Bộ phát hiện tiềm năng màng ty thể JC-1

Giới thiệu sản phẩm

JC-1Bộ phát hiện tiềm năng màng ty thể（Bộ thử nghiệm tiềm năng màng mitochondrial JC-1) Là một loạiJC-1Là đầu dò huỳnh quang, bộ dụng cụ nhanh và nhạy để phát hiện những thay đổi tiềm năng trong tế bào, mô hoặc màng ty thể tinh khiết. Sự suy giảm tiềm năng màng ty thể là một sự kiện mang tính biểu tượng trong giai đoạn đầu của apoptosis. Do đó, bộ dụng cụ này có thể được sử dụng để phát hiện apoptosis sớm.

JC-1Là một loại được sử dụng rộng rãi để phát hiện tiềm năng màng ty thể△PsmKim thăm dò huỳnh quang lý tưởng của vị trí.JC-1Thuốc nhuộm tích tụ trong ty thể theo cách phụ thuộc vào tiềm năng và có thể được sử dụng để phát hiện các tế bào, mô hoặc điện thế màng ty thể tinh khiết. Trong ti thể bình thường,JC-1Chất liệu: Bột địa gia vị, Bột địa gia vị, Bột địa gia vị, Bột địa gia vị, Bột địa gia vị, Bột địa gia vị, Bột địa gia vị, Bột địa gia vị, Bột địa gia vị, Bột địa gia vị, Bột địa gia vị, Bột địa gia vị, Bột địa gia vị, Bột địa gia vị, Bột địa gia vị, Bột địa gia (Ex = 585 nm, Em = 590 nm）； ty thể không lành mạnh do giảm hoặc mất điện thế màng,JC-1Hạt chia organic: Hạt chia organic organic organic organic organic organic organic organic organic organic organic organic organic organic organic organic organic organic organic organic organic organic organic organic organic organic organic organic organic organic organic organic organic organic organic organic organic organic organic organic organic organic organic organic organic organic organic organic organic organic (Ex = 514 nm, Em = 529 nm）。JC-1Không chỉ có thể được sử dụng để phát hiện định tính, do sự thay đổi màu sắc có thể phản ánh rất trực tiếp sự thay đổi tiềm năng của màng hạt. Nó cũng có thể được sử dụng để phát hiện định lượng, vì mức độ khử cực của ty thể có thể vượt qua màu đỏ/Tỷ lệ cường độ huỳnh quang xanh để đo lường.

Thành phần sản phẩm

lưuvà vận chuyển：-20℃ Bảo quản khô khỏi ánh sáng, ít nhất1Hàng năm có hiệu lực. Vận chuyển:Túi đávận chuyển

Cách sử dụng Bộ phát hiện tiềm năng màng ty thể JC-1

1. JC-1Chuẩn bị chất lỏng làm việc nhuộm

Đối với tấm sáu lỗ, bộ dụng cụ này có thể phát hiện100Một mẫu. cần thiết cho mỗi lỗJC-1Số lượng chất lỏng làm việc nhuộm là1 mlCác dụng cụ nuôi cấy khác. JC-1Số lượng chất lỏng làm việc nhuộm và như vậy; Đối với mỗi tế bào đình chỉ 50～100Tế bào cần 0,5mL JC-1Chất lỏng làm việc nhuộm màu. Lấy số lượng vừa phải JC-1（200×(Theo mỗi50μL JC-1（200×) Tham gia 8 mLPha loãng tỷ lệ nước siêu tinh khiết JC-1. Chấn động mạnh hòa tan hoàn toàn và trộn đều JC-1. Sau đó tham gia 2ml JC-1thuốc nhét hậu môn suppositoires (5×(Sau khi trộn đều là JC-1Chất lỏng làm việc nhuộm màu.

Chú ý:Phải đặt trước. JC-1（200×Nước tinh khiết (được cung cấp bởi bộ dụng cụ) có thể được thêm vào sau khi hòa tan hoàn toàn. JC-1thuốc nhét hậu môn suppositoires (5×）。 Không pha chế trước JC-1thuốc nhét hậu môn suppositoires (1×) Tham gia lại JC-1（200×), như vậy JC-1Sẽ rất khó hòa tan đầy đủ, sẽ ảnh hưởng nghiêm trọng đến việc kiểm tra sau này.

2. Thiết lập kiểm soát dương tính

CCCP（10 mM) Đề nghị nhấn 1∶1000 Tỷ lệ thêm vào dịch nuôi cấy tế bào, pha loãng tới 10μMXử lý tế bào 20 phút. Sau đó tải theo phương pháp dưới đây JC-1Tiến hành kiểm tra điện thế màng ti thể. Đối với hầu hết các tế bào, thường 10μM CCCPxử lý 20 phútĐiện thế màng của ty thể sau sẽWanquanmất mát,JC-1Quan sát sau khi nhuộm nên có huỳnh quang màu xanh lá cây; Các tế bào bình thường JC-1Màu đỏ huỳnh quang nên được hiển thị sau khi nhuộm. Đối với một số tế bào,CCCPNồng độ tác dụng và thời gian tác dụng có thể

Khác nhau, cần tự mình tham khảo tài liệu liên quan để quyết định.

