Trong lĩnh vực đặc tính hạt nano,Kích thước hạt、Tập trungVới các tham số như tiềm năngXác định chính xácLà yếu tố cốt lõi đảm bảo thành công trong nghiên cứu và ứng dụng. Bài viết trước chúng tôi đã chia sẻ chi tiết.「Thông số chung trong phát hiện hạt nano ». Việc thu thập chính xác các thông số này không chỉ giúp phân tích sâu hơn các đặc tính vật lý và hóa học của vật liệu nano, mà còn cho phép phân tích các thông số này trongY sinh học, Khoa học vật liệu, Khoa học môi trườngỨng dụng thực tế trong các lĩnh vực như: v. v...... đã cung cấp căn cứ then chốt. Tuy nhiên,Độ chính xác, độ tin cậy, lặp lại và tái tạo dữ liệu đo lườngChỉ dựa vào thiết bị đo đạc tiên tiến là không đủ, còn cần thông qua một bộ quy trình xác minh nghiêm ngặt để đảm bảo hiệu suất và đặc điểm kỹ thuật vận hành của dụng cụ. Đây là......3QChứng nhận (IQ, OQ và PQ)Tầm quan trọng trong đặc tính hạt nano.

01

Chứng nhận 3QNội dung và ý nghĩa

Chứng nhận 3Q: Xác nhận cài đặt (IQ), Xác nhận vận hành (OQ) và Xác nhận hiệu suất (PQ)Là một bộ quy trình kiểm tra chung quốc tế, nhằm đảm bảo thiết bị phân tíchCài đặt tuân thủ, ổn định hoạt động và độ tin cậy của hiệu suất đo lường. Quy trình này được quy định rõ ràng trong Quy tắc quản lý chất lượng sản xuất dược phẩm (GMP) và được sử dụng rộng rãi trong nhiều lĩnh vực như dược phẩm, thiết bị y tế và khoa học vật liệu^[1]. Chứng nhận 3Q cung cấp một khuôn khổ tiêu chuẩn hóa cho việc sử dụng và bảo trì các thiết bị trong các lĩnh vực liên quan đến y sinh học, đảm bảo rằng các thiết bị luôn có thể cung cấp dữ liệu chính xác và đáng tin cậy trong cài đặt, vận hành và ứng dụng thực tế^[2]。

Trong lĩnh vực đặc tính hạt nano,Chứng nhận 3Q không chỉ quy định việc lắp đặt và vận hành thiết bị mà còn đảm bảo tính khoa học và khả năng lặp lại của dữ liệu thông qua quy trình xác minh có hệ thống. Bài viết này sẽ được giải thích chi tiếtNội dung cốt lõi của chứng nhận 3Q và thực hiện cụ thể của nó trong đặc tính hạt nanonội dungTìm hiểu làm thế nào để nâng cao độ tin cậy của thiết bị thông qua một hệ thống xác minh nghiêm ngặt, góp phần vào sự phát triển chất lượng cao của khoa học nano và các ứng dụng công nghiệp.

Xác nhận cài đặt (Installation Qualification – IQ)

IQ là quá trình kiểm tra và xác minh một cách có hệ thống quá trình lắp đặt các thiết bị đặc trưng cho các hạt nano.Mục đích của nó là để đảm bảo rằng các thiết bị được cài đặt phù hợp với các tiêu chuẩn thiết kế của nhà sản xuất và các yêu cầu sử dụng của người dùng thông qua hồ sơ tài liệu và kiểm tra thực tế. Điều này bao gồm kiểm tra tài liệu, xác nhận môi trường cài đặt và xác nhận các thành phần của thiết bị.

