Yếu tố cảm ứng apoptosis chuột (AIF) ELISA Kit

Bộ xét nghiệm ELISA của yếu tố cảm ứng apoptosis chuột (AIF)

Nguyên tắc phát hiện :

Thiết bị vớt váng dầu mỡ cho xử lý nước thải -PetroXtractor - Well Oil Skimmer ( ELISA）。 Được đóng gói trước Yếu tố cảm ứng apoptosis ở chuột (AIF)trong một tấm microporous enzyme của kháng thể dừng (kháng thể pha rắn), thêm vào Yếu tố cảm ứng apoptosis ở chuột (AIF) Hiệu chuẩn và mẫu đang được kiểm tra. Thêm một cây khác. Chống đánh dấu HRP Yếu tố cảm ứng apoptosis ở chuột (AIF) (kháng thể tiêu chuẩn enzyme), sau khi sinh nhiệt và rửa kỹ, loại bỏ các thành phần không liên kết, hình thành các kháng thể pha rắn trên bề mặt pha rắn của tấm microporous - Phức hợp Sandwich của kháng thể kháng nguyên-enzyme. Các chất nền A và B, chất nền được xúc tác bởi HRP, tạo ra các sản phẩm màu xanh, dưới tác động của chất chấm dứt (axit sulfuric 2M), cuối cùng chuyển sang màu vàng, xác định độ hấp thụ (giá trị OD) trên bước sóng 450nm của máy đo enzyme, độ hấp thụ (giá trị OD) so với mẫu cần đo Yếu tố cảm ứng apoptosis ở chuột (AIF)Nồng độ đang liên quan. Phù hợp với đường cong hiệu chuẩn, có thể tính toán trong mẫu Chuột (AIF)Nồng độ.

Thiết bị và thuốc thử cần thiết

1、 Máy đo Enzyme (Bộ lọc bước sóng 450nm)

2、Tủ nhiệt 37 ° C (không khuyến khích sử dụng tủ nuôi cấy CO2 cho tế bào)

3、 Máy giặt bảng tự động hoặc pipet đa kênh /5ml ống nhỏ giọt (cho bàn rửa tay)

4、 Vô trùng EP ống và hút một lần

5、 Độc thân chính xác (0,5-10μL, 5-50μL, 20-200μL, 200-1000μL) và pipet đa kênh (pipet cần được hiệu chuẩn trước khi sử dụng).

6、Giấy thấm và khe mẫu

7、Nước khử ion hoặc nước cất

Thành phần Kit:

Bộ sưu tập mẫu vật :

1、Các ống thu thập máu nên là một ống nghiệm không có pyrogen dùng một lần, không có endotoxin.

2、 Plasma Anticoagulants được khuyến cáo sử dụng EDTA 。 Tránh sử dụng máu tan, các mẫu lipid cao.

3、Mẫu vật phải rõ ràng và trong suốt, vật lơ lửng phải được loại bỏ ly tâm.

4、 Nếu không kiểm tra kịp thời sau khi thu thập tiêu chuẩn, xin vui lòng lắp đặt theo lượng sử dụng một lần, đông lạnh vào -20 ℃, -70 ℃ tủ lạnh bên trong, tránh lặp đi lặp lại đông và tan chảy, kiểm tra trong vòng 3-6 tháng.

5、 Nếu nồng độ thử nghiệm trong mẫu của bạn cao hơn giá trị cao nhất của sản phẩm tiêu chuẩn, theo tình hình thực tế, Pha loãng đúng cách (Đề nghị làm tiền thí nghiệm để xác định bội số pha loãng).

Điều kiện bảo quản:

Thu thập và bảo quản mẫu：

1、 Huyết thanh mẫu máu đầy đủ đặt ở nhiệt độ phòng 2 giờ hoặc 2-8 ° C qua đêm. 1000 × g ly tâm trong 20 phút, lấy sạch. Nó có thể được phát hiện ngay lập tức hoặc đóng băng ở -20 ° C hoặc -80 ° C theo lượng sử dụng một lần.

2、 Plasma Anticoagulants được khuyến cáo sử dụng EDTA-Na2/K2， Trong vòng 30 phút sau khi lấy mẫu ở 2-8 ° C, 1000 × g ly tâm 15 phút, lấy sạch. Có thể được phát hiện ngay lập tức, hoặc đóng băng ở -20 ° C hoặc -80 ° C theo lượng sử dụng một lần. Vui lòng kiểm tra hướng dẫn chuẩn bị mẫu để sử dụng và lựa chọn các chất chống đông máu khác.

3、Mẫu mô Mẫu mô thường được làm thành bột giấy đồng đều mô, phương pháp điều trị như sau:
3.1、 Đặt các mô mục tiêu trên băng, với các mô được làm lạnh trước Bộ đệm PBS (0,01M, pH=7,4) rửa để loại bỏ máu còn lại và cân để dự phòng.

