Thuốc thử sinh học

Một,Bộ xét nghiệm MycoplasmaĐặc điểm sản phẩm:

(1) Chỉ cần 1 μl nuôi cấy chất lỏng trên tế bào và 1 nồi nước, không cần chiết xuất DNA gen, không cần kính hiển vi huỳnh quang, máy PCR, máy điện di, máy chụp ảnh gel, máy phát quang sinh học và các thiết bị thí nghiệm phức tạp khác;

(2) Chỉ cần 1h cho kết quả, phương pháp phát hiện mycoplasma tế bào đơn giản và nhanh nhạy;

(3) chỉ cần một bước để hoàn thành toàn bộ thí nghiệm, kết quả thí nghiệm theo sự thay đổi màu sắc của chất lỏng phản ứng trực quan và dễ dàng để phân biệt bằng mắt thường, không cần điện di, tránh nhiều bước hoạt động mở nắp mang lại rủi ro dương tính giả;

(4) Độ nhạy cao hơn nhiều so với phương pháp PCR, có khả năng phát hiện nhiều loại mycoplasma thường gặp trong nuôi cấy tế bào (Mycoplasma mũi lợn, Mycoplasma jing-amine, Mycoplasma miệng, Mycoplasma lei cholestyrene, Mycoplasma lên men, Mycoplasma nước bọt, Mycoplasma hình người, Mycoplasma lê, chiếm 98% ô nhiễm Mycoplasma).

Hai,Bộ xét nghiệm MycoplasmaThành phần (25T):

Ba, bước thí nghiệm:

1- Tên đề tài: Giải pháp nâng cao hiệu quả đầu tư phát triển kết cấu hạ tầng thương mại (

Các tế bào được kiểm tra trong 2-3 ngày nuôi cấy và độ tan chảy tốt nhất đạt trên 80% khi lấy thể tích trên 200 μL của dịch nuôi cấy tế bào, ly tâm theo 200g trong 5 phút, sau đó lấy chất lỏng sạch để kiểm tra tiếp theo (không lấy 50 μL dịch nuôi cấy và lắng đọng tế bào ở đáy ống là được);

(2) Xây dựng hệ thống phản ứng (đầu tiên đặt dung dịch A, dung dịch B, kiểm soát dương tính, dầu parafin trên băng ngay sau khi tan và tan chảy)

Lấy dung dịch A ra khỏi -20 ℃, và sau khi tan băng và tan chảy, trộn nhẹ lên xuống. Hệ thống phản ứng được xây dựng trong ống ly tâm theo số lượng mẫu tế bào được đo như sau (điều quan trọng là quá trình xây dựng hệ thống phản ứng được thực hiện trên băng);

Lưu ý: Mỗi thí nghiệm cần 1 đối chứng âm tính, 1 đối chứng dương tính và do lỗi pipet tồn tại trong pipet, vì vậy thử nghiệm N mẫu thường được khuyến nghị để xây dựng N+3 hệ thống phản ứng trên

Nhẹ nhàng trộn đều với bộ dao động, sau đó lắp đặt vào ống PCR (đề nghị sử dụng ống PCR thể tích 200 μl), mỗi ống lắp đặt 24 μl dung dịch phản ứng sau khi trộn đều trên;

(3) Mẫu trên (Điều rất quan trọng là toàn bộ quá trình mẫu trên phải được giữ trên băng, đặc biệt là dầu parafin phủ trên chất lỏng phản ứng cần được làm lạnh trước trên băng)

Mẫu được thử nghiệm: thêm 1 μl dung dịch nuôi cấy vào ống phản ứng sau khi ly tâm được thử nghiệm được làm sạch, sau đó nhẹ nhàng thổi 5 lần bằng cách di chuyển súng thêm chất lỏng này lên xuống;

Kiểm soát âm tính: không thêm bất kỳ mẫu nào hoặc thêm 1 μl nước vô trùng;

Kiểm soát dương tính: thêm mẫu kiểm soát dương tính 1 μl, sau đó thổi nhẹ nhàng 5 lần với chuyển động lên xuống của súng này;

25 μl dầu sáp parafin sau đó được thêm vào nhẹ nhàng trên mỗi dung dịch ống phản ứng (phản ứng được thực hiện trong nồi nước) để ngăn chặn sự bốc hơi của chất lỏng dẫn đến kết quả không chính xác. Khi thêm dầu parafin, hãy chú ý mỗi lần thay đầu súng để tránh nhiễm chéo giữa các mẫu. Nếu phản ứng được thực hiện trong máy PCR, không cần thêm dầu parafin.

(4) Phản ứng

Đặt nhiệt độ nồi nước hoặc máy đo PCR thành 61 ℃, đặt vào ống phản ứng, ủ 60 phút;

Ghi chú:

1. Nhiệt độ thực tế của nồi tắm nước có thể bị lệch so với nhiệt độ cài đặt, nên hiệu chuẩn bằng nhiệt kế trước. Trên thực tế, phản ứng 59-63 ℃ có thể được thực hiện, nhưng nó sẽ ảnh hưởng đến độ nhạy phát hiện;

2Sản phẩm phản ứng không được mở nắp, nếu không keo khí sinh ra sẽ dẫn đến sự xuất hiện dương tính giả sau này. Nên băng ống phản ứng trong túi nhựa hoặc găng tay, vứt vào thùng rác đặc biệt và làm sạch kịp thời;

3, không nên sử dụng lò nướng hoặc bồn tắm kim loại cho phản ứng sưởi ấm;

(5) Đánh giá kết quả

Sau khi phản ứng 61 độ C 60 phút, lập tức lấy ống phản ứng ra, đặt ở nhiệt độ phòng. Quan sát kết quả phản ứng trong môi trường có ánh sáng tốt (nên sử dụng giấy trắng làm nền). Nếu chất lỏng phản ứng vẫn còn màu xanh tím, nó được đánh giá là âm tính; Nếu dịch phản ứng là màu xanh da trời, thì phán định là dương tính.

IV. Tài liệu liên quan

1, ShiyuHe, YanzhiHuang, YanlingZhao. AReverseTranscription-PolymeraseSpiralReaction(RT-PSR)-BasedRapidCoxsackievirusA16DetectionMethodandItsApplicationintheClinicalDiagnosisofHand,Foot,andMouthDisease. FrontiersinMicrobiology.2020; 12(11):734-743.

2, Audrey Jean, Florence Tardy, Omran Allatif. Đánh giá nhiễm trùng tế bào bằng microplasma của cấu trúc tế bào bằng PCR được thực hiện bằng cặp primer phổ quát nhắm vào mảnh 1,5 kb của gen 16SrRNA. PLOSONE.2017; 12(2):e0172358.

3、ZohreSoheily, MohammadSoleimani, KeivanMajidzadeh-Ardebili. Phát hiện ô nhiễm Mycoplasma của văn hóa tế bào bằng phương pháp khuếch đại đồng nhiệt ALoop-Mediated. CellJ.2019; 21(1):43-48.

4, XinXu, XueyuWang, WenHu. Một polymerase cải thiện liên kết chéo phản ứng xoắn ốc thử nghiệm chẩn đoán nhanh chó parvovirus2 nhiễm trùng. FrontiersinVeterinaryScience.2020; 7(57):1629-1636.