Aflatoxin M1 cột ái lực miễn dịch

Hướng dẫn sử dụng cột ái lực miễn dịch M1 (Total Aflatoxin)

[Tóm tắt]

Aflatoxin (Aflatoxin), một chất chuyển hóa thứ cấp được sản xuất bởi nấm như Aspergillus flavus và Aspergillus ký sinh, được Cơ quan Nghiên cứu Ung thư của Tổ chức Y tế Thế giới phân loại thành chất gây ung thư loại 1, đồng thời là một chất độc hại cao * được tìm thấy rộng rãi trong nhiều loại thực phẩm. Các loại ngũ cốc như ngô, đậu phộng, gạo, lúa mì và các sản phẩm phụ của chúng là nguồn aflatoxin chính, trong khi aflatoxin B1 trong thức ăn được sản xuất sau khi chuyển hóa động vật, aflatoxin M1 vẫn rất độc và gây ung thư, cũng được tìm thấy rộng rãi trong sữa, máu, tổ chức và các loại thực phẩm khác. Aflatoxin là một trong ba tác nhân chính gây ung thư gan và là nguyên nhân chính gây ra các bệnh như ung thư dạ dày và ruột, gây ra mối đe dọa lớn đối với sức khỏe con người. Các quốc gia trên thế giới nghiêm ngặt về aflatoxin trong thực phẩm và thức ăn chăn nuôi. Bắt đầu từ ngày 1 tháng 6 năm 2010, tiêu chuẩn quốc gia về an toàn sữa đã quy định việc kiểm tra aflatoxin M1 trong sữa và các sản phẩm sữa, phương pháp xử lý mẫu chủ yếu được sử dụng là phương pháp thanh lọc cột ái lực miễn dịch.

[Phạm vi áp dụng và hiệu suất]

Dòng sản phẩm Mycotoxin Immuno Pillar của công ty có dạng thử nghiệm là một cột ái lực miễn dịch hiệu suất cao được thiết kế để làm sạch (thanh lọc) hoặc tập trung các mẫu trước khi tiến hành HPLC (HPLC), GC-MS (sắc ký khí - khối phổ liên kết), ELISA (xét nghiệm chất hấp phụ miễn dịch liên kết enzyme).

Dùng để kiểm tra định tính, định lượng sữa, sữa bột, sữa lên men, pho mát, kem và các mẫu khác trong aflatoxin M1 cũng như trước khi xử lý mẫu.

Công suất cột: ≥100ng

Tỷ lệ phục hồi: ≥90%

[Nguyên tắc thử nghiệm]

Cơ sở để xác định sản phẩm này là phản ứng kháng nguyên kháng thể, Aflatoxin M1 kháng thể đơn dòng gắn liền với gel trong cột, Aflatoxin M1 trong mẫu trải qua chiết xuất, lọc, pha loãng, sau đó chiết xuất mẫu từ từ thông qua Aflatoxin M1 cột phân tích ái lực miễn dịch, trong cột ái lực miễn dịch, độc tố liên kết với kháng thể, sau đó rửa cột ái lực miễn dịch để loại bỏ các chất khác không bị liên kết. Aflatoxin M1 được rửa sạch bằng methanol và sau đó được tiêm vào dụng cụ phân tích để phát hiện.

[Thành phần đóng gói]

Aflatoxin M1 Standard (Tùy chọn)

25 cái/hộp, 3mL cột ống/cái

Hướng dẫn sản phẩm 1 x

[Thiết bị và thuốc thử cần thiết và không được cung cấp]

Thiết bị:

┅┅ Tốc độ cao homogenizer hoặc mô san lấp mặt bằng máy

┅┅ Máy nghiền

Thùng đo 200mL/50mL

┅┅ Cân bằng: 0,1g

Máy đo độ axit┅┅

Phễu phân lỏng┅┅

┅┅ Pipette dấu vết: Độc thân 100mL ～ 1000mL

┅┅ Giấy lọc sáo (gấp giấy lọc định tính hoặc định lượng nhanh)

Phễu 50mL

┅┅ Máy bay hơi quay

┅┅ Ống nghiệm thủy tinh dùng một lần

┅┅ Giá vận hành dòng bơm (bao gồm bơm không khí, ống tiêm thủy tinh với khối lượng khác nhau, v.v.)

┅┅ Cốc, chai dung tích, chai hình nón, vv

Thuốc thử:

┅┅ methanol (cấp sắc ký)

┅┅ Acetonitrile (cấp sắc ký)

┅┅ Ether dầu

┅┅ Nước cất hoặc nước khử ion

┅┅ * Dung dịch (0,5mol/L) được gọi là 2g * hòa tan trong 100mL nước

[Các bước xử lý mẫu]

(1) Sữa

┅┅ Làm nóng bồn tắm sữa 100mL đến 40 oC;

┅┅4000r/phút Ly tâm 15 phút, thu thập 50mL chất lỏng rõ ràng để sử dụng

(II) Sữa bột và bột cho trẻ sơ sinh và trẻ nhỏ công thức thực phẩm

┅┅ Lấy mẫu 10g sữa bột, thêm 100mL50 oC nước nhiều lần với số lượng nhỏ, khuấy để sữa bột hòa tan hoàn toàn

