Bộ xét nghiệm axit nucleic cho virus Meherpes loại 1 (EHV-1)

[Tên sản phẩm]Virus herpes ngựa1Loại (EHV-1) Bộ xét nghiệm axit nucleic

[Thông số kỹ thuật đóng gói]50T/hộp

[Phương pháp sản phẩm]Huỳnh quang thời gian thựcPhương pháp PCR

Virus herpes ngựa1Loại (EHV-1) Bộ xét nghiệm axit nucleic(Thành phần chính)

Chất lỏng phản ứng RT-PCR, chất lỏng enzyme hỗn hợp, kiểm soát dương tính, kiểm soát âm tính.

[Điều kiện lưu trữ và ngày hết hạn]

Tránh ánh sángBảo quản dưới 20 ℃, tránh đông lạnh và tan chảy lặp đi lặp lại, có hiệu lực trong 12 tháng.

[Dụng cụ áp dụng]
Máy đo PCR định lượng huỳnh quang thời gian thực đa kênh như ABI Series, Bio Rad Series, Agilent Stratagene MX Series, Roche LightCycler R480, Cepheid SmartCycler, Rotor Gene Series, Hàng Châu Boshi Series, v.v.

[Phương pháp kiểm tra]

Chuẩn bị thuốc thử (khu vực chuẩn bị thuốc thử)

（1) Lấy bộ dụng cụ ra khỏi tủ lạnh, lấy tác nhân cần thiết cho thí nghiệm ra khỏi bộ dụng cụ, tan chảy hoàn toàn và trộn đều và ly tâm ngay lập tức để loại bỏ chất lỏng gắn vào tường ống.

（2) Tính toán số lượng phản ứng (n) cần thiết cho thí nghiệm hiện tại và tính toán số lượng tác nhân khác nhau cần thiết cho thí nghiệm hiện tại dựa trên hệ thống phản ứng được hiển thị trong bảng dưới đây.

n=Kiểm soát âm tính (1T)+Kiểm soát dương tính (1T)+Dự trữ lỗi (1T)+Số mẫu

（3) Thêm thuốc thử trên vào ống ly tâm vô trùng, trộn đều và ly tâm tức thời. Phân phối thuốc thử vào ống phản ứng PCR theo khối lượng 20μL/ống.

（4) Chuyển ống phản ứng PCR đến khu vực xử lý mẫu sau khi đóng nắp ống phản ứng PCR. Các thuốc thử còn lại được đưa trở lại tủ lạnh dưới -20oC để bảo quản đông lạnh.

2. Chuẩn bị mẫu (khu vực xử lý mẫu)

VớiQIAGEN, Roche Công ty DNA Diqu Kit Diqu DNA, hoạt động cụ thể theo hướng dẫn của bộ.

3. Thêm mẫu

Chuẩn bị ở trênCác ống mẫu phản ứng PCR được thêm vào các mẫu DNA được xử lý 5 μl và thể tích cuối cùng 25 μl/ống, sau khi trộn đều nắp phản ứng PCR, ly tâm tốc độ thấp tức thì được chuyển sang dụng cụ PCR. Kiểm soát âm tính và chăm sóc dương tính thì mỗi bộ 5μL có kiểm soát âm tính hoặc kiểm soát dương tính, thể tích cuối cùng là 25μL/ống, sau khi trộn nắp phản ứng PCR, ly tâm tốc độ thấp tức thời, chuyển sang dụng cụ PCR.

PCR (Vùng khuếch đại PCR)

（1) Lấy ống phản ứng PCR đã chuẩn bị sẵn trong khu vực xử lý mẫu, đặt ở vị trí tương ứng của khe mẫu của máy đo PCR huỳnh quang định lượng thời gian thực và ghi lại thứ tự đặt.

（2) Nhấn bảng để thiết lập các thông số liên quan đến khuếch đại axit nucleic của thiết bị để khuếch đại PCR.

Ghi chú:Máy PCR huỳnh quang dòng ABI không chọn hiệu chỉnh ROX khi thiết lập, thiết lập nhóm dập tắt để chọn None.

REFERENCES [Tên bảng tham chiếu] (

1. Đánh giá hiệu quả của bộ dụng cụ:

（1) Kiểm soát dương tính: Có đường cong khuếch đại loại S điển hình hoặc giá trị Ct ≤35.

