◆ 1- Lấy mẫu vi sinh vật: Vì nhiều vi sinh vật có thể phát triển lặp đi lặp lại trên tấm thạch, bước đầu tiên là tìm điều kiện nuôi trồng phù hợp. Việc chuẩn bị mẫu thuận tiện có thể đạt được bằng cách sử dụng kỹ thuật đơn giản và phổ biến là nuôi cấy tế bào trên tấm agar. Ví dụ, vi khuẩn đầu tiên được nuôi cấy trong 16-24 giờ trong các góc phần tư của mật độ tế bào khác nhau trên tấm thạch trầm, cho kết quả rất đáng tin cậy. Các thuộc địa chỉ được thu thập từ góc phần tư thứ ba. Nghiên cứu cho thấy chìa khóa thành công của phương pháp này nằm ở tiêu chuẩn hóa các điều kiện thu thập và sự nhất quán của sự phát triển của vi khuẩn trên tấm thạch thạch. Một số cải tiến cũng có thể được thực hiện (chẳng hạn như chuyển sang môi trường chất lỏng, hoặc thay đổi thời gian/nhiệt độ nuôi cấy). Tuy nhiên, điều quan trọng là đảm bảo rằng tất cả các phép đo được thực hiện trong cùng một điều kiện để có được kết quả đáng tin cậy.

◆ 2- Công nghệ đo vi khuẩn: Công nghệ để xác định vi sinh vật cần phải đơn giản và có khả năng lặp lại cao. Khi dung dịch vi sinh vật khô dần, các tế bào vi sinh vật tạo ra màng sinh học rắn. Bằng cách tối ưu hóa quy trình này, một quy trình chuẩn bị mẫu dễ vận hành đã được thực hiện và đáp ứng khả năng lặp lại cần thiết cho các phép đo hồng ngoại. Ánh sáng hồng ngoại xuyên qua màng sinh học và được hấp thụ một phần bởi các phân tử khác nhau có mặt trong tế bào, tạo ra dấu vân tay hóa học đặc trưng cho từng chủng được thử nghiệm.

Đối với việc xác định vi sinh vật FT-IR, mối quan tâm hàng đầu của chúng tôi là độ chính xác của kết quả, chìa khóa phụ thuộc vào chất lượng của thư viện phổ tham chiếu. Thư viện phổ của vi sinh vật không giống với thư viện phổ thông thường, để đảm bảo độ tin cậy của kết quả, cần phải xây dựng thư viện phổ hệ thống hóa trong điều kiện tiêu chuẩn hóa.

Đầu tiên, cần đảm bảo nuôi cấy lặp lại vi sinh vật. Môi trường nuôi cấy, điều kiện nuôi cấy (như thời gian, nhiệt độ) và tiền xử lý mẫu đều có ảnh hưởng đến phổ hồng ngoại, vì vậy những điều kiện này đòi hỏi phải thực hiện các quy trình hoạt động tiêu chuẩn.

Thứ hai, tính không đồng nhất và biến thể trong quá trình tiền xử lý mẫu (chẳng hạn như kích thước mẫu, mức độ khô của màng nấm, v.v.) và các yếu tố đo lường (chẳng hạn như tán xạ ánh sáng do mẫu dưới dạng hạt, v.v.) đều ảnh hưởng đến quang phổ hồng ngoại. Do đó, cần phải thực hiện nhiều phép đo trên cùng một mẫu để đảm bảo khả năng tái tạo của quang phổ hồng ngoại.

Thứ ba, độ tin cậy của các mẫu chưa biết được xác định bằng tia hồng ngoại được xây dựng dựa trên độ tin cậy của ngân hàng quang phổ tham chiếu. Vì vậy, các chủng tham khảo phải được xác định bằng các phương pháp đáng tin cậy. Nếu không, thông tin không chính xác trong thư viện phổ dẫn đến sai lệch trong kết quả nhận dạng cuối cùng. Kết hợp nhiều vùng quang phổ đáng chú ý để xây dựng cơ sở dữ liệu về các chủng vi khuẩn đã biết. Để phân loại và xác định vi khuẩn chưa biết, thông tin quang phổ được so sánh với cơ sở dữ liệu tham chiếu của vi khuẩn đã biết, cho thấy các vi sinh vật có mẫu quang phổ phù hợp với các chủng chưa biết. Sự giống nhau của các phổ vi sinh vật khác nhau cũng có thể được mô tả bằng đồ họa dưới dạng biểu đồ cây.