Bộ dụng cụ beta-defensin 1 của con người (HβD1)

Bộ dụng cụ này chỉ được sử dụng cho các nghiên cứu ngoài cơ thể và không được sử dụng trong chẩn đoán lâm sàng

Bộ dụng cụ này được sử dụng trong ống nghiệm để kiểm tra định lượng lượng beta defensin 1 (HβD1) của con người trong huyết thanh, huyết tương, homogenization mô và các mẫu chất lỏng liên quan.

Ngày hết hạn:6 tháng

Điều kiện bảo quản:2-8℃

Thành phần Kit:

Ghi chú:

1. (96T/48T) Vui lòng kiểm tra kịp thời tất cả các mặt hàng có đầy đủ sau khi mở gói.

2. Nồng độ sản phẩm tiêu chuẩn theo thứ tự: 800, 400, 200, 100, 50, 25 pg/mL

3. Sau khi kiểm tra một số lượng lớn mẫu vật bình thường, giá trị nồng độ bình thường của mẫu vật nằm trong phạm vi kiểm tra được cung cấp bởi bộ dụng cụ, mẫu 50 μL được lấy trực tiếp trong quá trình thí nghiệm. Khi có một số mẫu có giá trị vượt quá nồng độ tiêu chuẩn lớn, có thể dùng dung dịch pha loãng mẫu để pha loãng mẫu vật thích hợp rồi mới tiến hành thí nghiệm.

Chuẩn bị trước khi phát hiện:

1. Vui lòng lấy bộ dụng cụ ra khỏi tủ lạnh trước 20 phút, cân bằng đến nhiệt độ phòng.

2. Chất tẩy rửa cô đặc lấy ra từ tủ lạnh có thể có kết tinh, thuộc về hiện tượng bình thường; Đặt nhiệt độ phòng, lắc nhẹ đều, sau khi kết tinh hòa tan sẽ cấu hình dung dịch giặt. Có thể pha loãng 20ml dung dịch giặt cô đặc với nước cất hoặc nước khử ion thành 400ml dung dịch giặt có nồng độ hoạt động, chưa sử dụng được đặt trở lại 4oC

3. 20 × dung dịch đệm rửa pha loãng: nước cất pha loãng theo tỷ lệ 1: 20, tức là 1 phần 20 × dung dịch đệm rửa cộng với 19 phần nước cất.

Bộ dụng cụ ELISA Beta Defense 1 (HβD1) của con người

Nguyên tắc thử nghiệm:

Bộ dụng cụ sử dụng xét nghiệm hấp phụ miễn dịch liên kết enzyme một bước (ELISA) bằng phương pháp bánh sandwich kép. Trong các lỗ nhỏ được bọc trước bởi kháng thể beta-defensin 1 (HβD1) của con người, các kháng thể kiểm tra được đánh dấu HRP lần lượt được thêm vào mẫu vật, tiêu chuẩn, sau đó được ủ ấm và rửa sạch. Màu sắc với chất nền TMB, TMB được chuyển đổi thành màu xanh dương dưới sự xúc tác của peroxidase và màu vàng dưới tác động của axit. Độ sâu của màu sắc có mối tương quan tích cực với beta defensin 1 (HβD1) của con người trong mẫu. Độ hấp thụ (ODvalue) được xác định ở bước sóng 450nm bằng máy đo enzyme, nồng độ mẫu được tính toán.

Thiết bị kiểm tra tự chuẩn bị cho thí nghiệm:

1. Máy đánh dấu enzyme (450nm)

2. Bộ tạo mẫu và đầu súng có độ chính xác cao: 0,5-10uL, 2-20uL, 20-200uL, 200-1000uL

Hộp nhiệt độ 3,37 ℃

4. Nước cất hoặc nước khử ion

Xử lý mẫu và yêu cầu:

1. Huyết thanh: Để mẫu máu đầy đủ thu thập trong ống tách huyết thanh ở nhiệt độ phòng 2 giờ hoặc 4 độ C qua đêm, sau đó 1000 x g ly tâm 20 phút, lấy sạch là được, hoặc để ở -20 độ C hoặc -80 độ C để bảo quản, nhưng nên tránh đông lạnh nhiều lần.

2. Huyết tương: Lấy mẫu vật bằng EDTA hoặc heparin làm thuốc chống đông máu và lấy mẫu vật ở 2-8 ℃ 1000 × g ly tâm trong 15 phút sau khi thu thập, lấy sạch có thể phát hiện, hoặc giữ sạch ở -20 ℃ hoặc -80 ℃ nhưng nên tránh đông lạnh nhiều lần.

