Vũ Trọng Công Nghệ - Ứng Dụng Công Nghiệp

Máy sắc ký lỏng (HPLC) là một trong những công cụ kiểm tra thường được sử dụng trong các phòng thí nghiệm phân tích và ngày càng được sử dụng rộng rãi. Trong quá trình sử dụng thiết bị này, chắc chắn sẽ có nhiều vấn đề khác nhau và sẽ ảnh hưởng trực tiếp đến độ chính xác của dữ liệu đo lường và hoạt động bình thường của thiết bị. Nếu người vận hành có thể hiểu được nguyên nhân của sự cố, có thể ngăn ngừa và khắc phục những sự cố này một cách rõ ràng, có thể sử dụng đúng thiết bị và zui để tối đa hóa hiệu suất của thiết bị. Hôm nay chúng tôi sẽ chia sẻ với các bạn một số câu hỏi cần lưu ý trong việc sử dụng máy sắc ký lỏng.

Sơ đồ phân tích thành phần | Sơ đồ phân tích bề mặt | Hệ thống tiền xử lý mẫu | Sơ đồ phân tích bề mặt | Kiểm tra độ cứng | Kiểm tra cơ học | Mẫu tiêu chuẩn

I. Vấn đề sử dụng ống nghiệm

1. Vấn đề sạch ống nghiệm. Phương pháp phân tích sắc ký lỏng là một phương pháp phân tích rất nhạy cảm, nếu sử dụng ống nghiệm không sạch sẽ sẽ ảnh hưởng đến độ chính xác của kết quả thử nghiệm. Ví dụ, khi sử dụng methanol làm dung môi để hòa tan mẫu, ống nhỏ được sử dụng được sử dụng để làm nắp bằng phích cắm cao su, do đó, mỗi lần lấy mẫu, có một đỉnh nhiễu cố định trong thời gian dự trữ tồn tại, sau đó được xác nhận rằng đỉnh nhiễu này được tạo ra bởi các thành phần hòa tan trong phích cắm cao su ngâm methanol, sau khi thay thế bằng ống nghiệm thủy tinh, đỉnh nhiễu được loại bỏ.

2. Vấn đề hòa tan ống nghiệm nhựa. Trong những năm gần đây, ống nhựa dùng một lần đã mang lại sự tiện lợi lớn cho người thử nghiệm, tuy nhiên, trong quá trình sử dụng phải chú ý đến hiện tượng hòa tan của dung môi hữu cơ đối với ống nghiệm, khi sử dụng loại ống này để chiết xuất mẫu, một số dung môi hữu cơ (như lvfang, v.v.) có hiện tượng hòa tan trên tường ống, các chất hòa tan này đôi khi cũng có thể tạo ra tín hiệu trên máy dò, do đó can thiệp vào việc xác định mẫu. Tại thời điểm này, có thể sử dụng các điều kiện thí nghiệm tương tự để thử nghiệm trước, để xem không có chất chiết xuất, chất chiết xuất trên máy dò có thể tạo ra tín hiệu nhiễu hay không, nếu tín hiệu nhiễu thực sự tồn tại, chỉ có thể thay thế bằng ống nghiệm thủy tinh kháng dung môi hữu cơ.

3. Vấn đề hấp phụ của mẫu được thử nghiệm trên tường ống nghiệm. Vấn đề này cũng nên được chú ý, nếu không nó cũng sẽ ảnh hưởng đến độ chính xác của kết quả thử nghiệm, trong giám sát thuốc điều trị (TDM), một số thuốc thử nghiệm như amitriptyline, imipramine và các loại thuốc khác dễ dàng hấp phụ trên tường ống nghiệm thủy tinh, do đó, hoạt động thích hợp để sử dụng ống polypropylene, để ngăn chặn sự xuất hiện của hiện tượng hấp phụ trong khai thác, có thể sử dụng 0,5% dung dịch đã diamine alkane làm chất chiết xuất, có thể ngăn chặn hiệu quả sự hấp phụ.

Thứ hai, vấn đề vận hành van mẫu

Hiện nay, van mẫu thường được sử dụng trong sắc ký lỏng phân tích là van mẫu 7725, cấu trúc van sáu chiều bên trong làm cho hoạt động mẫu rất thuận tiện, tuy nhiên, nếu sử dụng không đúng cách, nó cũng sẽ gây ra vấn đề. Ví dụ, trong quá trình thử nghiệm sắc ký lỏng, đôi khi có sự xuất hiện của các đỉnh sắc ký bất thường và các vấn đề tái tạo kém, chủ yếu là do phương pháp hoạt động không đúng, để giải quyết các vấn đề như vậy, cần phải bắt đầu từ các khía cạnh sau.

