CCK-8 Kit (xét nghiệm tăng sinh tế bào và độc tính)

Cell Counting Kit-8, viết tắt là CCK-8 Kit, là một phương pháp thay thế cho phương pháp MTT, là một bộ phát hiện độ nhạy cao nhanh chóng được sử dụng rộng rãi trong tăng sinh tế bào và độc tính tế bào dựa trên WST (muối tetrazole hòa tan trong nước, tên hóa học: 2- (2-methoxyl-4-nitrophenyl) -3- (4-nitrophenyl) -5- (2,4-disulfonylbene) -2H-tetrazole monosodium). Nó có thể được sử dụng để sàng lọc thuốc, xác định tăng sinh tế bào, xác định độc tính tế bào, nhạy cảm với thuốc khối u và các xét nghiệm khác.

Hướng dẫn sử dụng:
B5-03=giá trị thông số Ki, (cài 3)
1, Đầu tiên sử dụng bảng đếm tế bào để đếm số lượng tế bào trong đình chỉ tế bào được chuẩn bị, sau đó tiêm tế bào.
2. Theo tỷ lệ lần lượt pha loãng thành một độ dốc nồng độ tế bào, thông thường phải làm 3 - 5 độ dốc nồng độ tế bào, mỗi nhóm 3 - 6 lỗ kép.
3, nuôi cấy sau khi tiêm vào tường tế bào, sau đó thêm CCK-8 nuôi cấy thuốc thử sau một thời gian nhất định để xác định giá trị OD, tạo ra một đường cong tiêu chuẩn với số lượng tế bào là tọa độ ngang (trục X), giá trị OD là tọa độ dọc (trục Y). Từ đường cong tiêu chuẩn này có thể xác định số lượng tế bào của một mẫu không xác định (đường cong tiêu chuẩn này được thử nghiệm với điều kiện là các điều kiện thử nghiệm phải phù hợp để xác định số lượng tế bào được tiêm chủng và thời gian nuôi cấy sau khi bổ sung CCK-8). ）

II. Kiểm tra hoạt động tế bào

1, Tiêm dịch đình chỉ tế bào (100 µL/lỗ) trong 96 tấm lỗ. Đặt một tấm nuôi cấy trong một tủ nuôi cấy trước (ở 37 ° C, 5% CO2).

Thêm dung dịch CCK-8 10 µL vào mỗi lỗ (cẩn thận không tạo bong bóng trong lỗ, chúng sẽ ảnh hưởng đến việc đọc giá trị OD).

3. Ủ 1 - 4 tiếng trong hộp nuôi cấy.

4. Dùng máy đo enzyme để xác định độ hấp thụ ánh sáng ở 450 nm.

Nếu giá trị ODD tạm thời không được xác định, để xác định sau này, bạn có thể thêm dung dịch HCl hoặc 1% SDS (W/V) 10 µL 0.1M vào mỗi lỗ và che tấm nuôi cấy khỏi ánh sáng để bảo quản ở nhiệt độ phòng. Độ hấp thụ không thay đổi trong 24 giờ.

B5-03=giá trị thông số Ki, (cài 3)

1, Cấu hình đình chỉ tế bào 100 µL trong 96 tấm lỗ. Các tấm nuôi cấy sẽ được nuôi cấy trước trong tủ trong 24 giờ (ở 37 ° C, 5% CO2).

2. Thêm 10 ml chất cần đo nồng độ khác nhau vào bảng nuôi cấy. Ủ trong một khoảng thời gian thích hợp (ví dụ: 6, 12, 24 hoặc 48 giờ).

Thêm dung dịch CCK-8 10 µL vào mỗi lỗ (cẩn thận không tạo bong bóng trong lỗ, chúng sẽ ảnh hưởng đến việc đọc giá trị OD). Nếu chất được thử nghiệm có tính oxy hóa hoặc giảm, môi trường tươi có thể được thay thế (loại bỏ môi trường và rửa tế bào hai lần với môi trường, sau đó thêm môi trường mới) trước khi thêm CCK-8, loại bỏ tác dụng của thuốc.

4. Ủ 1 - 4 giờ trong hộp nuôi cấy.

5. Dùng máy đánh dấu enzyme để xác định độ hấp thụ ánh sáng ở 450 nm.

Nếu giá trị ODD tạm thời không được xác định, để xác định sau này, bạn có thể thêm dung dịch HCl hoặc 1% SDS (W/V) 10 µL 0.1M vào mỗi lỗ và che tấm nuôi cấy khỏi ánh sáng để bảo quản ở nhiệt độ phòng. Độ hấp thụ không thay đổi trong 24 giờ.

Tính toán sức sống:

Tế bào sống (%)=[A (định lượng) -A (trống)]/A (0 định lượng) -A (trống)] × 100

A (định lượng): hấp thụ của các lỗ có tế bào, dung dịch CCK-8 và dung dịch thuốc

A (trống): hấp thụ của các lỗ có môi trường và dung dịch CCK-8 mà không có tế bào

A (0 liều): hấp thụ của lỗ có tế bào, dung dịch CCK-8 mà không có dung dịch thuốc

Cell Vitality: Cell Boost Vitality hoặc Cell Toxic Vitality

Lưu ý:

a) Đề nghị trước tiên làm vài lỗ dò tìm số lượng tế bào tiêm chủng và thời gian nuôi cấy sau khi thêm thuốc thử CCK - 8.

Các tế bào bạch cầu có thể cần được nuôi cấy trong một thời gian dài.

③ Khi sử dụng tấm 96 lỗ tiêu chuẩn, lượng tiêm chủng tối thiểu cho các tế bào dán tường ít nhất là 1.000/lỗ (môi trường 100 µL). Độ nhạy tương đối thấp khi phát hiện các tế bào máu trắng, do đó liều lượng tiêm chủng được khuyến cáo không ít hơn 2.500/lỗ (môi trường 100 µL). Nếu bạn đang thử nghiệm với tấm 24 lỗ hoặc 6 lỗ, trước tiên hãy tính lượng tiêm tương ứng cho mỗi lỗ và thêm dung dịch CCK-8 bằng 10% tổng thể tích môi trường trên mỗi lỗ.

④ Nếu không có bộ lọc 450nm, bạn có thể sử dụng bộ lọc có độ hấp thụ từ 430 đến 490 nm, nhưng độ nhạy phát hiện 450nm là cao nhất.

⑤ Độ hấp thụ của màu đỏ phenol trong môi trường nuôi cấy có thể được loại bỏ khi tính toán bằng cách khấu trừ độ hấp thụ của đáy trong lỗ trống, do đó không ảnh hưởng đến việc phát hiện.