3. San lấp mặt bằng mô: Rửa sạch mô bằng PBS làm lạnh trước (0,01M, pH=7,4), loại bỏ máu còn lại (các tế bào hồng cầu bị phân hủy trong san lấp mặt bằng sẽ ảnh hưởng đến kết quả đo), cắt mô sau khi cân. Mô cắt và khối lượng tương ứng của PBS (thường theo tỷ lệ khối lượng 1: 9, chẳng hạn như mẫu mô 1g tương ứng với PBS 9mL, khối lượng cụ thể có thể được điều chỉnh phù hợp theo yêu cầu thí nghiệm và được ghi lại. Khuyến cáo bao gồm các chất ức chế protease trong PBS) Thêm vào máy san lấp mặt bằng thủy tinh và nghiền đầy trên băng. Để phá vỡ các tế bào mô hơn nữa, có thể siêu âm phá vỡ một hỗn hợp đồng nhất, hoặc đông lạnh nhiều lần. Đem dung dịch đồng đều ly tâm 5000 x g trong 5 - 10 phút, lấy ra kiểm tra rõ ràng.

Tế bào nuôi cấy rõ ràng: Vui lòng 1000 × g ly tâm trong 20 phút, lấy sạch có thể được phát hiện, hoặc đặt sạch hơn ở -20 ℃ hoặc -80 ℃ để bảo quản, nhưng nên tránh đông lạnh nhiều lần.

Các mẫu vật sinh học khác: 1000 x g ly tâm trong 20 phút, lấy ra là có thể phát hiện.

6. Mẫu xuất hiện: mẫu phải rõ ràng và trong suốt, vật lơ lửng phải được loại bỏ ly tâm.

Bảo quản mẫu: Nếu mẫu được kiểm tra trong vòng 1 tuần sau khi thu thập có thể được lưu trữ ở 4 ℃, nếu không thể kiểm tra kịp thời, xin vui lòng theo số lượng sử dụng một lần, đông lạnh ở -20 ℃ (kiểm tra trong vòng 1 tháng), hoặc -80 ℃ (kiểm tra trong vòng 6 tháng), tránh đông lạnh lặp đi lặp lại, tan máu mẫu sẽ ảnh hưởng đến kết quả kiểm tra, vì vậy mẫu tan máu không nên thực hiện thử nghiệm này.

Chú ý:

1. Ôn dục theo đúng thời gian và nhiệt độ quy định để đảm bảo kết quả chính xác. Tất cả các tác nhân phải đạt được nhiệt độ phòng 20-25 ° C trước khi sử dụng. Giữ lạnh thuốc thử ngay sau khi sử dụng.

2. Rửa tấm không chính xác có thể dẫn đến kết quả không chính xác. Hãy chắc chắn rằng bạn cố gắng hút khô chất lỏng bên trong lỗ trước khi thêm chất nền. Trong quá trình ôn dục đừng để lỗ nhỏ khô ráo.

3. Loại bỏ chất lỏng và dấu ngón tay còn lại từ đáy tấm, nếu không sẽ ảnh hưởng đến giá trị ODD.

4. Chất lỏng kết xuất màu nền nên có màu không màu hoặc rất nhạt, chất lỏng cơ bản đã chuyển sang màu xanh không thể sử dụng.

5. Tránh ô nhiễm chéo của thuốc thử và mẫu vật để không gây ra kết quả sai.

6. Tránh tiếp xúc trực tiếp với ánh sáng mạnh khi lưu trữ và sưởi ấm.

7. Sau khi cân bằng đến nhiệt độ phòng trước khi mở túi niêm phong để ngăn chặn các giọt nước ngưng tụ trên thanh lạnh.

8. Bất kỳ tác nhân phản ứng nào không thể tiếp xúc với khí mạnh phát ra từ dung môi tẩy trắng hoặc dung môi tẩy trắng. Bất kỳ thành phần tẩy trắng nào cũng phá vỡ hoạt tính sinh học của tác nhân phản ứng trong bộ.

9. Sản phẩm hết hạn không thể được sử dụng.

10. Nếu bệnh có thể lây lan, tất cả các mẫu phải được quản lý tốt, xử lý mẫu và thiết bị phát hiện theo quy trình quy định.

Các bước hoạt động:

1. Loại bỏ các thanh mong muốn từ túi nhôm sau khi cân bằng nhiệt độ phòng 60 phút, các thanh còn lại được niêm phong bằng túi tự niêm phong và đặt trở lại 4 ℃.

2. Thiết lập lỗ sản phẩm tiêu chuẩn và lỗ mẫu, mỗi lỗ sản phẩm tiêu chuẩn thêm nồng độ khác nhau của sản phẩm tiêu chuẩn 50 μL.

3. a thêm mẫu được kiểm tra 50μL vào lỗ mẫu; Lỗ trắng không thêm vào.