1. Kiểm soát lượng mẫu. Khi lấy mẫu bằng van mẫu, vòng mẫu bên trong van là định lượng, (khối lượng vòng mẫu của van mẫu phân tích chung là 20ul), do khi lấy mẫu, dung dịch mẫu được tiêm vào van mẫu có gradient vận tốc xuyên tâm trong đường ống của vòng mẫu (tức là tốc độ dòng chảy của chất lỏng ở trục ống nhanh hơn ở thành ống). Do đó, để vòng mẫu được lấp đầy với dung dịch mẫu, do đó van lấy mẫu được sử dụng để định lượng chính xác, lượng mẫu phải lớn hơn 2 lần thể tích vòng mẫu. Nếu một ống tiêm được sử dụng để kiểm soát lượng mẫu, zui lớn chỉ có thể tiêm 1/2 thể tích vòng mẫu, điều này có thể ngăn chặn một số mẫu tràn qua ống tràn dẫn đến lỗi phân tích định lượng.

2. Vấn đề làm sạch van mẫu. Nếu trong vòng mẫu có dư lượng của mẫu từ mẫu thử lần trước, nó chắc chắn sẽ làm ô nhiễm mẫu tiêm tiếp theo, để ngăn chặn hiện tượng này xảy ra, nó nên được vận hành như sau: a. van mẫu có 2 vị trí, INJECT và LOAD. Đầu tiên ở vị trí LOAD, pha dòng chảy được bơm vào van mẫu để làm sạch vài lần bằng ống tiêm, mỗi lần dùng khoảng 40ul; b. Sau đó, khi lật tay van mẫu đến vị trí INJECT, lại làm sạch pha dòng chảy vài lần, mỗi lần dùng vẫn 40ul; c. zui, sau đó mẫu được tiêm vào van mẫu.

Làm theo các bước trên, ô nhiễm do van lấy mẫu có thể tránh được, do đó làm cho đỉnh nhiễu loại bỏ và cải thiện độ chính xác của kết quả phân tích.

3, tắc nghẽn của ống tràn van mẫu. Đôi khi, hiện tượng tắc nghẽn xảy ra với ống tràn của van mẫu và kim tiêm không thể đẩy khi mẫu được tiêm vào bên trong van mẫu. Sự cố này là do tắc nghẽn của ống tràn. Hầu hết các nguyên nhân gây tắc nghẽn là do dòng chảy của mẫu hòa tan được sử dụng trong dung dịch muối, trong đó muối kết tinh ở cổng xả của ống tràn. Lúc này, có thể dùng cốc nhỏ đựng một lượng nhỏ nước cất ngâm vào miệng ống tràn, kết tinh muối ở cửa khẩu có thể bị hòa tan, khắc phục sự cố. Nếu sau mỗi lần lấy mẫu, bạn có thể xả hết muối bằng nước cất vào ống tràn bằng nước cất, bạn có thể tránh được sự cố này.

Giai đoạn di động (mobble phase)

Methanol và acetonitrile thường được sử dụng trong phân tích sắc ký lỏng để pha dòng chảy. Các thuốc thử thường được sử dụng trong sắc ký lỏng là các thuốc thử cấp cao như thuốc thử sắc ký tinh khiết. Khi yêu cầu không quá nghiêm ngặt, thuốc thử tinh khiết thậm chí phân tích tinh khiết cũng có thể dùng. Thường được sử dụng trong phân tích sắc ký lỏng là máy dò UV, do đó, từ việc giảm tiếng ồn cơ bản và cải thiện độ nhạy phân tích, nên sử dụng thuốc thử tinh khiết sắc ký với sự hấp thụ UV nhỏ và ít tạp chất.

1. Lọc pha lưu động. Pha lưu động được điều chế tốt trước khi sử dụng nhất định phải dùng màng lọc vi lỗ 0,5 um để lọc. Điều này là do dung dịch chứa rất nhiều hạt nhỏ khó phát hiện bằng mắt thường, nếu chúng không được lọc ra, nó sẽ làm tắc nghẽn cổng bơm, bộ lọc trên đầu cột, do đó, nó sẽ chặn các kênh bình thường của pha chảy, do đó, sức đề kháng của cột sắc ký tăng, áp suất cột tăng, hiệu ứng cột giảm. Khi gặp trường hợp này, bạn nên thay thế pha dòng chảy được lọc và loại bỏ bộ lọc bị tắc và ngâm trong dung dịch axit nitric 20% để làm sạch bằng siêu âm trong 20 phút để loại bỏ tắc nghẽn trên bộ lọc.