• Kiểm tra tài liệu: Kiểm tra xem sổ tay cài đặt, sổ tay người dùng, sổ tay bảo trì của dụng cụ có đầy đủ hay không. Kiểm tra các thông tin cơ bản như tên, mô hình, số sê-ri của dụng cụ để đảm bảo nó phù hợp với danh sách mua sắm. Xác nhận rằng môi trường lắp đặt của thiết bị phù hợp với yêu cầu thiết kế, bao gồm nhiệt độ, độ ẩm, nguồn điện, v.v.
• Xác nhận môi trường cài đặt: Đảm bảo rằng các điều kiện môi trường tại địa điểm lắp đặt (ví dụ: thoát gió, kiểm soát nhiệt độ và độ ẩm, cung cấp điện, v.v.) đáp ứng các yêu cầu vận hành của thiết bị. Kiểm tra an toàn điện, an toàn cơ khí và an toàn môi trường của thiết bị để đáp ứng các tiêu chuẩn liên quan.
• Thiết bị xác nhận: Kiểm tra xem các bộ phận của dụng cụ có được lắp đặt chính xác hay không, kết nối có chắc chắn hay không. Xác nhận việc hiệu chuẩn và vận hành thiết bị đã hoàn thành và tất cả các chức năng đều bình thường.

Với IQ, các bước cơ bản để đảm bảo thiết bị được lắp đặt đúng theo tiêu chuẩn thiết kế, cung cấp các điều kiện tiên quyết để xác nhận hoạt động và xác nhận hiệu suất tiếp theo.

Xác nhận hoạt động (Operational Qualification – OQ)

OQ là quá trình xác minh rằng thiết bị và dụng cụ có thể hoạt động đúng trong phạm vi hoạt động quy định (thường là trong điều kiện hoạt động không tải hoặc mô phỏng) sau khi IQ hoàn thành và đảm bảo rằng các thông số chức năng và hiệu suất của chúng phù hợp với các chỉ số kỹ thuật đặt trước của nhà sản xuất.Mục tiêu cốt lõi của OQ là xác nhận rằng các chức năng khác nhau của thiết bị đáp ứng các yêu cầu thiết kế và xác minh sự ổn định và nhất quán của nó trong các điều kiện hoạt động tiêu chuẩn.

Tuy nhiên, chỉ riêng OQ không đảm bảo các phép đo đáng tin cậy của thiết bị trong điều kiện thí nghiệm thực tế, dẫn đến sự cần thiết của PQ.

Xác nhận hiệu suất (Performance Qualification – PQ)

Sau khi hoàn thành OQ thành công, thiết bị được công nhận là hoạt động ổn định trong phạm vi hoạt động quy định và có khả năng thực hiện các nhiệm vụ đo lường. màPQ là quá trình kiểm tra xem thiết bị có thể đạt được hiệu suất mong muốn trong điều kiện sử dụng thực tế hay không, mục đích của nó là đảm bảo rằng thiết bị có thể cung cấp kết quả đo lường chính xác liên tục và ổn định trong điều kiện thử nghiệm thực tế và quy trình công nghệ.

OQ và PQ thường dễ bị nhầm lẫn trong các nỗ lực xác minh hàng ngày. Để tiện so sánh, chúng tôi dùng bảng dưới đây để tổng kết sự khác biệt giữa hai bảng dưới đây.

Do bảng trên không khó hiểu, mục đích chính của PQ là kiểm tra hiệu suất thiết bị trong điều kiện sản xuất thực tế, đảm bảo thiết bị có thể đạt được các tiêu chuẩn hiệu suất đã thiết lập một cách ổn định và đáp ứng các yêu cầu của sản xuất sản phẩm. Chứng nhận PQ là một bước quan trọng trong quá trình xác minh thiết bị, tầm quan trọng của nó được phản ánh trong các khía cạnh sau: 1, giảm rủi ro: thông qua PQ, đảm bảo hoạt động an toàn, đáng tin cậy của thiết bị trong ứng dụng thực tế, giảm rủi ro chất lượng; Tuân thủ: Tuân thủ các quy định quốc tế và tiêu chuẩn công nghiệp, chẳng hạn như GMP (Quy tắc quản lý chất lượng sản xuất dược phẩm), ISO 13485, v.v., để cải thiện sự tuân thủ của doanh nghiệp; 3, nâng cao chất lượng: xác minh chức năng và hiệu suất của thiết bị, đảm bảo rằng nó đáp ứng các yêu cầu dự kiến trong quá trình sản xuất, do đó nâng cao chất lượng sản phẩm.Đối với thiết bị dụng cụ, IQ, OQ thường có thể được cung cấp bởi nhà cung cấp thiết bị dưới dạng dịch vụ sản phẩm, trong khi PQ về nguyên tắc cần được thực hiện bởi người sử dụng thiết bị hoặc đơn vị ứng dụng theo quy trình quy trình thực tế với mẫu thực tế.

