống dẫn khí và không bị rò rỉ. Kiểm tra áp suất khí nén (AIR) là 60-100psi và áp suất nitơ (N2) là 5-10psi.
Hiệu chuẩn tham số
Đặt trước các thông số như nhiệt độ nứt, áp suất, tốc độ dòng chảy theo yêu cầu thí nghiệm. Ví dụ, khi phân tách enzyme, nhiệt độ cần được kiểm soát chính xác ở 37 ° C và phạm vi dao động không vượt quá ± 0,5 ° C.
Thường xuyên hiệu chỉnh cảm biến nhiệt độ (mỗi nửa năm một lần, lỗi cần được kiểm soát trong vòng ± 0,2 ℃) và cảm biến áp suất (mỗi năm một lần) để đảm bảo tính chính xác của dữ liệu.
Thiết bị Preheating
Bật nguồn máy tổng hợp và làm nóng thiết bị đến nhiệt độ phản ứng đã đặt. Thời gian khởi động khác nhau tùy thuộc vào mô hình thiết bị và nhiệt độ và cần phải kiên nhẫn.
II. Thuốc thử và xử lý mẫu
Chuẩn bị thuốc thử
Chuẩn bị chất lỏng nứt (ví dụ: TFA/nước/triisopropylsilane=95: 2,5: 2,5), thuốc thử kích hoạt (ví dụ: HBTU, DCC), dung môi (DMF, DCM), v.v., đảm bảo tất cả các vật liệu tươi và tinh khiết, tránh sự giới thiệu của tạp chất.
Xác nhận thuốc thử không lắng đọng hoặc biến chất, đề nghị sử dụng thuốc thử lọc trước và đánh dấu ngày mở, thuốc thử hết hạn kịp thời bị bỏ rơi.
Tiền xử lý mẫu
Các mẫu có độ nhớt cao hoặc chứa hạt được xử lý trước như ly tâm, lọc, v.v., để ngăn chặn tắc nghẽn khoang nứt hoặc làm hỏng thân bơm. Ví dụ, mẫu không được xử lý trước có thể dẫn đến tỷ lệ hao mòn cơ thể bơm tăng 40%.
III. Thực hiện phản ứng nứt
Nhựa với axit amin cố định
Chọn một tàu sân bay pha rắn thích hợp, chẳng hạn như Rink Amide Resin, làm căng nhựa với dichloromethane (DCM), hút khô dự phòng sau khi loại bỏ tạp chất.
Các axit amin mục tiêu được trộn với thuốc thử kích hoạt để tạo thành este hoạt tính và đưa vào lò phản ứng, kết hợp với các nhóm amin được khử bảo vệ để tạo thành liên kết peptide.
Phản ứng nứt
Thêm một chất lỏng lysis làm mát trước (như hỗn hợp TFA) và khuấy ở nhiệt độ phòng trong 2 giờ. Trong quá trình cracking cần theo dõi nhiệt độ, áp suất và các thông số khác trong thời gian thực, phát hiện thời gian ngừng hoạt động bất thường và kịp thời để kiểm tra.
Sau khi cracking kết thúc, chất lỏng phản ứng được giải phóng, và nhựa được bơm ra để loại bỏ, và nhựa được rửa trong TFA và các dung môi khác 3 lần để kết hợp chất lỏng lọc.
IV. Thanh lọc sản phẩm
Tập trung và kết tủa
Chất lỏng nứt được chuyển vào máy bay hơi quay ở nhiệt độ phòng để tập trung thành một khối lượng nhỏ, với methyl tert-butyl ether (MTBE) được thêm vào để tạo ra sự kết tủa polypeptide.
Lượng mưa được thu thập bằng cách ly tâm (10.000 vòng/phút), rửa 3 lần bằng ether lạnh, làm khô peptide thô.
Sắc ký lỏng hiệu quả cao (HPLC)
Thanh lọc được thực hiện bằng cách sử dụng cột pha ngược C18, với 0,1% TFA/nước cho pha chảy A và 0,1% TFA/Acetonitrile cho pha chảy B. Trong điều kiện rửa gradient (pha B tăng từ 10% lên 60% trong 0-30 phút), đỉnh mục tiêu được thu thập.
Sau khi tinh chế bằng HPLC, độ tinh khiết polypeptide có thể tăng từ 85% lên 98%.
V. Bảo trì và bảo trì thiết bị
Vệ sinh hàng ngày
Sau mỗi lần sử dụng, các bức tường bên trong của lò phản ứng được rửa sạch bằng nước khử ion để loại bỏ các chất nứt còn lại và các mảnh protein. Đối với các vết bẩn cứng đầu, có thể sử dụng chất tẩy rửa có chứa enzyme để chải sau khi ngâm.
Đường ống được khử trùng tuần hoàn bằng dung dịch ethanol 75% hoặc natri hypochlorite 0,1% mỗi tuần để ngăn chặn sự sinh sôi của vi khuẩn. Sau khi khử trùng cần sấy khô đường ống bằng nitơ.
Phụ tùng thay thế
Cứ 3 tháng kiểm tra độ đàn hồi của vòng kín, nếu xuất hiện xơ cứng hoặc vết nứt cần thay thế ngay lập tức. Thay đổi bộ lọc khí nạp mỗi 1-2 tháng để ngăn bụi xâm nhập vào bên trong thiết bị.
Đổ đầy dầu bôi trơn đặc biệt (chẳng hạn như mỡ dựa trên silicon) mỗi quý cho thân bơm, van và các bộ phận chuyển động khác để giảm ma sát và mài mòn.
Quản lý lưu trữ dài hạn
Khi không sử dụng thiết bị, hãy cất giữ ở nơi khô ráo, thoáng mát, tránh ánh sáng mặt trời trực tiếp và môi trường ẩm ướt. Đảm bảo thiết bị tránh xa khí và chất lỏng ăn mòn.
Áp dụng dầu chống gỉ (như Vaseline) lên bề mặt kim loại của thiết bị và phủ một lớp phủ bụi.