2. Thoát khí lưu động. Pha dòng chảy phải được khử khí trước khi sử dụng để loại bỏ khí hòa tan trong pha dòng chảy càng nhiều càng tốt, nếu không, các khí này sẽ làm giảm hiệu suất của chất độn cột và cũng có thể gây nhiễu lớn cho tín hiệu của máy dò. Có nhiều phương pháp khử khí, chẳng hạn như khử khí siêu âm, khử khí chân không, khử khí nitơ, v.v. Phương pháp khử khí chân không và phương pháp khử khí lưu nitơ là phương pháp khử khí thường được sử dụng hiện nay. Nước và methanol được trộn với nhau để tạo ra một lượng lớn bong bóng, được sử dụng nếu không khử khí, bong bóng sẽ đi vào cột sắc ký và máy dò và sẽ ảnh hưởng đến việc tiến hành công việc phân tích bình thường.

IV. Sử dụng và chăm sóc cột sắc ký

Cột sắc ký là thành phần chính của sắc ký lỏng zui, vật liệu được đo có thể được tách và xác định tốt hay không, tính chất của cột sắc ký đóng một vai trò quyết định. Do đó, trong công việc hàng ngày, cần đặc biệt chú ý đến việc sử dụng đúng cách và bảo trì các cột sắc ký để kéo dài tuổi thọ của chúng.

1, Sử dụng cột trước và cột bảo vệ. Cột trước (pre-column) được gắn giữa máy bơm và bộ nạp mẫu, cung cấp sự cân bằng * cho pha dòng chảy trong cột sắc ký và ngăn chặn các thành phần hoặc chất gây ô nhiễm có tác dụng phá hủy chất độn cột xâm nhập vào cột sắc ký. Cột bảo vệ (guard column) có thể chặn các thành phần có khả năng hấp thụ vững chắc vào cột sắc ký vào cột sắc ký và cột bảo vệ phải giống như chất độn của cột sắc ký. Các cột tiền và cột bảo vệ có thể được thay thế thường xuyên mà không cần thay đổi cột sắc ký thường xuyên, điều này làm tăng tuổi thọ của cột sắc ký.

2, ngăn chặn khí xâm nhập vào cột sắc ký. Một số cột sắc ký (chẳng hạn như cột gel) không cho phép bong bóng khí xâm nhập, nếu không sẽ làm giảm hiệu quả của cột hoặc thậm chí tạo thành các buồng khí nhỏ khó loại bỏ. Do đó, để ngăn chặn bong bóng đi vào cột sắc ký, hãy chắc chắn sử dụng pha dòng chảy khử khí và làm theo các bước sau để cài đặt cột sắc ký. a. Tháo ốc vít kín ở lối vào cột sắc ký dưới, quan sát xem có rò rỉ dung môi hay không; b. Cột sắc ký có thể được đưa vào đường ống nếu có sự rò rỉ dung môi để tránh sự xâm nhập của bong bóng; c. Nếu không có dung môi chảy ra, chỉ ra rằng đầu này của cột sắc ký đã đi vào không khí, tại thời điểm này, đầu ra của cột sắc ký có thể được kết nối với van mẫu để rửa cột sắc ký theo hướng ngược lại để loại trừ không khí trong cột. Với tốc độ dòng chảy nhỏ 0,2ml/phút, nếu tốc độ dòng chảy của dung môi quá nhanh hoặc áp suất tăng đột ngột sẽ làm giảm hiệu suất của cột; D. Nếu dung môi chảy ra không chứa bong bóng, có nghĩa là khí trong cột đã được thải ra, sau đó cột sắc ký được nối đúng hướng, để bong bóng không thể đi vào cột sắc ký.

3. Tẩy rửa cột sắc phổ. Để các chất và tạp chất được thử nghiệm không bị mắc kẹt trong cột sắc ký, cột sắc ký nên được làm sạch kịp thời sau mỗi lần phân tích mẫu hoàn thành. Đầu tiên, dung môi mạnh mẽ để rửa các cột sắc ký với khả năng rửa mẫu thử nghiệm, để phân tích công việc thường được sử dụng trong phân tích sắc ký ngược làm ví dụ, vì chất đầu tiên chảy ra là chất cực lớn, tại thời điểm này áp dụng 100% methanol hoặc sử dụng isopropylene, tetrahydrofuran và các dung môi cực khác hơi yếu hơn sẽ hấp thụ các chất cực nhỏ trong cột để rửa sạch, lượng chất tẩy rửa nói chung là 20 lần thể tích cột. Nếu pha chảy là dung dịch đệm, trước tiên bạn nên rửa cột sắc ký bằng nước cất để rửa muối bên trong cột, sau đó rửa bằng dung môi thích hợp.

