BxPC3； Tế bào ung thư tuyến tụy tại chỗ (STR)

Một, BxPC3； Tế bào ung thư tuyến tụy tại chỗ (STR)Điều kiện nuôi dưỡng

Hai,BxPC3； Tế bào ung thư tuyến tụy tại chỗ (STR)Xử lý sau khi nhận hàng

Phương pháp xử lý tế bào hồi sức:Sau khi nuôi dưỡng đến trạng thái tốt, đổ đầy dịch nuôi cấy và bịt kín miệng bình là cách tốt nhất để vận chuyển tế bào. tế bào nhận được75% rượu phun toàn bộtế bàoChai，Vô trùng nghiêm ngặtsauĐặt chai tế bào trong một môi trường nuôi cấy2-4 giờ để ổn định tình trạng tế bào。Sau khi ngồi+Lĩnh vực thức ăn chăn nuôi: Nguyên liệu bổ sung thực phẩm vi chất trong chăn nuôi (tốt nhất40x, 100x, 200x mỗi tấm)，Ảnh 3 ngày đầulàCăn cứ hậu mãi quan trọng, không cung cấp ảnh mặc định nhận được trạng thái tốt.

Phương pháp xử lý tế bào đông lạnh:Sau khi nhận được tế bào, quan sát xem có còn đá khô trong hộp bọt hay không, ống lưu trữ đông lạnh có còn nguyên vẹn hay không, nếu phát hiện ống lưu trữ đông lạnh có hiện tượng tan băng hay hư hỏng, xin vui lòng chụp ảnh kịp thời và liên hệ với chúng tôi. Nếu tế bào không liên lạc với chúng tôi trong vòng ba ngày kể từ ngày ký nhận, thì mặc định là nhận hàng tốt. Phục hồi ống thứ nhất nếu có vấn đề về hoạt động, xin vui lòng liên hệ với chúng tôi kịp thời, nhân viên kỹ thuật sau khi trao đổi hướng dẫn với bạn sẽ phục hồi ống thứ hai,Không liên lạc với bên chúng tôi, tự ý phục hồi ống thứ hai xảy ra vấn đề thì không được bán.

Các bước nuôi cấy tế bào

a,Di truyền tế bào：nếuKhông vượt quáỞ mức độ hội tụ 80%, dung dịch nuôi cấy đóng chai được thu thập vào ống ly tâm, để lại 5ml môi trường, đặt 37 ℃, 5% CO₂Nuôi dưỡng lồng ấp;Nếu mật độ tế bàosiêu80% có thể nuôi cấy。

tế bào dán tườngCác bước như sau:

1) bỏ đi nuôi cấy thượng thanh, dùng PBS không chứa canxi, magiê ion tẩy tế bào 1-2 lần;

2) Thêm 1mL dung dịch tiêu hóa (0,25% Trypsin-0,53mM EDTA) trong chai nuôi cấy, đặt trong hộp nuôi cấy để tiêu hóa 1 phút, sau đó quan sát sự tiêu hóa của tế bào dưới kính hiển vi, nếu hầu hết các tế bào tròn và rơi ra, nhanh chóng lấy lại bàn điều hành, sau khi nhấp vài lần vào chai nuôi cấy, thêm 6ml với 10% huyết thanhMôi trườngChấm dứt tiêu hóa;

3) nhẹ nhàng thổi các tế bào, sau khi tách ra hút vào ống ly tâm, 1000 vòng/phút ly tâm 5-8 phút, loại bỏ chất lỏng trên, bổ sung 1-2mL môi trường sau đó thổi đều;

(4) Bổ sung môi trường cho mỗi chai 5 - 6 ml, chia dịch đình chỉ tế bào theo tỷ lệ 1: 2 vào đĩa nuôi cấy 6 cm mới chứa môi trường 5 - 6 ml hoặc trong chai nuôi cấy T2.

(Tức là1 chai T25 truyền qua 2 chai T25 hoặc 2 đĩa petri 6cm)

Tế bào lơ lửngCác bước chuyển giao như sau:

1, Phương pháp bán chất lỏng

Xử lý chất lỏng bán thay đổi, chai nuôi cấy thẳng đứng đứng trong tủ nuôi cấyKhoảng 1 giờ, nhẹ nhàng hấp thụ khoảng 3ml môi trường, sau đó cung cấp 3ml môi trường, nếu môi trường thay đổi màu sắc chậm, có thể thêm trực tiếp 500ul FBS, khi truyền có thể trực tiếp cung cấp 5ml môi trường nuôi cấy thành hai chai nuôi cấy, nói chung như vậy truyền 3 lần hoặc lâu hơn có thể ly tâm truyền một lần, loại bỏ tế bào chết.