Thiết bị kiểm tra hạt nano thuộc về dụng cụ đo lường tinh vi, dữ liệu kiểm tra liên quan đến một loạt công việc nghiên cứu khoa học sản xuất tiếp theo. Thông qua chứng nhận PQ nghiêm ngặt, về cơ bản có thể xác định khả năng phát hiện của thiết bị, có ý nghĩa hướng dẫn quan trọng về cách xem dữ liệu thử nghiệm của thiết bị này trong tương lai. Đối với dụng cụ biểu tượng tinh vi, chứng nhận PQ bao gồm nội dung nghiệm chứng thí nghiệm nào? Tiếp theo, chúng ta sẽ đi sâu vào các thí nghiệm chính khác nhau trong chứng nhận PQ và tác động của chúng đối với chất lượng dữ liệu.

02

Liên quanKiểm tra PQThông số chính

Độ chính xác (Accuracy)

Tại PQ,Độ chính xác làThông số sản phẩm Thông tin sản phẩm Bình Luận(giá trị đo)Với giá trị thực(Đúngvalue)hoặc giá trị tham chiếu(Chấp nhậnreferencevalue)Mức độ gần gũi.Theo tin mới nhất.ICH Xác nhận các thủ tục phân tích Q2(R)2) Định nghĩa của hướng dẫn xác minh phương pháp phân tích, độ chính xác phản ánh "mức độ gần với giá trị thực" của phương pháp đo, đánh giá tính chính xác của kết quả đo của thiết bị và là một trong những chỉ số cốt lõi nhất để đánh giá hiệu suất của thiết bị.

Trong đặc tính hạt nano, độ chính xác thường được đo bằng cáchChất tham chiếu chuẩn (Certified Reference Material – CRM) hoặc các phương pháp khác(như kính truyền qua TEM phát hiện kích thước hạt) để đánh giá. Nói cách khác, độ chính xác phản ánh liệu độ lệch của dữ liệu thu được có nằm trong phạm vi chấp nhận được khi thiết bị xác định các thông số mục tiêu, chẳng hạn như kích thước hạt, nồng độ hoặc tiềm năng zeta của hạt nano hay không. Độ chính xác có thể được sử dụng trong các thí nghiệm hóa học và y sinh phân tíchTỷ lệ thu hồi (Recovery)Tham số này để đánh giá. Nó đại diện cho tỷ lệ mà các phân tích mục tiêu đã được thu thập hoặc phát hiện thành công từ mẫu trong quá trình thử nghiệm. Công thức tính toán là:

Lý tưởng nhất, tỷ lệ thu hồi phải gần 100%, cho thấy các phương pháp thử nghiệm có thể trích xuất hoặc phát hiện các phân tích mục tiêu. Tỷ lệ phục hồi sai lệch 100% phản ánh sai số hệ thống của phương pháp thử nghiệm (bias). Trong các ứng dụng thực tế, phạm vi chấp nhận được của tỷ lệ thu hồi thường được xác định dựa trên nhu cầu thử nghiệm và tiêu chuẩn công nghiệp. Ví dụ, trong phân tích sinh học, yêu cầu chung về tỷ lệ phục hồi là từ 80% -120%.^[6]。