3. Đối với tế bào lơ lửng

1）取10～60 Vạn tế bào, treo lơ lửng. 0,5 mlTrong nuôi cấy tế bào, có thể chứa huyết thanh và phenol-red.

2) Tham gia0,5mL JC-1Dịch công tác nhuộm màu, đảo ngược mấy lần trộn đều. Trong tế bào nuôi cấy 37℃ ủ20 phút。

3Trong thời gian ủ, theo từng 1 mL JC-1thuốc nhét hậu môn suppositoires (5×) Tham gia 4 mLTỷ lệ nước cất, điều chế một lượng vừa phải JC-1thuốc nhét hậu môn suppositoires (1×) Và đặt trong bồn tắm đá.

4）37Sau khi ấp trứng xong,600 × g4℃ Ly tâm3～4 phútCác tế bào kết tủa. Vứt bỏ, chú ý cố gắng không hút tế bào.

5Sử dụng JC-1thuốc nhét hậu môn suppositoires (1×) Rửa 2 Thứ hai: Tham gia 1 mL JC-1thuốc nhét hậu môn suppositoires (1×) Tế bào treo lại,600 × g4℃ Ly tâm3～4 phútTế bào lắng đọng, vứt bỏ. Tham gia lại 1 mL JC-1thuốc nhét hậu môn suppositoires (1×) Tế bào treo lại,600 × g4℃ Ly tâm3～4 phútTế bào lắng đọng, vứt bỏ.

6) Dùng lại lượng vừa phải JC-1thuốc nhét hậu môn suppositoires (1×) Sau khi treo nặng, nó được quan sát bằng kính hiển vi huỳnh quang hoặc kính hiển vi laser co-focus. Nó cũng có thể được sử dụng quang phổ huỳnh quang Phát hiện quang kế hoặc phân tích tế bào kế dòng chảy.

4. Đối với tế bào dán tường

[Chú ý]: Đối với các tế bào dán tường, nếu bạn muốn sử dụng máy quang phổ huỳnh quang hoặc máy đo tế bào dòng chảy để phát hiện, bạn có thể thu thập các tế bào trước, sau khi treo lại tham khảo phương pháp của các tế bào lơ lửng để phát hiện.

1) Đối với một lỗ của tấm sáu lỗ, hút chất lỏng nuôi cấy, có sẵn theo các thí nghiệm cụ thể nếu cần thiết PBShoặc các giải pháp thích hợp khác để rửa tế bào một lần, thêm 1 mLDịch nuôi cấy tế bào. Serum và phenol-red có thể được tìm thấy trong dịch nuôi cấy tế bào.

2) Tham gia 1 mL JC-1Dịch công tác nhuộm màu, trộn đều. Trong tế bào nuôi cấy 37℃ ủ20 phút。

3Trong thời gian ủ, theo từng 1 mL JC-1thuốc nhét hậu môn suppositoires (5×) Tham gia 4 mLTỷ lệ nước cất, điều chế một lượng vừa phải JC-1thuốc nhét hậu môn suppositoires (1×) Và đặt trong bồn tắm đá.

4）37Sau khi ấp trứng xong, hút sạch, dùng.JC-1thuốc nhét hậu môn suppositoires (1×) Rửa 2 Lần sau.

5) Tham gia 2 mLDịch nuôi cấy tế bào, trong dịch nuôi cấy có thể chứa huyết thanh và phenol đỏ.

6) Kính hiển vi huỳnh quang hoặc kính hiển vi laser đồng tập trung.

5. Đối với ty thể tinh khiết

1(Sẽ được chuẩn bị tốt) JC-1Nhuộm chất lỏng làm việc lại JC-1thuốc nhét hậu môn suppositoires (1×) Pha loãng 5 Gấp đôi.

2）0.9mL 5Pha loãng gấp đôi JC-1Thêm vào chất lỏng làm việc nhuộm 0,1 mLTổng lượng protein là 10～100μgTi thể tinh khiết.

3(Dùng máy quang phổ huỳnh quang hoặc máy quang phổ huỳnh quang: sau khi trộn đều trực tiếp dùng máy quang phổ huỳnh quang tiến hành quét thời gian)thời gian quét) Kích thích bước sóng là485nmBước sóng phát ra là 590nm. Nếu sử dụng máy đo enzyme huỳnh quang, bước sóng kích thích không thể được đặt thành 485nmKhi đó, có thể475～Số lượng 520nmThiết lập bước sóng kích thích trong phạm vi. Bạn cũng có thể tham khảo các bước dưới đây 6 Các thiết lập bước sóng trong đó tiến hành phát hiện huỳnh quang.

