Cột sắc ký lỏng

Cột sắc ký lỏng

Hệ thống của máy sắc ký lỏng bao gồm một số bộ phận như bể chứa, máy bơm, bộ nạp mẫu, cột sắc ký, máy dò, máy ghi, v.v. Pha dòng chảy trong bể chứa được bơm vào hệ thống bằng máy bơm áp suất cao, dung dịch mẫu đi vào pha dòng chảy thông qua bộ nạp mẫu, được tải vào cột sắc ký (pha cố định), do các thành phần trong dung dịch mẫu có hệ số phân phối khác nhau trong hai pha, khi thực hiện chuyển động tương đối trong hai pha, sau quá trình phân phối hấp phụ-giải hấp lặp đi lặp lại nhiều lần, các thành phần tạo ra sự khác biệt lớn về tốc độ di chuyển, được tách thành các thành phần riêng lẻ lần lượt chảy ra khỏi cột, khi đi qua máy dò, nồng độ mẫu được chuyển đổi thành tín hiệu điện để ghi, dữ liệu được in dưới dạng đồ thị.

Cấu trúc nguyên tắc

[1] Cấu trúc của cột sắc ký lỏng:

a 、 Cột rỗng được lắp ráp từ khớp cột, ống cột và tấm lọc

Khớp nối cột thông qua cấu trúc khối lượng chết thấp, khớp nối cột là cụm ren ở cả hai đầu, một đầu là ren nữ 7/16 inch, đầu kia là ren nữ 3/16 inch (đã được chuẩn hóa trong và ngoài nước). Chủ đề nữ 7/16 inch được kết nối với ống cột 1/4 inch (Φ6.35mm) và một vòng báo chí được đặt ở giữa để niêm phong. Chủ đề nữ 3/16 inch được kết nối với ống kết nối 1/16 inch (Φ1.57mm), và một vòng báo chí cũng được đặt ở giữa để niêm phong khớp cột. Để giảm thiểu khối lượng chết bên ngoài cột, khi lắp đặt cột sắc ký, sử dụng ống nối Φ1.57mm sau khi nhấn vòng qua vít rỗng, hãy cố gắng cắm xuống đáy, sau đó thắt chặt vít rỗng. Vòng báo chí bị ép đùn và biến dạng bởi vít rỗng sau khi kẹp chặt trên ống kết nối (chiều dài ống lộ ra sau khi ống kết nối đi qua vòng báo chí nên được kiểm soát chặt chẽ ở mức 2. Chiều dài 5mm hoặc kích thước cố định khác).

Bên trong các khớp cột ở cả hai đầu, một bộ lọc bằng thép không gỉ (hoặc màn hình) được đặt ở mỗi đầu của ống cột để đóng gói cột mà không bị mất bởi pha chảy ra khỏi cột. Tất cả các thành phần của cột rỗng đều là vật liệu thép không gỉ 316L, có thể chịu được tác động của dung môi nói chung. Tuy nhiên, vì dung môi chứa clorua có tính ăn mòn nhất định, nên khi sử dụng cần lưu ý rằng các cột và ống kết nối không thể giữ các dung môi như vậy trong một thời gian dài để tránh ăn mòn.

b 、 Đóng gói cột:

Tác dụng tách của cột sắc ký lỏng được thực hiện giữa chất độn và pha chảy, và việc phân loại cột dựa trên loại chất độn. Cột pha tích cực: Đa phần dùng silicon làm chất độn cột. Theo hình dạng bên ngoài có thể được chia thành hai loại vô định hình và hình cầu, đường kính hạt của nó nằm trong phạm vi 3-10μm. Một loại chất độn tích cực khác là silicone liên kết bề mặt-CN, -NH2 và các nhóm chức năng khác được gọi là silicone liên kết. Cột phản pha: chủ yếu là chất độn không phân cực của nhóm chức decocalkyl (ODS) được liên kết với silica gel làm ma trận. Cũng có phân chia vô định hình và hình cầu.

Các chất độn phản pha khác thường được sử dụng là liên kết C8, C4, C2, phenyl, v.v., kích thước hạt của nó là từ 3 đến 10 μm. Yêu cầu đối với Filler

Chất độn cột sắc ký thường được sử dụng là silicone liên kết hóa học. Các hệ thống sắc ký ngược sử dụng chất độn không phân cực, thường được sử dụng cho silicone liên kết octylsilane, và silicone liên kết octylsilane và các loại silicone liên kết silan khác như silan liên kết cyano và silan liên kết amin, v.v. Hệ thống sắc ký tích cực sử dụng chất bổ sung phân cực, chất bổ sung thường dùng có silicon, v. v. Hệ thống sắc ký trao đổi ion sử dụng chất độn trao đổi ion; Hệ thống sắc ký kháng phân tử sử dụng các chất độn như gel hoặc microsphere xốp phân tử cao; Việc tách enantiomer thường sử dụng chất làm đầy chiral.

