Nguyên bào sợi da người HFF1 (STR)

Nguyên bào sợi da người HFF1 (STR)Điều kiện nuôi dưỡng

Hai,Xử lý sau khi nhận hàng

Phương pháp xử lý tế bào hồi sức:Sau khi nuôi dưỡng đến trạng thái tốt, đổ đầy dịch nuôi cấy và bịt kín miệng bình là cách tốt nhất để vận chuyển tế bào. Các tế bào nhận được phun 75% cồn toàn bộchai tế bào,Vô trùng nghiêm ngặtsauĐặt chai tế bào trong môi trường nuôi cấy trong 2-4 giờ để ổn định trạng thái tế bào. Sau khi đặt kính hiển vi quan sát sự phát triển của tế bào, và các tế bào được chụp ảnh nhiều lần khác nhau để bảo quản (tốt nhất là 40x, 100x, 200x mỗi người một tấm), ba ngày đầu tiên của hình ảnh là quan trọng sau bán hàng cơ sở, không cung cấp hình ảnh mặc định nhận được trạng thái tốt.

Phương pháp xử lý tế bào đông lạnh:Sau khi nhận được tế bào, quan sát xem có còn đá khô trong hộp bọt hay không, ống lưu trữ đông lạnh có còn nguyên vẹn hay không, nếu phát hiện ống lưu trữ đông lạnh có hiện tượng tan băng hay hư hỏng, xin vui lòng chụp ảnh kịp thời và liên hệ với chúng tôi. Nếu tế bào không liên lạc với chúng tôi trong vòng ba ngày kể từ ngày ký nhận, thì mặc định là nhận hàng tốt. Phục hồi ống thứ nhất nếu có vấn đề về hoạt động, xin vui lòng liên hệ với chúng tôi kịp thời, nhân viên kỹ thuật sau khi trao đổi hướng dẫn với bạn sẽ phục hồi ống thứ hai,Không liên lạc với bên chúng tôi, tự ý phục hồi ống thứ hai xảy ra vấn đề thì không được bán.

Các bước nuôi cấy tế bào

a,Di truyền tế bào: NếuKhi không quá 80% hợp lưu, dung dịch nuôi cấy đóng chai được thu thập vào ống ly tâm, để lại 5ml môi trường, đặt 37 ℃, 5% CO₂Nuôi dưỡng lồng ấp; Nếu mật độ tế bào trên 80%, có thể tiến hành nuôi cấy truyền thừa.

tế bào dán tườngCác bước như sau:

1) bỏ đi nuôi cấy thượng thanh, dùng PBS không chứa canxi, magiê ion tẩy tế bào 1-2 lần;

2) Thêm 1mL dung dịch tiêu hóa (0,25% Trypsin-0,53mM EDTA) trong chai nuôi cấy, đặt trong hộp nuôi cấy để tiêu hóa 1 phút, sau đó quan sát sự tiêu hóa của tế bào dưới kính hiển vi, nếu hầu hết các tế bào tròn và rơi ra, nhanh chóng lấy lại bàn điều hành, sau khi nhấp vài lần vào chai nuôi cấy, thêm 6ml với 10% huyết thanhMôi trườngChấm dứt tiêu hóa;

3) nhẹ nhàng thổi các tế bào, sau khi tách ra hút vào ống ly tâm, 1000 vòng/phút ly tâm 5-8 phút, loại bỏ chất lỏng trên, bổ sung 1-2mL môi trường sau đó thổi đều;

(4) Bổ sung môi trường cho mỗi chai 5 - 6 ml, chia dịch đình chỉ tế bào theo tỷ lệ 1: 2 vào đĩa nuôi cấy 6 cm mới chứa môi trường 5 - 6 ml hoặc trong chai nuôi cấy T2.

(Tức là 1 chai T25 được tiêm vào 2 chai T25 hoặc 2 đĩa petri 6cm)

Tế bào lơ lửngCác bước chuyển giao như sau:

1, Phương pháp bán chất lỏng

Một nửa thay đổi chất lỏng điều trị, chai nuôi cấy thẳng đứng trong buồng nuôi cấy khoảng 1 giờ, nhẹ nhàng hút khoảng 3ml môi trường, sau đó cung cấp 3ml môi trường, nếu môi trường thay đổi màu sắc chậm, có thể trực tiếp thêm 500ul FBS, khi truyền có thể trực tiếp cung cấp 5ml môi trường nuôi cấy thành hai chai nuôi cấy, nói chung như vậy truyền 3 lần hoặc lâu hơn có thể ly tâm truyền một lần, loại bỏ tế bào chết.

