-
Thông tin E-mail
marklee@hankosci.com
-
Điện thoại
15800598580
-
Địa chỉ
Weixin Business Park, 1325 Heng Road, Quận Minhang, Thượng Hải
Về chúng tôi
Shanghai Haokuo Scientific Equipment Co., Ltd
Nghiên cứu ngoại tiết? Simple Western tăng gấp đôi hiệu suất phát hiện
Ngày:2025-10-21Đọc:1
Ngoại tiết (exosomes)Là các hạt nano lipid nhỏ có nguồn gốc từ nội thể, đường kính khoảng 30-200 nanomet, hầu hết các tế bào sống sẽ chủ động tiết ra exosome thông qua quá trình thải bào.[1]. Cho dù ở trạng thái bệnh lý hay sinh lý, việc giải phóng exosome có thể liên tục hoặc gây cảm ứng, và quá trình giải phóng có tính năng động, có thể kiểm soát và liên quan chức năng. Thành phần phân tử và lượng giải phóng của exosome phụ thuộc vào trạng thái của tế bào nguồn gốc của nó. Exosoma có thể thu được từ một loạt các dòng tế bào, nuôi cấy nguyên sinh và cũng có thể được chiết xuất từ các dịch sinh vật như huyết thanh, huyết tương, nước bọt. Với sự đa dạng của các nguồn, exosome có chức năng sinh lý đa tác dụng và ngày càng có nhiều nghiên cứu cho thấy vai trò quan trọng của nó trong một loạt các trạng thái bệnh lý như ung thư, bệnh truyền nhiễm, bệnh thoái hóa thần kinh. Do đó, exosome trở thành đối tượng nghiên cứu quan trọng trong phương pháp sinh thiết lỏng.[2]. Ngoài ra, exosome cũng có thể được cải tạo kỹ thuật để trở thành cóVận chuyển thuốc tiềm năng[3]。
Do kích thước nhỏ của exosome, việc tách nó khỏi ma trận sinh học phức tạp là một thách thức và năng suất tách thường thấp.Trong bối cảnh đó, Simple Western ™ Đây là một kỹ thuật lý tưởng để nghiên cứu exosome: phương pháp này chỉ cần 3 microlit mẫu và có độ nhạy chuẩn bị, làm giảm đáng kể yêu cầu của Western blot truyền thống đối với khối lượng exosome cần thiết.Sau đó, chúng có thể được phân tích đặc tính bằng cách sử dụng các kháng thể phát hiện đặc hiệu chống lại các kháng nguyên liên quan đến exosome - các kháng nguyên mục tiêu này có thể là dấu hiệu chung của exosome hoặc tất cả các tế bào hoặc dịch cơ thể có nguồn gốc của chúng. Trong chương trình thí nghiệm này, chúng tôi sẽ sử dụng các tiêu chuẩn exosome và kháng thể có sẵn trên thị trường thông qua Simple Western. ™ Phát hiện dấu hiệu chung và dấu hiệu đặc hiệu nguồn gốc của exosome.
Bài viết này giới thiệu ba loại tiêu chuẩn exosome "huyết tương người, huyết thanh người, tế bào A549 người (tế bào ung thư biểu mô đáy phế nang)" làm đối tượng, kết quả kiểm tra tính hiệu quả của kháng thể trong bảng dưới đây:
01. Biểu hiện của dấu ấn exosome phổ quát
• Flotillin-1: Được phát hiện trong cả ba tiêu chuẩn như một dấu hiệu chung cổ điển (Hình 1A).
Alix: được thể hiện trong cả ba tiêu chuẩn, nhưng được thể hiện nhiều hơn trong exosome có nguồn gốc tế bào A549 (Hình 1D).
02. Biểu hiện của dấu ấn đặc trưng nguồn
Annexin V: Là một dấu hiệu apoptosis với protein chống đông máu, được phát hiện trong các tế bào A549, exosome có nguồn gốc huyết tương và không được phát hiện trong exosome có nguồn gốc huyết thanh (Hình 1B).
EGFR (HER1): chỉ được phát hiện trong exosome có nguồn gốc từ tế bào A549 và không có tín hiệu trong exosome có nguồn gốc từ huyết thanh, huyết tương (Hình 1C).
Sử dụng Simple Western ™ Kháng nguyên mục tiêu exosome. A：flotillin-1； B：Annexin V； C：EGFR； D：Alix。
03. Dấu hiệu cho nhu cầu xử lý đặc biệt
CD63: Tín hiệu chỉ có thể được phát hiện sau khi tiêu chuẩn exosome được xử lý bằng PNGase F (desglycosylase) cho thấy tác động của việc sửa đổi glycosylation đối với phát hiện dấu ấn này (Hình 2).
