Fluo-8 AM, Cell Permeant Canxi Ion huỳnh quang Probe

Fluo-8 AM, Cell Permeant Canxi Ion huỳnh quang Probe

Giới thiệu sản phẩm

Fluo-8（Fluo-2 Medium Affinity）， Đây là đầu dò huỳnh quang Ca2+có bước sóng kích thích ánh sáng khả kiến sáng nhất hiện nay, với cường độ huỳnh quang gấp đôi so với Fluo-4 và mạnh hơn bốn lần so với Fluo-3. Fluo-8 có ái lực Ca2+trung bình, gần như gần Fluo-3，Fluo-4（Fluo-3: Kd=0.4μM、Fluo-4: Kd=0.36μM、Fluo-4: Kd= 0.389μM）， Sử dụng gần như giống với Fluo-3 và Fluo-4. Fluo-8 không chỉ duy trì các đặc tính phát hiện phổ thuận tiện của Fluo-3, với bước sóng kích thích tối đa 490nm và bước sóng phát xạ tối đa 514nm sau khi kết hợp với Ca2+. Nó cũng có khả năng tải tế bào và phản ứng Ca2+được cải thiện. Fluo-8 phụ thuộc vào nhiệt độ yếu, được ủ tốt ở nhiệt độ phòng hoặc 37 ° C, không giống như Fluo-3, yêu cầu nghiêm ngặt về ủ ở 37 ° C, tính năng này làm cho nó phù hợp hơn cho các thí nghiệm sàng lọc thông lượng cao HTS. Fluo-8 được sử dụng rộng rãi và tương thích với nhiều dòng tế bào và mẫu mục tiêu và không bị nhiễu bởi các phối tử hoặc tín hiệu của chính mục tiêu.

Fluo-8 có thể phát hiện sự thay đổi nồng độ ion canxi trong tế bào bằng kính hiển vi co-focus laser, máy đo tế bào dòng chảy, máy đo enzyme huỳnh quang, kính hiển vi huỳnh quang, v.v. Fluo-8, AM là một dẫn xuất acetylmethyl của Fluo-8, có tính thấm màng tế bào và dễ dàng xâm nhập vào tế bào chỉ bằng cách nuôi cấy đơn giản. Một khi bên trong tế bào, Fluo-8 không thấm màng được tạo ra bằng cách cắt bởi enzyme lactonase của nó, do đó bị mắc kẹt trong tế bào để thực hiện các chức năng sinh lý tương ứng.

Sản phẩm này ở dạng bột đông khô trong gói nhỏ 50ug, nồng độ khuyến cáo là 1-5uM khi được sử dụng để kiểm tra mức Ca2+trong tế bào.

Fluo-8 AM, Cell Permeant Canxi Ion huỳnh quang Probe

Tính năng cơ bản

Đồng nghĩa: Fluo-8, AM

Công thức phân tử: C50H50N2O23

Trọng lượng phân tử：1046.9316

Độ hòa tan: Hòa tan trong DMSO (1-5 mM)

Cựu / Em: 490/514nm (kết hợp Ca2+);

Điều kiện bảo quản: Bảo quản khô ở - 20 độ C, thời hạn 1 năm.

Fluo-8 AM, Cell Permeant Canxi Ion huỳnh quang Probe

Cách sử dụng

Chuẩn bị thuốc thử

1) Pha chế Pluronic F-127 Mother Liquid: Lấy 100mg bột Pluronic F-127 (Mã số: Cat No. FS0432) thêm 500ul DMSO, pha chế thành 20% (W/V) Mother Liquid. Quá trình hòa tan cần 20-30 phút sưởi ấm ở 40-50 ℃. Dung dịch được bảo quản ở nhiệt độ phòng, không cần làm lạnh. Nếu có kết quả kết tinh, có thể đun nóng lại để hòa tan, không ảnh hưởng đến việc sử dụng.

2）HHBS BUFFER(1X Hank’s Balanced Salt Solution with 20mM HEPES buffer,pH7.3) Hoặc các chất đệm sinh lý khác.

B Các bước hoạt động

1) Hòa tan Fluo-8 với DMSO khan, AM được pha chế thành dung dịch lưu trữ 1-5mM hoặc Fluo-8 đã được pha chế, dung dịch lưu trữ AM được lấy ra ở nhiệt độ phòng trở lại. (Ví dụ: để pha 4 mM, cần thêm DMSO khan 11,9 ul vào 50ugFluo-8, AM).

2) Pha loãng dung dịch làm việc từ 1-10uM với HHBS hoặc dung dịch đệm sinh lý khác Fluo-8, lưu trữ AM+DMSO, thêm một lượng thích hợp dung dịch Pluronic F-127 20% trước thời hạn, để nồng độ cuối cùng của nó là 0,02%.

