Chuẩn bị thiết bị: Kiểm tra nguồn cung cấp CO₂, kết nối nguồn khí (xi lanh CO₂) có bình thường không, đảm bảo áp suất van giảm áp CO₂ ổn định (thường là 0,1~0,2MPa). Bật nguồn thiết bị, làm nóng trước đến nhiệt độ thiết lập (chẳng hạn như 37 ° C) và làm nóng đĩa nước trong bể nuôi cấy để duy trì độ ẩm.

Cài đặt tham số: đặt nồng độ CO ₂ theo nhu cầu tế bào (thường là 5%), được hiệu chuẩn bằng cảm biến hồng ngoại hoặc dẫn nhiệt; Phạm vi nhiệt độ đặt thường là nhiệt độ phòng đến 50 ℃, cần làm nóng trước để tránh biến động nhiệt độ; Điều chỉnh tốc độ quay (50~300rpm) và biên độ (thường là 5~50mm) theo bình nuôi cấy để tránh phun chất lỏng; Đĩa nước được thêm vào nước cất vô trùng để duy trì độ ẩm ≥95%.

Đặt mẫu: container cần được niêm phong (chẳng hạn như sử dụng màng nắp thoáng khí hoặc thắt chặt nắp chai) để ngăn chặn CO ₂ thoát ra và ô nhiễm; Đặt mẫu cân bằng, tránh di chuyển trọng tâm ảnh hưởng đến vận hành của máy lắc.

Giám sát hoạt động: Thường xuyên kiểm tra nồng độ CO ₂, nhiệt độ ổn định, ghi lại các thông số hoạt động; Cần cân bằng độ thấm CO ₂ khi sử dụng chai nuôi cấy có nắp thoáng khí hoặc chai kín.

Kết thúc hoạt động: tắt nguồn khí CO ₂ và tắt máy sau khi nồng độ giảm xuống 0%, tránh thiệt hại cho cảm biến; Làm sạch đĩa nước và khoang để ngăn chặn sự phát triển của vi sinh vật.

II. Hướng dẫn thực hành tốt nhất về nuôi dưỡng tế bào

Loại tế bào và lựa chọn môi trường: Chọn môi trường thích hợp dựa trên loại tế bào, chẳng hạn như DMEM phù hợp với dòng tế bào nhân nhanh, MEM phù hợp với nhiều loại tế bào; Các tế bào gốc cần thêm các yếu tố tăng trưởng đặc biệt.

Phục hồi tế bào và đông lạnh: làm tan băng tế bào nhanh chóng khi hồi sức, giảm tổn thương tinh thể băng; Chất bảo vệ đông lạnh (ví dụ: 10% DMSO) được thêm vào khi lưu trữ đông lạnh và chuyển sang nitơ lỏng sau khi làm mát từ từ đến -80 ° C.

Hoạt động vô trùng: tất cả các hoạt động được thực hiện trong bàn làm việc siêu sạch, mặc quần áo thí nghiệm, găng tay, mặt nạ và mũ; Tránh nói chuyện và ho trong khu vực hoạt động và giảm nguy cơ lây lan vi khuẩn qua không khí.

Quan sát và ghi chép định kỳ: Thường xuyên quan sát sự phát triển của tế bào dưới kính hiển vi, bao gồm hình thái tế bào, mật độ tăng trưởng và có ô nhiễm hay không; Dữ liệu liên quan được ghi lại để các bất thường có thể được phát hiện và xử lý kịp thời.

Bảo trì và hiệu chuẩn thiết bị: Thường xuyên hiệu chỉnh cảm biến CO₂ (6 tháng một lần), thay màng lọc (nếu có); Tắt nguồn khi làm sạch, tránh chất lỏng xâm nhập vào hệ thống mạch.