Chuột Melatonin (MT) ELISA Kit

Chuột Melatonin (MT) ELISA Kit

lBộ dụng cụ này được sử dụng để kiểm tra định lượng in vitroHuyết thanh, huyết tương, mô homogenization và các mẫu chất lỏng liên quantrungMelatonin chuột（MTHàm lượng.

lNgày hết hạn: 6 tháng

lĐiều kiện bảo quản:2-8℃

lBộ dụng cụ này chỉ dành cho nghiên cứu khoa học và không được sử dụng trong chẩn đoán lâm sàng

Nguyên tắc thử nghiệm

Bộ dụng cụ sử dụng xét nghiệm hấp phụ miễn dịch liên kết enzyme một bước (ELISA) bằng phương pháp bánh sandwich kép. Trong các lỗ nhỏ bọc trước các kháng thể bị bắt bởi melatonin (MT) ở chuột, các kháng thể thử nghiệm được đánh dấu HRP được thêm vào lần lượt, được ủ ấm và rửa sạch. Màu sắc được tạo ra với chất nền TMB, TMB được chuyển đổi thành màu xanh dương dưới sự xúc tác của peroxidase và màu vàng cuối cùng dưới tác động của axit. Độ sâu của màu sắc và melatonin chuột (MT) trong mẫu có mối tương quan tích cực. Độ hấp thụ (ODvalue) được xác định ở bước sóng 450nm bằng máy đo enzyme, nồng độ mẫu được tính toán.

Xử lý mẫu và yêu cầu

1. Huyết thanh：Mẫu máu đầy đủ được thu thập trong ống tách huyết thanh được đặt ở nhiệt độ phòng trong 2 giờ hoặc 4 ℃ qua đêm, sau đó 1000 × g ly tâm trong 20 phút, lấy sạch là được, hoặc giữ sạch ở -20 ℃ hoặc -80 ℃, nhưng nên tránh đông lạnh nhiều lần.
2. Huyết tương：Lấy mẫu vật bằng EDTA hoặc heparin làm thuốc chống đông máu và lấy mẫu vật ly tâm ở 2-8 ℃ 1000 × g trong 15 phút trong vòng 30 phút sau khi thu thập, lấy sạch có thể phát hiện, hoặc đặt Shangqing ở -20 ℃ hoặc -80 ℃ để bảo quản, nhưng nên tránh đông lạnh lặp đi lặp lại.
3. Tổ chức cân bằng:Rửa sạch mô bằng PBS trước khi làm lạnh (0,01M, pH=7,4), loại bỏ máu còn lại (các tế bào hồng cầu bị phân hủy trong huyết tương san lấp sẽ ảnh hưởng đến kết quả đo), và cắt mô sau khi cân. Mô cắt và khối lượng tương ứng của PBS (thường theo tỷ lệ khối lượng 1: 9, chẳng hạn như mẫu mô 1g tương ứng với PBS 9mL, khối lượng cụ thể có thể được điều chỉnh phù hợp theo yêu cầu thí nghiệm và được ghi lại. Khuyến cáo bao gồm các chất ức chế protease trong PBS) Thêm vào máy san lấp mặt bằng thủy tinh và nghiền đầy trên băng. Để phá vỡ các tế bào mô hơn nữa, có thể siêu âm phá vỡ một hỗn hợp đồng nhất, hoặc đông lạnh nhiều lần. Sau đó đem dung dịch đều đặn ly tâm 5 - 10 phút, lấy ra kiểm tra.

4. Nuôi cấy tế bào hoặc các mẫu vật sinh học khác:Xin vui lòng 1000 × g ly tâm trong 20 phút, làm sạch có thể được phát hiện, hoặc đặt làm sạch ở -20 ℃ hoặc -80 ℃ để bảo quản, nhưng nên tránh đóng băng và tan chảy lặp đi lặp lại.

Lưu ý: Sự tan máu của mẫu vật có thể ảnh hưởng đến kết quả xét nghiệm sau này, vì vậy mẫu vật tan máu không thích hợp để thực hiện xét nghiệm này.