4Quan sát bằng kính hiển vi huỳnh quang hoặc laser đồng tập trung: phương pháp như các bước dưới đây 6。

6. Quan sát huỳnh quang và phân tích kết quả

Phát hiện JC-1Bạn có thể đặt ánh sáng kích thích thành 490nmThiết lập ánh sáng là 530nm; phát hiện JC-1Khi polymer, ánh sáng kích thích có thể được đặt thành Số lượng 525nmThiết lập ánh sáng là 590nm。

[Ghi chú]1】Khi đo huỳnh quang ở đây, bạn không cần phải đặt ánh sáng kích thích và ánh sáng phát ra ở bước sóng kích thích lớn nhất và bước sóng phát xạ lớn nhất. Nếu sử dụng kính hiển vi huỳnh quang để quan sát, phát hiện JC-1Polymer có thể được sử dụng thường xuyên để phát hiện propylene iodide hoặc Cy3Bộ lọc băng thông tiêu chuẩn. Phát hiện JC-1Đơn vị có thể được sử dụng thường xuyên để phát hiện FITChoặc GFPBộ lọc băng thông tiêu chuẩn. Sự xuất hiện của huỳnh quang màu xanh lá cây cho thấy sự suy giảm tiềm năng của màng ty thể và tế bào này rất có thể đang ở giai đoạn apoptosis sớm. Xuất hiện huỳnh quang màu đỏ chứng tỏ điện thế màng ti thể tương đối bình thường, trạng thái tế bào cũng tương đối bình thường.

Lưu ý

1）JC-1（200×) Trong4℃, tắm nước đá và các điều kiện nhiệt độ thấp khác sẽ đông cứng và dính vào đáy ống ly tâm, tường ống hoặc nắp ống, có thể20～25Tắm nước ấm một lát đến khi hòa tan toàn bộ thì sử dụng.

2) Nạp xong JC-1Sử dụng sau JC-1thuốc nhét hậu môn suppositoires (1×Khi rửa, để JC-1thuốc nhét hậu môn suppositoires (1×) Giữ 4Khoảng C, lúc này hiệu quả tẩy rửa tốt hơn.

3）JC-1Sau khi nạp và giặt xong, cố gắng hết sức. 30 phútBên trong hoàn thành kiểm tra tiếp theo. Cần tắm nước đá trước khi phát hiện.

4) Xin đừng đặtJC-1thuốc nhét hậu môn suppositoires (5×) Tất cả được chế biếnJC-1thuốc nhét hậu môn suppositoires (1×），Bộ dụng cụ này cần được sử dụng trực tiếp trong quá trình sử dụng.JC-1thuốc nhét hậu môn suppositoires (5×）。

5(Nếu phát hiện JC-1thuốc nhét hậu môn suppositoires (5×Trong đó có kết tủa, phải được hòa tan hoàn toàn sau khi sử dụng, có thể 37Nhiệt độ C thúc đẩy hòa tan.

6）CCCPCho ty thể điện tử truyền chất ức chế chuỗi, độc hại, xin chú ý bảo vệ cẩn thận.

7Vì sự an toàn và sức khỏe của bạn, vui lòng mặc quần áo thử nghiệm và vận hành bằng găng tay dùng một lần.

Sản phẩm liên quan

JC-1JC-1 Tài liệu tham khảo một phầnBộ phát hiện tiềm năng màng ty thể JC-1

(1) [IF=9.7]Sự đóng góp của ferroptosis và chức năng kép của GPX4 cho sự tiến triển của viêm xương khớpEBioY học Được phát hành:Tháng Giêng 27, 2022 DOI: https://doi.org/10.1016/j.ebiom.2022.103847

Dữ liệu gốc của biểu đồ này xuất phát từ tài liệu (1).

(2) [IF=11.4]VDR điều chỉnh chức năng tinh thể như một cơ chế bảo vệ chống lại tổn thương tế bào ống thận ở chuột tiểu đường. -Sinh học Redox -Tập 70, tháng 4 năm 2024, 103062.V

B5-05=giá trị thông số Kd, (cài 2)

(3)[IF=11.1]LONP1 nhắm mục tiêu HMGCS2 để bảo vệ chức năng tinh thần tinh thể và làm suy giảm bệnh thận mãn tính.EMBO Mol Med(2023)15: e16581https://doi.org/10.15252/emmm.202216581

Phân tích đồng vị miễn dịch huỳnh quang LONP1, HMGCS2 và ty thể trong mPTC (trên, thang: 20um) và mô thận người (dưới, thang: 200um).

B5-03=giá trị thông số Ki, (cài 3)