04. Xác minh dấu hiệu khác
Các kháng thể còn lại trong Bảng 2 (ví dụ: Annexin A2, HSPA8/HSC70, TSG101, v.v.) được xác minh bởi Simple Western và có thể phát hiện tín hiệu đích trong tiêu chuẩn exosome tương ứng (Hình 2).
Hình 2. Chế độ xem đường bơi phát hiện từng kháng nguyên mục tiêu trong tiêu chuẩn exosome có nguồn gốc từ huyết tương và tế bào A549.
- Giá trị cốt lõi của công nghệ Simple Western -
(1) Hiệu quả vi lượng:Chỉ cần 3-5 μL exosome lysis (50 μL+cần thiết cho WB truyền thống), phù hợp với các mẫu quý; Toàn bộ quá trình mao mạch giảm tổn thất mẫu, thích hợp với protein màng có độ phong phú thấp.
(2) Độ nhạy cao: Giới hạn thấp hơn để phát hiện mức Pique, có thể đo CD63/Alix, v.v., được xử lý bởi PNGase F để phá vỡ nhiễu glycosyl, nhận ra EGFR và phát hiện cụ thể khác.
(3) Chống nhiễu ma trận: 12-230kDa mao mạch điện di khử tạp chất, exosome cracking có thể được đưa lên máy trực tiếp, không cần thanh lọc rườm rà.
(4) Đa định lượng: 8 mục tiêu được đo đồng bộ với mẫu đơn, phù hợp với tiêu chuẩn MISEV, phạm vi động bao gồm 6 bậc độ lớn.
(5) Quy trình tự động: 3 giờ hoàn toàn tự động hóa kết quả, giảm sự suy thoái protein; Mỗi lỗ được kiểm soát chất lượng độc lập để đáp ứng QC chuẩn bị thể chế tiết ra bên ngoài.
(6) Định lượng chính xác: Hỗ trợ định lượng tuyệt đối/tương đối, kích thước mẫu thấp+độ lặp lại cao, phù hợp với phát triển dấu hiệu sinh thiết lỏng, đẩy nhanh nghiên cứu khoa học để chuyển đổi lâm sàng.
* Bài viết được đăng lại từ "ProteinSimple" WeChat
* Tài liệu tham khảo:
1. Exosomes, D M Pegtel và S J Gould, Đánh giá hàng năm về hóa sinh học, 2019, 88:487-514.
2. Các nang ngoài tế bào – các dấu hiệu sinh học và tác động của tương tác tế bào trong ung thư, J Rak, Biên giới trong Dược học, 2013, 4:21.
3. Exosomes như các hệ thống điều trị có thể cấu hình lại, R Conlan, S Pisano, M Oliveira, M Ferrari và I Mendes Pinto, Xu hướng y học phân tử, 2017, 23(7):636-650.
▍Đối với ProteinSimple:
ProteinSimple là một thương hiệu phân tích protein thuộc Tập đoàn Bio-Techne (NASDAQ: TECH), một công ty niêm yết của Nasdaq có trụ sở tại Hoa Kỳ. "Làm cho phân tích protein dễ dàng hơn" là tầm nhìn của ProteinSimple từ lâu. ProteinSimple từ lâu đã cam kết phát triển và sản xuất các công cụ phân tích protein sáng tạo chính xác hơn, nhanh hơn và nhạy hơn, bao gồm đặc tính điện tích protein, phân tích độ tinh khiết protein, phát hiện định lượng sau khi dịch protein, công nghệ phát hiện miễn dịch protein như Digital Western Blot và Multi ELISA Micro Flux nhạy cảm cao để giúp các nhà khoa học trong các lĩnh vực dược phẩm sinh học, liệu pháp tế bào và gen, y sinh học và khoa học đời sống giải quyết các vấn đề phân tích protein, đẩy nhanh hiệu quả nghiên cứu và phát triển thuốc, phân tích sâu mối quan hệ giữa protein và bệnh tật.Là đại lý ủy quyền của Protein Simple Đông Trung Quốc (Giang, Chiết Giang, Thượng Hải, Hoàn, Sơn Đông), Shanghai HaoExtend sẽ cung cấp cho mọi người các thiết bị và thiết bị của Protein Simple.
▍Về Hạo khuếch trương Thượng Hải:
Thượng Hải Haopeng Science Equipment Co, Ltd, được thành lập vào năm 2019 và có trụ sở tại Thượng Hải, là một nhà cung cấp dịch vụ chuyên nghiệp về thiết bị phòng thí nghiệm/vật tư tiêu hao và dụng cụ phân tích. Công ty cam kết cung cấp thiết bị chuyên nghiệp công nghệ cao trong và ngoài nước cũng như dịch vụ tư vấn kỹ thuật cho khách hàng trong các lĩnh vực liên quan như sinh học, y học, kiểm tra vật chất, phân tích hóa chất, thực phẩm, sản xuất công nghiệp và các lĩnh vực khác.