NISTmAb là một kháng thể đơn dòng mô tả rộng rãi được thiết kế để sử dụng làm mẫu trong việc phát triển các kỹ thuật mới để mô tả đặc tính protein *. Trong tài liệu ứng dụng này, chúng tôi đã sử dụng SUPR-DSF để có được bài giảng về phương pháp huỳnh quang quét vi sai của NISTmAb, DSE) và kết quả của Kello được so sánh với DSO, phương pháp nhiệt lượng quét vi sai của NISTmAb. SUPR-DSE giải mã tất cả hai miền của NISTAb: CH2 (690C.CH3 (830() và miền FAB có độ đặc hiệu cao (94oC)[1]. Ngoài ra, giá trị Tm đo được phù hợp với báo cáo của tài liệu. Những kết quả này chứng minh rằng thông tin ổn định protein chất lượng cao có thể dễ dàng thu được bằng cách áp dụng SUPR-DSF.

Kết luận:

SUPR-DSF của Protein Stable có thể đo nhiệt độ giải chuỗi một cách nhanh chóng và chính xác bằng cách phát hiện sự dịch chuyển đỉnh của huỳnh quang bên trong protein. Kết quả cho thấy SUPR-DSF có thể đạt được nhiệt độ giải chuỗi chính xác, bao gồm nhiệt độ giải chuỗi cực cao (94 0C) như miền Fab. Điều này cũng xác minh rằng SUPR-DSF dựa trên phương pháp huỳnh quang nội sinh có thể thu được kết quả phù hợp với DSC. Ưu điểm của việc thử nghiệm với tấm 384 lỗ là tăng thông lượng, tăng sự tiện lợi trong khi giảm tiêu thụ mẫu.

Phương pháp:

NISTmAb ở nồng độ 1 mg/ml được xây dựng trong dung dịch chậm L-histidine pH6, được thêm vào các tấm vi mô LPCR 384 lỗ tương ứng, với liều lượng mỗi lỗ là 104L. Sau khi lắp ráp, sau khi tấm vi mô được ly tâm trong 60 giây, nó được niêm phong bằng màng keo trong suốt. Thiết lập quy trình pha trộn liên tục trong SUPR-DSF để đo các kênh huỳnh quang từ 150C đến 105oC với tốc độ nóng lên 10C mỗi phút, dữ liệu thu được từ phổ huỳnh quang, xử lý tính toán bằng phương pháp BCM và định lượng độ lệch phổ. Dữ liệu BCM được xử lý thành một hàm nhiệt độ và được chuyển đổi thành đạo hàm bậc một để phân tích lại. Nhiệt độ chuỗi giải được tính toán từ đỉnh của đạo hàm. Phương pháp và kết quả của tất cả các mẫu có sẵn.