Lưu ý (1): Fluo-8, AM được sử dụng trong hầu hết các tế bào với nồng độ tải đề nghị là 4-5uM, nồng độ sử dụng cụ thể cần được tối ưu hóa theo yêu cầu thí nghiệm. Để tránh nhiễm độc tế bào do tải quá mức, nên cố gắng sử dụng nồng độ đầu dò thấp zui trên cơ sở kết quả thu được.

[Lưu ý (2)]: Fluo-8, dịch làm việc AM cần được sử dụng ngay bây giờ để tránh bị đông lạnh nhiều lần.

Pluronic F-127 ngăn ngừa Fluo-8, AM trùng hợp trong dung dịch và đẩy đầu dò vào tế bào tốt hơn. Tuy nhiên, Pluronic F-127 có thể làm giảm sự ổn định của Fluo-8, AM, vì vậy chỉ nên thêm vào khi pha chế chất lỏng làm việc và không nên thêm dung dịch lưu trữ để bảo quản lâu dài.

3) [Tùy chọn] Nếu trong tế bào có chứa chất vận chuyển anion hữu cơ, propionesu (Probenecid, 1-2,5 mM) hoặc sulfapyrazone (Sulfinpyrazone, 0,1-0,25 mM) có thể cần phải được thêm vào môi trường nuôi cấy tế bào để giảm rò rỉ đầu dò khử ester hóa.

[Lưu ý (1)]: Dung dịch lưu trữ propionesu hoặc sulfapidone khá thiên vị, vì vậy pH cần được điều chỉnh lại sau khi thêm môi trường.

4) Fluo-8 đã chuẩn bị, dịch làm việc AM được thêm vào tế bào với số lượng tùy thuộc vào tế bào bao phủ. Ủ ở 37 độ C hoặc nhiệt độ phòng 20 - 60 phút.

[Ghi chú (1)]: Về thời gian ủ, nếu không thể xác định được làm thí nghiệm CI đầu tiên, đề nghị ủ trước 30 phút, xem hiệu ứng huỳnh quang; Giảm thời gian thích hợp nếu tế bào chết nhiều hơn; Nếu cường độ huỳnh quang quá yếu, hãy kéo dài thời gian thích hợp.

[Lưu ý (2)]: Giảm nhiệt độ tải đầu dò có thể làm giảm hiện tượng phân tán của đầu dò.

5) Hút chất lỏng làm việc nhuộm và thay thế nó bằng HHBS hoặc bộ đệm sinh lý khác (nếu cần thiết, sử dụng bộ đệm có chứa chất ức chế vận chuyển như axit propionic 2,5mM), loại bỏ các đầu dò dư thừa.

6) Phát hiện bằng các dụng cụ thích hợp như đồng tập trung laser, máy đo tế bào dòng chảy, máy đo enzyme huỳnh quang, v.v., với bước sóng Ex/Em=490/520nm.

[Lưu ý (1)]: Fluo-8, sau khi AM xâm nhập vào tế bào, bị phân hủy qua esterase để tạo thành Fluo-8, không bị mắc kẹt trong tế bào chất dưới dạng liên kết hóa trị. Do đó, không thể xử lý cố định các tế bào sống được nạp thuốc nhuộm để kiểm tra mức Ca2+.

Lưu ý

1) Thuốc nhuộm huỳnh quang đồng nhất trong dập tắt vấn đề, xin vui lòng cố gắng chú ý tránh ánh sáng để làm chậm dập tắt huỳnh quang.

2) Acetoxymethyl ester (AM) dễ dàng hấp thụ độ ẩm, sau khi lấy ra khỏi tủ lạnh xin vui lòng đặt trong môi trường khô đến nhiệt độ phòng sau khi mở. Do dấu vết của thuốc thử, xin vui lòng ly tâm nó một thời gian ngắn trước khi mở để đảm bảo bột rơi vào đáy ống.

3) Fluo-8, AM trong điều kiện nhiệt độ thấp hơn như 4 ℃, bồn tắm nước đá sẽ đông cứng và dính vào đáy ống ly tâm, hoặc tường ống hoặc nắp ống, có thể được sử dụng sau khi nhiệt độ 20-25 ℃ trong một thời gian ngắn để hòa tan hoàn toàn.

4) Fluo-8, AM sử dụng lần đầu tiên, đề nghị dung dịch lưu trữ được phân phối hiện tại để sử dụng, được chia thành liều duy nhất, được thực hiện nghiêm ngặt ở ≤-20 ℃ niêm phong khô và đông lạnh để ngăn ngừa độ ẩm. Để đảm bảo kết quả thử nghiệm tốt, hãy cố gắng sử dụng nó trong thời gian ngắn.

5) Vì sự an toàn và sức khỏe của bạn, vui lòng mặc quần áo thử nghiệm và vận hành bằng găng tay dùng một lần.