2, Phương pháp trao đổi chất lỏng ly tâm

Nếu cần chia nhỏ, có thể thu thập hệ thống treo tế bào vào ống ly tâm.1000rpm， Ly tâm 5 phút, bỏ đi thanh lọc, bổ sung 1-2mL nuôi cấy sau khi treo lại, sau khi treo lại, đình chỉ tế bào được chia theo tỷ lệ 1: 2 vào chai T25 mới, thêm 6-8ml theo yêu cầu của hướng dẫn cấu hình môi trường mới để giữ cho tế bào phát triển sức sống, tiếp theo truyền theo theo tình hình thực tế theo tỷ lệ 1: 2~1: 5.

b.Tế bào đông lạnh:

Khi tế bào phát triển đến 80% diện tích của chai nuôi cấy, loại bỏ chất lỏng nuôi cấy trong chai nuôi cấy T25 và rửa tế bào bằng PBS một lần;

2, thêm 0,25% chất lỏng tiêu hóa khoảng 1ml vào chai nuôi cấy, đảo ngược kính hiển vi để xem, sau khi tế bào co lại tròn và thêm 5ml chất lỏng nuôi cấy để chấm dứt tiêu hóa, sau đó nhẹ nhàng thổi các tế bào để làm cho nó rơi ra, sau đó chuyển huyền dịch vào 15ml ống ly tâm, 1000rpm ly tâm 5min;

mạc đường ruột muqueuses digestives (Số hàng:C7001）， Trộn đều rồi cho vào ống lưu trữ đông lạnh.

4, Đặt tế bào đông lạnh trực tiếp vào-Tủ lạnh 80 độ C, như sau này.muốnchuyển tế bào vào bể nitơ lỏng,ThìCần ở-80 ℃ Tủ lạnhtrunglưu trữHơn 24 giờlạiChuyển vào bình nitơ lỏng.

C,Phục hồi tế bào:

1、Thiết bị vớt váng dầu mỡ cho xử lý nước thải -PetroXtractor - Well Oil Skimmer (Chú ýMặcBảo vệmặt nạ), nhanh chóng đặt nó vào rã đông trong bồn tắm nước 37 ℃ cho đến khi không có tinh thể trong ống lưu trữ đông, sau đó lau các bức tường bên ngoài của ống lưu trữ đông với rượu 75%;

2、Di chuyển các tế bào trong ống đông lạnh để chứa Trong ống ly tâm 15ml cho môi trường 5ml, 5 phút ly tâm 1000rpm;

3、Bỏ đi, lắng đọng lại.5ml môi trường treo lại, tiêm chủngĐếnchai văn hóa t25,buôngvào37 ℃, 5% CO₂Nuôi cấy trong các tế bào nuôi cấy;

4、Ngày hôm sau, đổi lấy cơ sở bồi dưỡng mới tiếp tục bồi dưỡng.

Lưu ý:Một số tế bào dán tường không vững, trong quá trình vận chuyển dễ dàng xảy ra bong ra tế bào, đây là hiện tượng bình thường. Nếu tách ra nhiều hơn có thể thu thập tất cả dung dịch nuôi cấy vào ống ly tâm,1000rpm ly tâm 5 phút,Thu thập sạch sẽĐào tạo quá độthời hạn: permanant-never Lift ban (VĨNH VIỄN) (Kết tủa tham gia1-2ml， Thổi nhẹ nhàng, treo nặng, sau 1-2 phút tiêu hóa, thêm 5ml môi trường để chấm dứt phản ứng. Lại ly tâm, vứt bỏ thanh, thêm 1 - 2 ml cơ sở bồi dưỡng trọng huyền. Sau đó, truyền trong chai (hai T25) theo tỷ lệ 1: 2, bổ sung môi trường mới đến 5-8ml/chai và cuối cùng đưa vào 37 ° C, 5% CO₂Nuôi cấy trong lồng nuôi cấy tế bào.