Ngoài ra, thông qua CRMTranh Luận/Thảo Luận (Debate)So sánh tài liệu tham khảo)Ngoài phương pháp, đánh giá độ chính xác cũng thường được áp dụng.Thí nghiệm gia công (Spiking Study)- Thêm một lượng chất phân tích đã biết (ví dụ: tiêu chuẩn bên trong, thường là CRM) vào mẫu thử nghiệm hoặc làm giàu trong mẫu thử nghiệm bằng ma trận không chứa chất đó, sau đó đo bằng các phương pháp phân tích được xác minh và so sánh độ lệch giữa kết quả đo được và lượng lý thuyết bổ sung (hoặc giá trị lý thuyết của tiêu chuẩn bên trong được thêm vào) (trong trường hợp độ lệch quá lớn trong tỷ lệ phục hồi có thể chỉ ra rằng thành phần ma trận gây nhiễu phép đo, cần có phương pháp tối ưu hóa hoặc hiệu ứng ma trận hiệu chỉnh); hoặc đánh giá (phương pháp hoặc thiết bị) độ chính xác của việc phát hiện các thành phần bên ngoài tiêu chuẩn bên trong của mẫu hỗn hợp bằng cách đánh giá riêng các mẫu không được đánh dấu và sau khi được đánh dấu/làm giàu.

Ngoài ra, khi tất cả các thành phần liên quan không thể có được để xây dựng một ma trận phù hợp cho các thí nghiệm bổ sung, các nhà nghiên cứu cũng có thể áp dụngphương trình (Chính giácthủ tục,Nó đề cập đến việc sử dụng một phương pháp phân tích độc lập khác với nguyên tắc của phương pháp chính, đo cùng một mẫu và xác minh độ tin cậy của phương pháp chính bằng cách so sánh kết quả.）Để kiểm tra độ chính xác của phương pháp đo lường chính.

Độ hòatan nguyênthủy(Độ chính xác)

Độ chính xác đề cập đến việc lặp lại các phép đo trong cùng một điều kiện thí nghiệm.Một tập hợp dữ liệu tại cùng một mẫuGiữaRời rạcMức độ, tức là tính nhất quán của kết quả đo lường.Độ chính xác đo lường khả năng lặp lại và tái tạo của phương pháp, không phải độ chính xác của dữ liệu. Lấy bắn mục tiêu làm ví dụ (hình dưới đây): độ chính xác càng cao, độ biến động của phương pháp càng nhỏ, kết quả đo càng ổn định, nhưng không nhất thiết phải chính xác (gần với hồng tâm); Tương tự, dữ liệu có độ chính xác cao không nhất thiết phải ổn định, tính tái tạo của dữ liệu phát hiện cũng không nhất thiết phải cao. Độ chính xác và độ chính xác có thể đánh giá độc lập cũng có thể đánh giá kết hợp, nhưng mỗi bên đều cần phải có tiêu chuẩn chấp nhận dự định trước.

Theo ICH Q2(R2), độ chính xác có thể được chia thành ba loại sau:

• Độ lặp lại(Độ lặp lại)Độ chính xác của kết quả đo lặp đi lặp lại trong một khoảng thời gian ngắn được thực hiện trong cùng một phòng thí nghiệm, cùng một người vận hành, cùng một dụng cụ, trong cùng một điều kiện. Lấy ví dụ về phát hiện nồng độ hạt, đề nghị (a) thiết lập ít nhất 9 thử nghiệm, tức là 3 nồng độ khác nhau, lặp lại 3 lần cho mỗi nồng độ; Hoặc (b) lặp lại thử nghiệm ít nhất 6 lần cho một nồng độ thử nghiệm cố định để đánh giá độ lặp lại.
• Độ chính xác trung gian (Intermediate Precision)Độ chính xác thu được từ các phép đo được thực hiện trong cùng một phòng thí nghiệm, nhưng bởi các nhà khai thác khác nhau, tại các thời điểm khác nhau hoặc trong các điều kiện thiết bị khác nhau. Phạm vi thí nghiệm nghiệm chứng cụ thể, cần người nghiệm chứng căn cứ vào tình huống ứng dụng thực tế để xác định. Nói cách khác, không phải tất cả các trường hợp đều cần phải kiểm tra từng biến riêng lẻ, cũng không nhất thiết phải kiểm tra tất cả các biến một cách toàn diện, mà là dựa trên nhu cầu thực tế, đánh giá các yếu tố ngẫu nhiên có thể ảnh hưởng đến độ chính xác của phép đo và xác minh thiết kế thử nghiệm dựa trên phát triển sản xuất và đánh giá rủi ro. Theo các yếu tố đánh giá khác nhau và thiết kế thử nghiệm, độ chính xác trung gian cũng bao gồm độ chính xác ban ngày (ngày thử nghiệm khác nhau), độ chính xác phòng (điều kiện môi trường khác nhau: thay đổi nhiệt độ và độ ẩm, rung, luồng không khí, v.v.), độ chính xác nhân sự (các nhà điều hành khác nhau), độ chính xác giữa các thiết bị (các dụng cụ khác nhau hoặc các lô khác nhau của dụng cụ), độ chính xác trong lô/lô (các mẫu trong cùng một lô), v.v.
• Khả năng tái tạo (Reproducibility)Độ chính xác của kết quả được đo bằng cách sử dụng cùng một phương pháp bởi những người khác nhau trong các phòng thí nghiệm khác nhau hoặc trong các môi trường khác nhau. Trong hầu hết các trường hợp, các cơ quan quản lý (ví dụ: FDA, EMA) thường không bắt buộc phải gửi dữ liệu cho các xét nghiệm tái tạo, nhưng vẫn cần xem xét các xét nghiệm này trong các trường hợp sau: (a) Phương pháp phân tích tiêu chuẩn (ví dụ: đưa một xét nghiệm vào dược điển). (b) Nhiều phòng thí nghiệm được sử dụng chung (ví dụ, khi các phòng thí nghiệm liên khu vực hoặc liên cơ quan sử dụng cùng một phương pháp).

Trong đặc tính hạt nano, độ chính xác cũng là một trong những chỉ số cơ bản để đánh giá hiệu suất của thiết bị. Các dụng cụ có độ chính xác cao là rất quan trọng để đảm bảo độ tin cậy của dữ liệu thí nghiệm. Ví dụ: xác minh độ chính xác của kích thước hạt, độ chính xác của thiết bị thường được đánh giá bằng cách đo cùng một mẫu tiêu chuẩn CRM nhiều lần, chẳng hạn như microsphere tiêu chuẩn kích thước hạt nano, và tính toán độ lệch chuẩn của kết quả đo (Standard Deviation, SD) hoặc hệ số biến thiên (giá trị CV).

Hệ số biến thiên (Coefficient of Variation – CV)Là một chỉ số thống kê đo lường mức độ rời rạc của dữ liệu,Tỷ lệ độ lệch chuẩn được thể hiện dưới dạng dữ liệu so với trung bình(do đó đôi khi còn được gọi là độ lệch chuẩn tương đối, RSD), có thể so sánh trực quan sự ổn định của các dụng cụ khác nhau hoặc trong các điều kiện đo lường khác nhau. Nó là một chỉ số không có kích thước và thường được biểu thị bằng phần trăm. Giá trị CV càng nhỏ và mức độ rời rạc càng thấp, cho thấy độ lặp lại và ổn định của kết quả đo càng tốt và độ chính xác càng cao. Công thức tính toán hệ số biến thiên là:

Trong đó σ là độ lệch chuẩn (SD) và μ là giá trị trung bình của dữ liệu đo.

Phạm vi phát hiện (Range)

Phạm vi phát hiện có nghĩa là một phương pháp phân tích có thể áp dụng cho phạm vi hiệu quả của việc phát hiện mẫu với điều kiện đảm bảo độ chính xác, độ chính xác và tuyến tính phù hợp với yêu cầu.

Giới hạn phát hiện (LOD) và giới hạn định lượng (LOQ)

• Lời bài hát:Phương pháp phân tích hoặc dụng cụ có thể phát hiện đáng tin cậy các giá trị đại lượng (kích thước hạt, nồng độ, tiềm năng, v.v.) của vật thể mục tiêu nhưng không yêu cầu tín hiệu này phải được định lượng chính xác. LOD đại diện cho giới hạn thấp hơn về độ nhạy của phương pháp phát hiện, đồng thời rất quan trọng đối với phân tích dấu vết.