4. Ngoại trừ lỗ trống, 100 μL kháng thể phát hiện được đánh dấu bởi horseradish peroxidase (HRP) được thêm vào mỗi lỗ trong lỗ sản phẩm tiêu chuẩn và lỗ mẫu, và lỗ phản ứng được niêm phong bằng màng niêm phong, nồi tắm nước 37 ℃ hoặc bình giữ nhiệt độ 60 phút.

5. Loại bỏ chất lỏng, giấy thấm nước vỗ khô, mỗi lỗ đổ đầy chất lỏng giặt (350μL), để 1 phút, ném chất lỏng giặt, giấy thấm nước vỗ khô, lặp lại tấm giặt 5 lần (cũng có thể sử dụng máy giặt tấm).

6. Mỗi lỗ thêm chất nền A, B mỗi lỗ 50 μL, 37 ℃ tránh ánh sáng ủ 15 phút.

7. Mỗi lỗ thêm chất kết thúc 50μL, trong vòng 15 phút, xác định giá trị OD của mỗi lỗ ở bước sóng 450nm.

Tính toán kết quả thí nghiệm:

Vẽ đường cong tiêu chuẩn: Trong bảng tính Excel, nồng độ hàng tiêu chuẩn làm tọa độ ngang, giá trị OD tương ứng làm tọa độ dọc, vẽ đường cong hồi quy tuyến tính hàng tiêu chuẩn, tính toán giá trị nồng độ của từng mẫu theo phương trình đường cong.

(Hình này chỉ để tham khảo)

Bộ dụng cụ ELISA Beta Defense 1 (HβD1) của con người

Hiệu suất:

1. Phạm vi phát hiện: 25 pg/mL - 800 pg/mL.

2. Độ nhạy: nồng độ phát hiện thấp dưới 1,0 pg/mL.

3. Đặc hiệu: Không phản ứng chéo với các chất tương tự cấu trúc hòa tan khác.

4. Độ lặp lại: hệ số biến đổi trong tấm nhỏ hơn 10%, hệ số biến đổi giữa các tấm nhỏ hơn 15%.

Mẹo kỹ thuật nhỏ:

1. Cố gắng tránh bọt khi trộn hoặc dung dịch protein hòa tan lại.

2. Để tránh lây nhiễm chéo, cấu hình các sản phẩm tiêu chuẩn nồng độ khác nhau, mẫu trên, thêm các thuốc thử khác nhau đều cần thay thế đầu súng. Các thuốc thử khác nhau xin sử dụng các máng dịch khác nhau.

3. Vui lòng sử dụng keo dán đúng cách mỗi khi ủ để đảm bảo độ chính xác của kết quả.

4. Chất nền kết xuất màu sau khi trộn phải không màu trước khi tấm trên, vui lòng bảo quản tránh ánh sáng; Nếu bảng vi lộ, bạn sẽ từ tìm kiếm màu thành màu xanh ở các độ sâu khác nhau.

5. Thứ tự bảng trên chất lỏng chấm dứt phải phù hợp với thứ tự bảng trên chất nền màu; Sau khi thêm dịch chấm dứt, màu bên trong lỗ từ xanh chuyển sang vàng; Nếu có màu xanh lá cây bên trong lỗ, nó chỉ ra rằng chất lỏng bên trong lỗ không được trộn đều; Vui lòng trộn đều.

Mô tả:

Do các điều kiện hiện tại và trình độ khoa học và công nghệ chưa thể xác định và phân tích toàn diện tất cả các nguyên liệu được cung cấp bởi tất cả các nhà cung cấp, sản phẩm này có thể có một số rủi ro kỹ thuật về chất lượng.

2. Kết quả thí nghiệm có liên quan chặt chẽ đến hiệu quả của thuốc thử, hoạt động liên quan của người thí nghiệm và môi trường thí nghiệm tại thời điểm đó, hãy chắc chắn chuẩn bị đầy đủ mẫu vật sao lưu.

3. Các lô khác nhau của cùng một sản phẩm có thể có một chút khác biệt, chẳng hạn như: giới hạn phát hiện, độ nhạy và thời gian hiển thị màu, v.v., vui lòng thực hiện các hoạt động thử nghiệm theo hướng dẫn sử dụng trong bộ dụng cụ, hướng dẫn sử dụng phiên bản điện tử của trang web chỉ để tham khảo.

4. Chỉ có việc sử dụng tất cả các thuốc thử phù hợp với bộ dụng cụ này có thể đảm bảo hiệu quả phát hiện và không thể trộn lẫn với các sản phẩm của nhà sản xuất khác. Chỉ tuân thủ nghiêm ngặt các hướng dẫn thử nghiệm của bộ dụng cụ này sẽ cho kết quả thử nghiệm.