（2) Kiểm soát âm tính: Giá trị Ct>38 hoặc không có giá trị Ct, đường thẳng hoặc dốc nhẹ, không có giai đoạn tăng trưởng theo cấp số nhân.

2. Kết quả tiêu bản phán định:

（1) Tích cực: Kết quả xét nghiệm mẫu vật có giá trị Ct ≤ 35 hoặc có thời gian tăng trưởng theo cấp số nhân rõ rệt.

（2) Đáng ngờ: Kết quả xét nghiệm mẫu vật có giá trị Ct trong khoảng 35-38. Tại thời điểm này, mẫu vật nên được kiểm tra lặp lại, chẳng hạn như kết quả thí nghiệm lặp lại giá trị Ct vẫn trong phạm vi 35-38, với thời gian tăng trưởng theo cấp số nhân rõ ràng, nó được đánh giá là dương tính, nếu không thì âm tính.

（3) Âm tính: Kết quả xét nghiệm mẫu vật có giá trị Ct>38 hoặc không có giá trị Ct.

(Những hạn chế của phương pháp kiểm tra)

Khi nồng độ axit nucleic được kiểm tra trong mẫu thử thấp hơn mức tối đa của bộ dụng cụ nàyKết quả âm tính giả có thể xảy ra với giới hạn phát hiện dhi.

Bộ dụng cụ này chỉ được sử dụng để sàng lọc sơ bộ mẫu vật, đối với kết quả xét nghiệm dương tính của bộ dụng cụ này cần tiếp tục sử dụng phương pháp nuôi cấy để chẩn đoán chính xác.

[Lưu ý]

Các phòng thí nghiệm sử dụng bộ dụng cụ này phải được quản lý chặt chẽ theo các quy tắc quản lý của các phòng thí nghiệm kiểm tra mở rộng gen có liên quan được ban hành bởi các bộ phận quốc gia có liên quan;

Để tránhPhân hủy RNA, quá trình xử lý mẫu phải được vận hành trong điều kiện 0-4 ℃, và thử nghiệm trên máy bay ngay sau khi hoàn thành thí nghiệm; Thiết bị tiêu hao được sử dụng trong quá trình xử lý mẫu phải được xử lý không có ribozyme;

Tất cả các mặt hàng trong khu vực là đặc biệt và không được sử dụng chéo để tránh ô nhiễm; Sau khi phát hiện, bàn làm việc nên được làm sạch ngay lập tức;

Khi hấp thụ chất lỏng phản ứng, nên cố gắng tránh tạo bọt khí; trênTrước máy PCR, cần chú ý kiểm tra xem mỗi ống phản ứng có được che kín hay không, để tránh sự bay hơi của chất lỏng gây ra kết quả không chính xác;

Bộ dụng cụ Tất cả các tác nhân nên được trộn đều ở nhiệt độ bình thường trước khi sử dụng và phải ly tâm ngay lập tức;

Kiểm soát âm tính và dương tính được kết hợp trong bộ dụng cụ nên được chuyển hoàn toàn đến khu vực chuẩn bị mẫu vật trước khi sử dụng đầu tiên và được lưu trữ riêng;

Để ngăn chặn sự can thiệp huỳnh quang, nên tránh tiếp xúc trực tiếp với bàn tay trầnỐng phản ứng PCR và nên tránh bất kỳ dấu hiệu nào trên ống phản ứng PCR;

Đầu hút đã qua sử dụng trong quá trình phát hiện nên được đánh trực tiếp vào Sheng Yu10% axit hypoclorơ trong xi lanh chất thải, phát hiện kết thúc của ống phản ứng PCR, tránh mở nắp và khử trùng với các mặt hàng thải khác sau khi vứt bỏ; Bàn làm việc và các vật dụng thí nghiệm khác nhau nên được khử trùng thường xuyên bằng axit hypoclorơ 10%, rượu 75% hoặc đèn UV;

9. Các thông số liên quan đến việc mở rộng thiết bị phải được thiết lập theo các yêu cầu liên quan của hướng dẫn này; Thuốc thử số lô khác nhau không thể trộn lẫn; và được sử dụng trong thời gian có hiệu lực.