Các tính chất của chất độn (chẳng hạn như hình dạng của tàu sân bay, kích thước hạt, khẩu độ, diện tích bề mặt, độ che phủ bề mặt của nhóm liên kết, hàm lượng carbon và loại liên kết, v.v.) và làm đầy các cột sắc ký, ảnh hưởng trực tiếp đến hành vi bảo tồn và hiệu quả tách của các nhà cung cấp. Chất độn có khẩu độ dưới 15nm (1nm=10Å) thích hợp để phân tích các hợp chất có trọng lượng phân tử nhỏ hơn 2000 và các hợp chất có trọng lượng phân tử lớn hơn 2000 nên chọn chất độn có khẩu độ trên 30nm. Trừ khi có quy định khác, kích thước hạt điền của cột phân tích thường được tìm thấy trong

1

Từ 3μm đến 10μm. Chất độn có kích thước hạt nhỏ hơn (khoảng 2 μm) thường được sử dụng để lấp đầy các cột có kích thước vi mô (đường kính trong khoảng 2 mm), và khi sử dụng các cột có kích thước vi mô, hiệu suất bơm truyền, khối lượng mẫu, khối lượng bể phát hiện và khối lượng chết của hệ thống, v.v. phải phù hợp với chúng; Nếu cần thiết, điều kiện sắc ký cũng cần được điều chỉnh thích hợp. Khi có tranh chấp về kết quả xác định của nó, kết quả xác định các điều kiện sắc ký được quy định trong phần thân của giống sẽ được ưu tiên.

Yêu cầu về nhiệt độ

Nhiệt độ sử dụng của pha cố định liên kết thông thường với silicone làm chất mang thường không vượt quá 35 ℃, để cải thiện hiệu quả tách có thể cải thiện nhiệt độ sử dụng của cột sắc ký một cách thích hợp, nhưng không vượt quá 60 ℃.

Yêu cầu về pha chảy

Độ pH của pha chảy nên được kiểm soát trong khoảng 2~8. Khi pH lớn hơn 8, nó có thể làm cho chất mang silicone hòa tan; Khi pH nhỏ hơn 2, pha liên kết hóa học kết nối với silicone dễ bị thủy phân và rơi ra. Khi cần sử dụng pha chảy có độ pH lớn hơn 8 trong hệ thống sắc ký, nên chọn chất độn kháng kiềm, chẳng hạn như chất độn silicone liên kết sử dụng silicone có độ tinh khiết cao làm chất mang và có độ che phủ bề mặt cao, chất độn polymer phủ, chất độn lai hữu cơ vô cơ hoặc chất độn không silicone, v.v. Khi cần sử dụng pha chảy có độ pH nhỏ hơn 2, nên chọn chất độn có khả năng chống axit, chẳng hạn như diisopropyl hoặc diisobutyl có thể tạo ra tác dụng bảo vệ kháng không gian, thay thế chất độn silicone liên kết octadecyl, hoặc chất độn lai hữu cơ vô cơ, v.v.

Lưu ý

Cột hiệu ứng và cột bảo vệ cho cột sắc ký

Khi lấy một cột mới, hãy chắc chắn để xem hướng dẫn sử dụng của nó trước tiên, sau đó đo hiệu ứng cột, kiểm tra hiệu ứng cột thường xuyên, giữ lại sắc ký thu được trên cột sắc ký mới, và ghi lại các điều kiện, thường xuyên kiểm tra dải phổ của dụng cụ mở rộng. Nếu được áp dụng để giám sát trực tuyến, cột sắc ký nên cung cấp bảo vệ vật lý và bảo vệ hóa học trực tuyến, chẳng hạn như cài đặt bộ lọc trực tuyến, cột bảo vệ tự đóng gói và cột bảo vệ được cài đặt sẵn, v.v. Vai trò của bộ lọc nội tuyến là ngăn chặn các hạt tích lũy trong đầu cột, lợi thế là về cơ bản không ảnh hưởng đến hiệu ứng cột, thường được sử dụng khi cần hiệu ứng cột cao, thường thay thế hàng tiêu dùng là phần tử lọc và vai trò của cột bảo vệ máy giặt là để ngăn chặn cột bị ô nhiễm hóa học. Nhược điểm là hầu hết các cột bảo vệ ảnh hưởng đến hiệu ứng cột của cột sắc ký, đặc biệt là khi sử dụng cột vi mô, thường được sử dụng để bảo vệ cột của chất độn tự nạp thông thường. Gần đây một số cột bảo vệ mới như S e n t r y - g u a r d cột bảo vệ, nó được đặc trưng bởi chất lượng cao, chất độn hiệu quả cao, tăng hiệu quả cột phân tích, khả năng tải trọng lớn cho các mẫu bẩn, có thể kéo dài tuổi thọ của cột bảo vệ, tay có thể thắt chặt khớp nối, không cần dụng cụ khi lắp đặt, tiết kiệm thời gian, thiết kế lõi thay đổi, có thể sử dụng nhiều chất độn khác nhau, chủ yếu phù hợp với cơ sở mẫu rất bẩn và phức tạp, chẳng hạn như mẫu sinh hóa, mẫu môi trường và thực phẩm, hoặc không muốn làm quá nhiều chiết xuất sân vườn, không muốn giảm hiệu ứng cột và các tình huống khác.