Thuốc thử và thiết bị cần thiết và không được cung cấp

• Máy đo Enzyme (450nm)

• Bộ lấy mẫu và đầu súng có độ chính xác cao: 0,5-10uL, 2-20uL, 20-200uL, 200-1000uL

• Hộp nhiệt độ 37 ℃

• Nước cất hoặc nước khử ion

Thành phần Kit

Chuột Melatonin (MT) ELISA KitChuẩn bịGhi chú：

1. Nồng độ sản phẩm tiêu chuẩn theo thứ tự: 80, 40, 20, 10, 5, 2,5 pg/mL

2. Sau khi kiểm tra một số lượng lớn mẫu vật bình thường, giá trị nồng độ bình thường của mẫu vật nằm trong phạm vi kiểm tra được cung cấp bởi bộ dụng cụ, mẫu 50μL trực tiếp được lấy trong quá trình thí nghiệm. Khi một số mẫu có giá trị vượt quá nồng độ tiêu chuẩn lớn của zui, có thể pha loãng mẫu để pha loãng mẫu thích hợp trước khi tiến hành thí nghiệm.

Lưu ý

• Ôn dục theo đúng thời gian và nhiệt độ quy định để đảm bảo kết quả chính xác. Tất cả các thuốc thử phải đạt được nhiệt độ phòng 20-25 ° C trước khi sử dụng. Giữ lạnh thuốc thử ngay sau khi sử dụng.

• Rửa đĩa không đúng cách có thể dẫn đến kết quả không chính xác. Hãy chắc chắn rằng bạn cố gắng hút khô chất lỏng bên trong lỗ trước khi thêm chất nền. Trong quá trình ôn dục đừng để lỗ nhỏ khô ráo.

• Loại bỏ chất lỏng và dấu ngón tay còn sót lại từ đáy tấm, nếu không sẽ ảnh hưởng đến giá trị OD.

• Chất lỏng kết màu cơ bản nên có màu không màu hoặc rất nhạt, chất lỏng cơ bản đã chuyển sang màu xanh không thể sử dụng.

• Tránh ô nhiễm chéo các tác nhân và mẫu vật để không gây ra kết quả sai.

• Tránh tiếp xúc trực tiếp với ánh sáng mạnh khi bảo quản và giữ ấm.

• Sau khi cân bằng đến nhiệt độ phòng, hãy mở túi kín để ngăn các giọt nước ngưng tụ trên các thanh lạnh.

• Bất kỳ tác nhân phản ứng nào cũng không thể tiếp xúc với khí mạnh phát ra từ dung môi tẩy trắng hoặc dung môi tẩy trắng. Bất kỳ thành phần tẩy trắng nào cũng phá vỡ hoạt tính sinh học của tác nhân phản ứng trong bộ.

• Không thể sử dụng các sản phẩm đã hết hạn.

• Nếu bệnh có thể lây lan, tất cả các mẫu phải được quản lý tốt, xử lý mẫu và thiết bị phát hiện theo quy trình quy định.

Chuẩn bị thuốc thử

Bộ dụng cụ được lấy ra khỏi môi trường lạnh nên được sử dụng sau khi cân bằng nhiệt độ phòng.

20 × dung dịch đệm rửa pha loãng: nước cất pha loãng theo tỷ lệ 1: 20, tức là 1 phần 20 × dung dịch đệm rửa cộng với 19 phần nước cất.

Các bước hoạt động

1. Các thanh mong muốn được lấy ra khỏi túi nhôm sau khi cân bằng nhiệt độ phòng 20 phút, và các thanh còn lại được niêm phong trong túi tự niêm phong và đặt trở lại 4 ° C.

2. Thiết lập lỗ sản phẩm tiêu chuẩn và lỗ mẫu, mỗi lỗ sản phẩm tiêu chuẩn thêm nồng độ khác nhau của sản phẩm tiêu chuẩn 50 μL;

3. 50 μL mẫu được thử nghiệm được thêm vào lỗ mẫu; Lỗ trắng không thêm vào.

4. Ngoại trừ các lỗ trống, các kháng thể phát hiện 100 μL được đánh dấu bằng horseradish peroxidase (HRP) được thêm vào mỗi lỗ trong lỗ sản phẩm và lỗ mẫu tiêu chuẩn, các lỗ phản ứng được niêm phong bằng màng niêm phong và nồi nước 37 ℃ hoặc bể điều chỉnh nhiệt độ được giữ ấm trong 60 phút.

