U-Blot® Màng in NC (0,2μm)

U-Blot ® Màng in NC (0,2μm)

U-Blot ® Màng in cellulose nitrat (NC) là một màng siêu xốp cellulose nitrat tinh khiết, không được hỗ trợ để chuyển protein và axit nucleic từ các ma trận gel khác nhau.

Bộ phim in chuyển này có hai khẩu độ: 0,2μm và 0,45μm, liên kết các chất có trọng lượng phân tử khác nhau:

• Khẩu độ 0,45μm: Thích hợp cho hầu hết các mẫu protein và cung cấp độ nhạy phát hiện cao hơn.

• Khẩu độ 0,2 μm: Thích hợp cho các protein có trọng lượng phân tử dưới 20.000, hấp thụ và giữ lại các protein nhỏ tốt hơn.

U-Blot ® Độ bền kéo của màng in cellulose nitrate (NC) làm cho nó ít có khả năng bị rách và nứt hơn so với các nhãn hiệu khác của màng NC, có khả năng liên kết cao hơn đối với cả protein và axit nucleic, cho phép nó được sử dụng tốt hơn trong xét nghiệm miễn dịch và axit nucleic.

1. Tách mẫu protein và protein Marker bằng gel SDS PAGE.

2. Cắt và đặt gel cẩn thận và cân bằng gel trong bộ đệm chuyển lạnh trong 5~20 phút.

3. Cắt phim và giấy lọc thành kích thước phù hợp với gel. Màng PVDF được làm ướt trước trong methanol trong 20 giây cho đến khi màu trắng không trong suốt của nó chuyển sang màu xám mờ đồng nhất, sau đó ngâm trong nước siêu tinh khiết trong 1-2 phút để loại bỏ dư lượng thuốc thử; Sau đó cân bằng trong bộ đệm chuyển lạnh trong 2-3 phút cho đến khi nó có thể được sử dụng.

Sử dụng nhắc nhở:

Không để khô màng sau khi nó ướt. Nếu màng trở nên khô một phần (trở thành màu trắng đục), nó cũng phải được làm ẩm lại.

4. Lắp ráp thiết bị chuyển lần lượt, chuyển clip miếng bọt biển miếng lọc giấy trước khi ướt màng cắt và trước khi ướt gel giấy lọc miếng bọt biển miếng đệm chuyển clip, mỗi lớp được đặt để chú ý để tránh nhăn, gấp hoặc sự hiện diện của bong bóng (có thể sử dụng cắt ván ép và các công cụ khác để nhẹ nhàng đẩy bong bóng, để mỗi lớp được dán chặt)

5. Thiết lập điều kiện hoạt động, v.v., theo hướng dẫn của thiết bị chuyển giao được sử dụng, bắt đầu chuyển giao.

6. Sau khi chuyển kết thúc, loại bỏ các bộ phim blot và một thời gian ngắn rửa sạch trong nước siêu tinh khiết để loại bỏ các mảnh vụn gel. Màng blot có thể được lưu trữ khô hoặc sử dụng ngay lập tức cho các bước xét nghiệm miễn dịch.

Một số yếu tố quan trọng để thực hiện thành công các thí nghiệm in dấu protein, chẳng hạn như nồng độ protein, chất lỏng khép kín và nồng độ kháng thể, có thể cần được tối ưu hóa trong sơ đồ sau.

Xét nghiệm miễn dịch tiêu chuẩn

1. Nếu bộ phim blot đã khô, hãy ngâm lại nó và ngâm nó trong methanol trong 15 giây hoặc cho đến khi màu sắc của nó thay đổi từ màu trắng không trong suốt sang màu xám mờ.

2. Rửa màng in bằng nước siêu tinh khiết trong 1 phút.

3. Đặt màng in vào bộ đệm kín, khuấy nhẹ và ủ trong 1 giờ.

4. Pha loãng một kháng thể trong dung dịch pha loãng kháng thể hàng hóa, dung dịch đệm rửa hoặc dung dịch đệm kín.

5. Đặt màng in vào dung dịch kháng pha loãng, ủ ở nhiệt độ phòng trong 1 giờ (hoặc 4 ° C qua đêm), khuấy nhẹ.

6. Sử dụng bộ đệm giặt (với Tween) ®- 20 Chất đệm cho chất hoạt động bề mặt (TBST hoặc PBST)) rửa phim dấu vết 3-5 lần, mỗi lần 5 phút.

7. Pha loãng dikháng trong dung dịch pha loãng kháng thể hàng hóa, đệm rửa hoặc đệm kín.

8. Đặt màng in vào dung dịch kháng enzyme pha loãng, ủ ở nhiệt độ phòng trong 1 giờ.

9. Rửa phim dấu vết 3-5 lần với bộ đệm giặt, mỗi lần 5 phút.

10. Đặt phim dấu vết vào thùng chứa sạch sẽ và thêm thuốc thử phát hiện tương ứng.

11. Làm theo hướng dẫn sử dụng thuốc thử, ủ 1 - 5 phút.

(1) Đối với các tác nhân phát quang hóa học HRP hoặc AP, hãy tiếp xúc với phim X-quang hoặc sử dụng hệ thống hình ảnh để có được hình ảnh kỹ thuật số.

(2) Để phát hiện kết xuất màu, hãy thêm thuốc thử và chờ tín hiệu xuất hiện.