Các cột gel được sử dụng trong sắc ký lọc gel (Gel Filtration Chromatography) thường được sử dụng trong dung dịch đệm để làm pha chảy, sau khi sử dụng tất nhiên phải rửa sạch bằng nước cất. Nếu hoạt động liên tục, bạn có thể đặt dung dịch đệm bên trong cột qua đêm, nhưng duy trì tốc độ dòng chảy nhỏ (<0,5ml/phút) để ngăn chặn sự kết tủa của muối đệm, và nếu pha dòng chảy chứa halogen, ngay cả qua đêm, cột sắc ký phải được rửa sạch bằng nước cất để ngăn chặn sự ăn mòn của cột.

4. Lưu trữ cột sắc phổ. Nếu các cột sắc phổ tạm thời không dùng, khi lưu trữ phải chú ý một số điểm sau:

a. vị trí ngắn hạn trong vòng vài ngày, trước tiên nên rửa sạch cột sắc ký bằng dung môi (như cột gel thì dùng nước cất để rửa), sau đó niêm phong hai đầu cột sắc ký bằng ốc vít kín là được.

b. Nếu cột sắc ký không được sử dụng trong một thời gian dài, chỉ sử dụng các phương pháp trên để xử lý sẽ không được, sau đó nên sử dụng cột sắc ký sử dụng các dung môi được chỉ định trong hướng dẫn để điền vào cột sắc ký, cột phản chiếu thường sử dụng methanol, cột pha tích cực có thể được sử dụng orthoxane hoặc heptan, và cột gel không thể được sử dụng nước, vì cột nếu có sự phát triển của vi sinh vật sẽ làm giảm hiệu quả cột, tại thời điểm này áp dụng 0,05% dung dịch nước NaNs (chất bảo quản) để rửa sạch cột sắc ký, sau đó niêm phong cột sắc ký. Khi cột sắc ký được đặt trong một thời gian dài, hãy chắc chắn rằng cả hai đầu của cột sắc ký được niêm phong chặt chẽ để ngăn chặn hiện tượng co khô của chất độn cột do sự bay hơi của dung môi, vì điều này có thể dẫn đến giảm nghiêm trọng hiệu quả của cột.

Cột sắc ký nên được lưu trữ ở nhiệt độ phòng, nếu đặt trong môi trường dưới 0 ℃, cột sẽ đóng băng, điều này cũng sẽ dẫn đến giảm hiệu quả của cột.

B5-05=giá trị thông số Kd, (cài 2)

Cột sắc ký sau khi sử dụng lâu dài, nếu có tạp chất xâm nhập, sẽ làm cho giai đoạn cố định ở lối vào cột sắc ký "nút thắt" và dưới tác động của áp suất cao do pha chảy tạo ra, hình thành sự sụp đổ của đầu cột, đỉnh sắc ký bình thường của các thành phần mẫu được phân tích trở thành đỉnh kép, lúc này có thể sửa chữa cột sắc ký theo phương pháp sau. Đầu tiên xoay ốc vít chặt của đầu trụ xuống, lúc này sẽ phát hiện pha cố định bên trong đầu trụ đã bị nén vào, nghiêm trọng có thể thụt vào trên 10 mm. Trong trường hợp này, chúng tôi có thể dùng kim để móc phần kết cấu chuyển sang màu vàng của bảng điều khiển pha lưu động, và lấp đầy, nén chặt khu vực sụp đổ này với cùng một pha cố định, và buộc chặt ốc vít của cột sắc ký, và công việc sửa chữa kết thúc. Khi dùng cột sắc ký sau khi sửa chữa làm mẫu, đỉnh sắc ký liền khôi phục bình thường.

Trên đây giới thiệu vắn tắt về cách sử dụng chính xác và phương pháp khắc phục sự cố của máy sắc ký. Trong công việc hàng ngày, nếu những vấn đề này có thể được thực hiện nghiêm túc và giải quyết kịp thời, nó sẽ kéo dài đáng kể thời hạn sử dụng bình thường của thiết bị và làm cho hiệu suất của thiết bị được zui phát huy tối đa.