Làm sạch cột sắc ký

Để có một sự hiểu biết đầy đủ về các mẫu được thực hiện, với khả năng rửa mẫu zui mạnh mẽ pha chảy rửa, cho cột silicone, đầu tiên với methanol rửa đi các tạp chất phân cực, sau đó với khô dichloromethane và n-heptan 1 0 0-2 0 O r aL lần lượt được kích hoạt, cho các liên kết và cột pha, nói chung với methanol một methanol một nước rửa liên tục, mỗi cột sắc ký có một phương pháp làm sạch cụ thể, hãy chắc chắn để xem hướng dẫn sử dụng của nó

Lưu trữ cột sắc ký

Các tạp chất và muối được loại bỏ trước khi lưu trữ, dung môi lưu trữ phù hợp được áp dụng để tránh khô và khô của giường cột sắc ký, tránh rung động cơ học, ngăn ngừa sự phát triển của vi khuẩn và chú ý đến nhiệt độ lưu trữ.

Xử lý sự cố

1. áp lực cột quá cao

2

Nó có thể bị tắc. Giường trụ giãn nở, hấp phụ không thể đảo ngược, vi khuẩn sinh trưởng...... Cũng có thể là vấn đề áp suất hệ thống, chẳng hạn như tắc nghẽn van giảm chấn, tắc nghẽn bộ nạp mẫu, tắc nghẽn đường ống hoặc cổng kết nối. Bộ lọc nội tuyến không sạch sẽ, cảm biến áp suất không chính xác, v.v.

2, hiệu quả cột thấp

Nó có thể được gây ra bởi ô nhiễm cột sắc ký, tắc một phần của bộ lọc, khối lượng chết trong cột sắc ký, chẳng hạn như pha dòng chảy p H hoặc thành phần không phù hợp gây ra mất pha cố định. Sự thay đổi mạnh mẽ của pha dòng chảy gây ra thiệt hại vật lý cho pha cố định, rung động cơ học gây ra các vết nứt trong pha cố định, và giường cột co lại hoặc khô.

Cũng có thể là vấn đề kết nối dụng cụ, nghiêm túc kiểm tra xem bộ nạp mẫu, máy dò, đường ống, cột bảo vệ và bộ lọc nội tuyến có được kết nối tốt hay không, cũng có thể là cột sắc ký không cân bằng tốt, lượng mẫu quá lớn và các vấn đề khác.

3, lặp lại kém, không ra khỏi đỉnh, tỷ lệ phục hồi thấp

Có thể là cột sắc ký bị ô nhiễm, pha dòng chảy p H giá trị hoặc thành phần không phù hợp gây ra mất pha cố định, dung môi mẫu khác nhau hoặc bản thân mẫu không ổn định, pha cố định phân cực quá mạnh hoặc pha dòng chảy phân cực quá yếu. Sự hấp thụ không đặc hiệu xảy ra. Cũng có thể thử nghiệm gradient khi thời gian cân bằng không đủ, biến động nhiệt độ, thành phần pha dòng chảy thay đổi, dung môi mẫu khác nhau, sự ổn định của mẫu không tốt, phát triển phương pháp không tốt, độ axit và kiềm của bộ đệm không phù hợp hoặc khả năng đệm không đủ.

Cho đến khi không có bong bóng trong đường ống (từ chai dung môi đến đầu vào bơm), chuyển kênh tiếp tục Purge cho đến khi tất cả các kênh không có bong bóng.

Nhấp vào biểu tượng Pump, menu cài đặt tham số xuất hiện, nhấp vào tùy chọn Pump Control, chọn Off, nhấp OK để tắt máy bơm, đóng giá trị Purge.

Nhấp vào biểu tượng Pump, menu cài đặt tham số xuất hiện, nhấp vào tùy chọn Setup pump để vào màn hình chỉnh sửa Pump, đặt Flow: 1.0ml/phút.

12, Nhấp vào biểu tượng chai bên dưới máy bơm, như được hiển thị trong hình (lấy máy bơm nhị phân làm ví dụ), nhập khối lượng thực tế của dung môi và khối lượng chai. Bạn cũng có thể nhập thể tích của việc dừng bơm. Nhấp OK