2, Phương pháp trao đổi chất lỏng ly tâm

Nếu cần chia chai có thể thu thập huyền phù tế bào vào ống ly tâm 1000rpm, ly tâm 5 phút, bỏ đi làm sạch, bổ sung 1-2mL nuôi cấy sau khi treo lại hỗn hợp, huyền phù tế bào được chia theo tỷ lệ 1: 2 vào chai T25 mới, thêm 6-8ml theo yêu cầu của hướng dẫn cấu hình môi trường mới để duy trì sức sống tăng trưởng của tế bào, tiếp theo truyền theo theo tình hình thực tế theo tỷ lệ 1: 2~1: 5.

b.Tế bào đông lạnh:

Khi tế bào phát triển đến 80% diện tích của chai nuôi cấy, loại bỏ chất lỏng nuôi cấy trong chai nuôi cấy T25 và rửa tế bào bằng PBS một lần;

2, thêm 0,25% chất lỏng tiêu hóa khoảng 1ml vào chai nuôi cấy, đảo ngược kính hiển vi để xem, sau khi tế bào co lại tròn và thêm 5ml chất lỏng nuôi cấy để chấm dứt tiêu hóa, sau đó nhẹ nhàng thổi các tế bào để làm cho nó rơi ra, sau đó chuyển huyền dịch vào 15ml ống ly tâm, 1000rpm ly tâm 5min;

3. Vứt bỏ thanh lọc, tế bào lắng đọng thêm vào 1 ml dịch đông lạnh của sinh vật Nhã Cát (số hàng: C7001), trộn đều rồi cho vào ống đông lạnh.

4, đặt các tế bào đông lạnh trực tiếp vào tủ lạnh -80 ℃, nếu sau này để chuyển các tế bào vào bể nitơ lỏng, sau đóCần tủ lạnh -80oCtrungLưu trữ hơn 24 giờRồi chuyển vào bình nitơ lỏng.

C,Phục hồi tế bào:

Thiết bị vớt váng dầu mỡ cho xử lý nước thải -PetroXtractor - Well Oil Skimmer (mặt nạ), nhanh chóng đặt nó vào rã đông trong bồn tắm nước 37 ℃ cho đến khi không có tinh thể trong ống lưu trữ đông, sau đó lau các bức tường bên ngoài của ống lưu trữ đông với rượu 75%;

2、Di chuyển các tế bào trong ống đông lạnh để chứa Trong ống ly tâm 15ml cho môi trường 5ml, 5 phút ly tâm 1000rpm;

3、Bỏ đi làm sạch, lắng đọng với 5ml môi trường treo nặng, tiêm chủngChai T25, đặtỞ 37 độ C, 5% CO₂Nuôi cấy trong các tế bào nuôi cấy;

4. Ngày hôm sau, đổi lấy cơ sở bồi dưỡng mới để tiếp tục bồi dưỡng.

Lưu ý:Một số tế bào dán tường không vững, trong quá trình vận chuyển dễ dàng xảy ra bong ra tế bào, đây là hiện tượng bình thường. Nếu tách ra nhiều hơn có thể thu thập tất cả các chất lỏng nuôi cấy vào ống ly tâm, ly tâm 1000 vòng/phút,Thu thập sạch sẽĐào tạo quá độthời hạn: permanant-never Lift ban (VĨNH VIỄN) (Kết tủa thêm 1 - 2 ml, nhẹ nhàng thổi, treo nặng, tiêu hóa 1 - 2 phút sau, thêm 5 ml môi trường để chấm dứt phản ứng. Lại ly tâm, vứt bỏ thanh, thêm 1 - 2 ml cơ sở bồi dưỡng trọng huyền. Sau đó, truyền trong chai theo tỷ lệ 1: 2 (hai T25), bổ sung môi trường mới đến 5-8ml/chai và cuối cùng đưa vào37 ℃, 5% CO₂Nuôi cấy trong lồng nuôi cấy tế bào.

Chào mừng khách hàng cũ và mới tư vấn đặt hàng:Nguyên bào sợi da người HFF1 (STR)