Cột sắc ký lỏng là thành phần tách biệt cốt lõi của máy sắc ký lỏng hiệu quả cao (HPLC) và hiệu suất của nó ảnh hưởng trực tiếp đến độ chính xác và lặp lại của kết quả phân tích. Khi có sự bất thường về hình núi, tăng áp suất cột, giảm số lượng tấm tháp lý thuyết hoặc mất pha cố định, cột sắc ký cần được thay thế kịp thời. Sau đây là quy trình thay thế tiêu chuẩn và những điều cần lưu ý then chốt:
I. Chuẩn bị trước
Bảo vệ an toàn
Đeo găng tay bảo hộ, kính bảo hộ và quần áo thử nghiệm để tránh tiếp xúc với dung môi hữu cơ và các bộ phận sắc nhọn.
Tắt nguồn thiết bị và giải phóng áp suất hệ thống để ngăn chặn phun chất lỏng áp suất cao.
Công cụ&Vật liệu
Cột sắc ký mới (mô hình/kích thước phù hợp với cột gốc), đầu nối hai chiều, cờ lê, miếng đệm kín (ưu tiên vật liệu PEEK).
Phụ kiện đường ống dự phòng (nếu cần điều chỉnh chiều dài).
Tra cứu hướng dẫn dụng cụ và bảng tham số kỹ thuật cột sắc phổ.
Xác nhận trạng thái hệ thống
Dừng chương trình chạy hiện tại và chuyển sang pha dòng chảy tinh khiết (ví dụ: methanol/acetonitrile) và rửa liên tục trong ít nhất 30 phút với tốc độ dòng chảy thấp (0,5-1 mL/phút), loại bỏ các mẫu còn lại trong đường ống.
Ngắt kết nối đường tín hiệu của máy dò và đánh dấu vị trí giao diện đường vào và ra.
II. Các bước tháo dỡ cột cũ
Mô-đun cột sắc ký định vị
Tìm giá đỡ cột sắc ký bên trong hộp nhiệt độ cột và quan sát thứ tự kết nối đường ống (thường là: van mẫu → cột sắc ký → máy dò).
Loại bỏ các cột cũ dần
Nới lỏng các đai ốc ở cả hai đầu bằng cờ lê, loại bỏ đầu ra (gần phía máy dò) trước và từ từ giải phóng chất lỏng còn sót lại vào chai chất thải.
Chờ một lúc để giảm áp lực cho hệ thống trước khi tháo đầu vào.
Nghiêm cấm kéo mạnh đường ống trong trường hợp làm hỏng các sợi khớp.
Làm sạch giao diện và đánh giá hao mòn
Kiểm tra xem tấm sàng có bị tắc hoặc biến dạng hay không và nếu cần thiết, hãy rửa bằng siêu âm.
Ghi lại số sê-ri cột cũ, thời gian sử dụng và đặc điểm lỗi để tham khảo lựa chọn tiếp theo.
III. Điểm lắp đặt cột mới
Kiểm tra hướng
Tất cả các cột sắc ký đều có dòng chảy rõ ràng đến nhận dạng (mũi tên chỉ vào lối ra) và cài đặt ngược lại có thể dẫn đến sự sụp đổ của chất độn.
Một số đầu và đuôi của cột chống pha có thể được sử dụng, nhưng cột trao đổi pha/ion tích cực phải tuân theo hướng nghiêm ngặt.
Không cài đặt bong bóng
Áp dụng "phương pháp kết nối dưới chất lỏng": nhúng đầu vào cột mới vào cốc chứa pha chảy, kết nối đường ống trong khi xả.
Bơm mở được rót với tốc độ dòng chảy rất thấp (0,2mL/phút) cho đến khi không có bong bóng thoát ra khỏi đầu ra.
Điều khiển mô-men xoắn
Sử dụng cờ lê chuyên dụng để luân phiên xoay đai ốc theo đường chéo, cường độ vừa phải (cảm giác hơi cản là được), thắt chặt quá mức có thể dẫn đến nén giường cột.
Đề nghị kiểm tra định kỳ tình trạng lỏng lẻo trong quá trình vận hành sau khi cài đặt.
Khởi động lại hệ thống và cân bằng
Rửa ban đầu
Rửa sạch với tốc độ dòng chảy thấp trong thành phần pha dòng chảy ban đầu (trộn theo tỷ lệ) trong 60 phút, quan sát sự ổn định của áp suất cột.
Nếu áp suất cột cao bất thường, có thể tạm dừng và khai thông bằng cồn isopropyl trong thời gian ngắn.
Cân bằng gradient
Thực hiện quy trình gradient trống để theo dõi lượng trôi cơ bản phải<± 0,5mAU.
Kiểm tra mẫu hỗn hợp xác minh độ tách và so sánh số lượng tấm lý thuyết tháp đạt tiêu chuẩn (N ≥ 80% giá trị lý thuyết).
Hiệu chuẩn dữ liệu
Cập nhật thông tin cột sắc ký trong tệp phương pháp trạm làm việc, thiết lập lại bảng kiểm soát thời gian lưu giữ.
Lưu báo cáo chứng nhận cột mới, bao gồm biểu đồ kiểm tra hiệu ứng cột và đường cong áp suất.
Tuổi thọ cột sắc ký có thể được tối đa hóa thông qua hoạt động tiêu chuẩn hóa và tuổi thọ cột phản chiếu điển hình có thể đạt 500-1000 lần lấy mẫu. Bảo trì hàng ngày đề nghị rửa đơn giản hàng tuần và bảo trì tái tạo sâu hàng tháng.