5. Loại bỏ chất lỏng, giấy thấm hút khô, mỗi lỗ chứa đầy chất tẩy rửa (350μL), để 1 phút, vứt chất tẩy rửa, giấy thấm hút khô, vì vậy lặp lại tấm giặt 5 lần (cũng có thể sử dụng máy giặt tấm).

6. Mỗi lỗ cho thêm chất nền A, B mỗi lỗ 50 ml, 37 độ C tránh ánh sáng 15 phút.

7. Kết thúc mỗi lỗ được thêm vào 50 μL, trong vòng 15 phút, giá trị OD của mỗi lỗ được xác định ở bước sóng 450nm.

Tính toán kết quả thí nghiệm

Lấy giá trị ODD của sản phẩm tiêu chuẩn đo được làm tọa độ ngang, giá trị nồng độ của sản phẩm tiêu chuẩn là tọa độ dọc, vẽ đường cong tiêu chuẩn trên giấy tọa độ hoặc với phần mềm liên quan và nhận được phương trình hồi quy thẳng, thay thế giá trị ODD của mẫu vào phương trình, tính toán nồng độ của mẫu.

Hiệu suất Kit

• Phạm vi phát hiện: 2,5 pg/mL - 80 pg/mL.

• Độ nhạy: nồng độ phát hiện thấp dưới 0,1 pg/mL.

• Đặc hiệu: Không phản ứng chéo với các chất tương tự cấu trúc hòa tan khác.

• Độ lặp lại: hệ số biến thiên trong tấm nhỏ hơn 10%, hệ số biến thiên giữa các tấm nhỏ hơn 15%.

giải thích

Do các điều kiện hiện tại và trình độ khoa học và kỹ thuật chưa thể xác định và phân tích đầy đủ tất cả các nguyên liệu được cung cấp bởi tất cả các nhà cung cấp, sản phẩm này có thể có một số rủi ro kỹ thuật về chất lượng.

• Kết quả cuối cùng có liên quan chặt chẽ đến hiệu quả của thuốc thử, hoạt động liên quan của người thí nghiệm và môi trường thí nghiệm tại thời điểm đó, hãy chắc chắn chuẩn bị đầy đủ mẫu vật dự phòng.

• Cùng một sản phẩm với các lô khác nhau có thể có một chút khác biệt, như giới hạn phát hiện, độ nhạy và thời gian hiển thị màu sắc, v. v., xin vui lòng tiến hành thí nghiệm theo hướng dẫn sử dụng trong hộp thuốc thử, hướng dẫn sử dụng điện tử của trang web chỉ để tham khảo.

• Chỉ có sử dụng toàn bộ chất thử đồng bộ của bộ bộ bộ bộ bộ bộ bộ bộ bộ bộ bộ của bộ phận này mới có thể đảm bảo hiệu quả kiểm tra, không thể sử dụng sản phẩm của các nhà sản xuất khác. Chỉ tuân thủ nghiêm ngặt các hướng dẫn thử nghiệm của bộ dụng cụ này sẽ cho kết quả xét nghiệm *.

• Công ty chỉ chịu trách nhiệm về bộ dụng cụ và không chịu trách nhiệm về việc tiêu thụ mẫu do sử dụng bộ dụng cụ, vui lòng lưu trữ đầy đủ mẫu trước khi sử dụng có tính đến số lượng mẫu có thể được sử dụng.

• San lấp mô hoặc chiết xuất tế bào được chuẩn bị bằng dung dịch lysis hóa học có thể làm sai lệch kết quả thí nghiệm ELISA do sự ra đời của một số hóa chất.

• Nếu mẫu được làm sạch để nuôi cấy tế bào, do các yếu tố gây nhiễu mẫu như trạng thái tế bào, số lượng tế bào, thời gian lấy mẫu, v.v., có thể có những tình huống không phát hiện được.

• Một số protein tự nhiên hoặc tái tổ hợp, bao gồm cả prokaryotes và eukaryotes, có thể không được phát hiện vì chúng không phù hợp với các kháng thể được thử nghiệm và bắt được sử dụng trong sản phẩm này.