┅┅6000r/phút Ly tâm 15 phút, thu thập 50mL chất lỏng rõ ràng để sử dụng

┅┅ lấy mẫu 60 g trộn đều, với dung dịch 0,5 mol/L * cho thấy độ pH giảm xuống 7,4 trong máy đo độ axit;

┅┅ Nói cho san lấp mặt bằng ở 9500 vòng/phút với bộ đồng nhất tốc độ cao 5 phút

┅┅ Tắm nước nóng đến 40 oC;

┅┅4000r/phút Ly tâm 15 phút, thu thập 50mL chất lỏng rõ ràng để sử dụng

(4) Phô mai

┅┅ Mẫu thử được cắt nhỏ, trộn đều qua màn hình lỗ tròn 10 lưới 5g được đặt trong ống ly tâm 50 mL, thêm 2 mL nước và 30 mL methanol;

┅┅ Sử dụng bộ đồng nhất tốc độ cao để nói với bột san lấp mặt bằng 5 phút ở 9500r/phút;

Khai thác siêu âm 30 phút;

┅┅ Ly tâm 15 phút ở 6000r/phút, thu thập chất lỏng thượng lưu và di chuyển vào phễu phân lỏng 250 mL.

┅┅ thêm 30 mL ether dầu (4,3) vào phễu phân lỏng, lắc trong 2 phút;

┅┅ Sau khi phân lớp, di chuyển lớp dưới vào cốc 50 mL và loại bỏ lớp ether dầu.

┅┅ Lặp lại chiết xuất với ether dầu 2 lần;

┅┅ di chuyển dung dịch thấp hơn vào một bình đáy tròn 100 mL, giải nén được tập trung vào khoảng 2 mL; chất cô đặc┅┅được đổ vào ống ly tâm, bình được rửa 2 lần bằng dung dịch acetonitrile-nước (1+4) 5 mL, cùng với chất lỏng rửa được đổ vào ống ly tâm 50 mL;

┅┅ pha loãng với nước khoảng 50 mL, ly tâm 5 phút ở 6000 vòng/phút, làm sạch chất lỏng để xử lý làm sạch.

5) Kem

┅┅ Lấy mẫu 5g và đặt trong cốc 50 mL;

┅┅ hòa tan nó với 20 mL ether dầu và di chuyển nó trong một chai hình nón 250 mL.

┅┅ cộng với 20 mL nước và 30 mL methanol, sau 30 phút dao động, toàn bộ chất lỏng được chuyển vào phễu phân lỏng;

┅┅ Sau khi phân lớp, tất cả các dung dịch thấp hơn được chuyển vào bình đáy tròn 100 mL, giảm áp suất tập trung đến khoảng 5 mL trong máy bay hơi quay và pha loãng với nước đến khoảng 50 mL để xử lý thanh lọc.

[Bước thanh lọc cột ái lực]

┅┅ Gắn cột ái lực miễn dịch dưới ống tiêm thủy tinh 50,0mL. Di chuyển chính xác 50.0mL rõ ràng lỏng tiêm ống tiêm thủy tinh;

┅┅ Kết nối máy bơm áp suất không khí với ống tiêm thủy tinh, điều chỉnh áp suất để dung dịch từ từ đi qua cột ái lực miễn dịch với tốc độ dòng chảy khoảng 2-3 mL/phút cho đến khi 2~3 mL không khí đi qua cột;

┅┅ Thay thế ống tiêm thủy tinh 10ml để kết nối với cột ái lực, thêm 10ml nước vào ống tiêm, điều chỉnh áp suất để nước rửa cột ái lực với tốc độ dòng chảy khoảng 6mL/phút.

┅┅ Thêm chính xác 4 mL sắc ký cấp acetonile rửa, tốc độ dòng chảy 1 mL/phút~2 mL/phút, thu thập tất cả các chất tẩy rửa trong ống nghiệm thủy tinh để phát hiện.

(Kết quả quyết định)

Sau khi được làm sạch bởi cột quan hệ miễn dịch, dung dịch tẩy acetonile thu thập được có thể được kiểm tra trực tiếp bằng huỳnh quang kế hoặc HPLC, cũng có thể được kiểm tra bằng sắc ký mỏng hoặc bộ dụng cụ miễn dịch liên kết enzyme. Aflatoxin trong 4 ml dung dịch tẩy rửa thu thập được tương đương với lượng Aflatoxin M1 trong 50 ml mẫu sữa, mẫu sữa lên men hoặc 5g mẫu sữa bột, mẫu phô mai và mẫu kem.

Nếu xét nghiệm HPLC yêu cầu dung môi khác, nitơ có thể được sấy khô và hòa tan lại

[Lưu ý]

Aflatoxin rất nguy hiểm và nên được vận hành bằng găng tay.

Thùng thủy tinh đã qua sử dụng và dung dịch aflatoxin tốt nhất là ngâm qua đêm với dung dịch natri hypochlorite nồng độ 5%.

┅┅ Không sử dụng cột quan hệ miễn dịch có ngày hết hạn.

[Điều kiện bảo quản và thời gian bảo quản]

Điều kiện bảo quản: Cột thân thiện 2-8 ℃ được bảo quản, không thể đông lạnh.

Thời hạn sử dụng: Sản phẩm có giá trị trong 12 tháng.