3.2、 Bột san lấp mặt bằng mô được nghiền trên băng bằng dung dịch lysis. Thể tích của dung dịch lysis được thêm vào phụ thuộc vào trọng lượng của mô, thường mỗi 1g mảnh mô sử dụng 9ml chất lỏng lysis. Nó cũng được khuyến khích để bao gồm các chất ức chế protease, chẳng hạn như PMSF 1mM, trong dung dịch lysis.

3.3、 Tái sử dụng siêu âm nghiền hoặc lặp đi lặp lại đông lạnh điều trị thêm (Trong quá trình nghiền siêu âm, cần tắm nước đá để làm mát; phương pháp đông lạnh lặp đi lặp lại có thể được lặp lại 2 lần).

3.4、 Để chuẩn bị dung dịch cân bằng. 5000 × g ly tâm trong 5 phút, để lại rõ ràng có thể phát hiện. Hoặc đóng băng ở -20 ° C hoặc -80 ° C theo lượng sử dụng một lần.

3.5、 Theo nhu cầu thí nghiệm, mẫu homogenization mô có thể xác định nồng độ protein tổng thể trước tiên. Để tiện cho việc phân tích dữ liệu, đề nghị phương pháp BCA. Tổng nồng độ protein được điều chỉnh chung đến 1-3 mg/ml để kiểm tra ELISA. Một số mẫu mô, chẳng hạn như gan, thận và tuyến tụy, do nồng độ peroxidase nội sinh cao hơn, sẽ phản ứng với chất nền tạo màu ở nồng độ mẫu cao hơn, cho kết quả dương tính giả. Có thể thử bất hoạt 1% H2O2 trong 15 phút để phát hiện lại.

Chú ý: Chất lỏng nứt thường được sử dụng Bộ đệm PBS, hoặc sử dụng dung dịch nứt RIPA cường độ trung bình. Khi sử dụng, PH cần được điều chỉnh thành PH7.3, tránh các thành phần có chứa NP-40, Triton X-100 và DTT, có thể ức chế nghiêm trọng công việc của bộ dụng cụ. 50mM Tris+0,9% NaCL+0,1% SDS, PH 7.3 được khuyến nghị, có thể được xây dựng riêng hoặc liên hệ với chúng tôi để mua.

4、 Tế bào nuôi cấy thượng thanh thu thập thượng thanh dịch, 2-8 ° C, 2500rpm ly tâm 5 phút, thu thập làm rõ tế bào nuôi cấy Shangqing. Được sử dụng ngay lập tức để phát hiện hoặc đóng băng ở -80 ° C theo liều lượng sử dụng một lần.

5、Chất lỏng lysis tế bào

5.1、 Thu thập và phân giải các tế bào lơ lửng: 2-8 ° C, 2.500 vòng/phút ly tâm, thu thập tế bào. Thêm PBS trước khi làm mát nhẹ nhàng trộn và làm sạch, 2-8 ° C, 2.500 vòng/phút ly tâm, thu thập các tế bào. Thêm 0,5-1ml dung dịch lysis tế bào và một lượng chất ức chế protease thích hợp (ví dụ: PMSF, nồng độ hoạt động 1mmol/L), đặt trên băng, lysis 30min-1h, hoặc phối hợp với siêu âm phá vỡ.

5.2、 Thu thập và phân giải các tế bào dán tường: hút chất lỏng trong và thêm chất làm lạnh trước PBS rửa ba lần. Thêm 0,5-1 ml dung dịch phân giải tế bào và một lượng chất ức chế protease thích hợp (ví dụ: PMSF, nồng độ hoạt động 1 mmol/L), nhẹ nhàng cạo các tế bào dán tường bằng cách cạo tế bào. Đình chỉ tế bào được chuyển vào ống ly tâm, đặt trên băng, phá vỡ 30 phút-1h, hoặc phối hợp với siêu âm phá vỡ.

5.3、 Trong quá trình phân hủy tế bào có thể được thổi bằng đầu súng hoặc gián đoạn lắc ống ly tâm để protein hoàn toàn bị phá vỡ Chất nhầy xuất hiện là DNA, có thể sử dụng siêu âm để phá vỡ DNA. (Hoặc với đầu dò siêu âm 3-5mm, công suất 150-300W, siêu âm trên băng để xử lý mẫu, làm việc 1-2 giây, dừng 30 giây, 3~5 chu kỳ. )

5.4、 cracking hoặc siêu âm nghiền hoàn thành, 2-8 ° C, 10.000 vòng/phút ly tâm, được chuyển vào ống EP để phát hiện ngay lập tức, hoặc được đóng băng ở -80 ° C theo lượng sử dụng một lần.

Bộ xét nghiệm ELISA của yếu tố cảm ứng apoptosis chuột (AIF)

Chú ý:Lưu ý với mẫu tổ chức.

Ghi chú: Trên đây chỉ để tham khảo! Hy vọng những thông tin trên sẽ giúp bạn đưa ra lựa chọn đúng đắn!