• Số lượng:Giới hạn dưới của phạm vi phát hiện của phân tích có thể được đo định lượng. Phương pháp phân tích hoặc công cụ có thểĐáng tin cậy và chính xácĐo lường các giá trị đại lượng của vật thể mục tiêu (kích thước hạt, nồng độ, tiềm năng, v.v.) đòi hỏi độ chính xác và độ chính xác đầy đủ của các giá trị đo lường. Khi thiết lập LOQ, CV% ≤10% (hoặc yêu cầu nghiêm ngặt hơn) cần được đáp ứng.

Các bài viết trước đây của số này làm rõ chi tiết ý nghĩa và tầm quan trọng của việc hạn chế phát hiện trong lĩnh vực đặc tính hạt trong lĩnh vực dược phẩm sinh học."Các hạt đại diện cho LOD"。

Khoảng tuyến tính (Linearity Range)

Tuyến tính (Linearity) đề cập đến khả năng của một phương pháp phân tích để thể hiện mối quan hệ tuyến tính giữa tín hiệu phát hiện (giá trị đáp ứng) và nồng độ hoặc số lượng chất được đo trong một phạm vi nồng độ cụ thể.Nói tóm lại, khi nồng độ mẫu hoặc số lượng hạt thay đổi trong một phạm vi nhất định, các phép đo phải thay đổi tỷ lệ thuận. Phương pháp tuyến tính tốt có hệ số tương quan tuyến tính cao (Correlation Coefficient, R)²(và R)²Càng gần 1, mối quan hệ tuyến tính càng tốt. Thông thường, một tập hợp các dữ liệu R²≥ 0,8 được coi là có liên quan; Để đảm bảo độ tin cậy của dữ liệu, thường đòi hỏi R.²≥ 0,99 (hoặc tham khảo các tiêu chuẩn công nghiệp cụ thể).

Khoảng tuyến tính (Linearity Range hoặc L)InearRegion) Đề cập đến phạm vi tối đa mà phương pháp phát hiện duy trì mối quan hệ tuyến tính trong một nồng độ hoặc số lượng hạt cụ thể.Dưới giới hạn thấp hơn của dải tuyến tính, tín hiệu có thể thấp hơn LOD của thiết bị và không thể được phát hiện một cách đáng tin cậy; Trên giới hạn trên của khoảng tuyến tính, có thể có bão hòa tín hiệu, thiết bị không phản ứng chính xác hoặc có hiệu ứng phi tuyến tính. Trong quá trình PQ, cũng cần phải xác minh khoảng tuyến tính của phương pháp phân tích hoặc dụng cụ, thường bằng các phương pháp thực nghiệm sau:

• Phương pháp đường cong chuẩn (Calibration curve method)：Các phép đo được thực hiện bằng cách sử dụng các mẫu tiêu chuẩn với nồng độ khác nhau hoặc số lượng hạt khác nhau, vẽ các đường cong tiêu chuẩn. Các bước thí nghiệm cụ thể như sau:

1. Chuẩn bị một loạt các mẫu tiêu chuẩn với nồng độ khác nhau, có thể là microsphere tiêu chuẩn với nồng độ danh nghĩa lý thuyết hoặc các mẫu thực tế khác với nồng độ đã biết. Các thiết lập nồng độ khác nhau thường được chuẩn bị bằng cách pha loãng liên tục hoặc tỷ lệ nhân của mẫu ban đầu. (ICH khuyến cáo phân phối ít nhất 5 nồng độ thích hợp trên toàn bộ phạm vi)^[2]。）

2. Mỗi mẫu được đo riêng biệt bằng cách sử dụng các phương pháp được đo, ghi lại các tín hiệu phát hiện (chẳng hạn như độ hấp thụ, cường độ huỳnh quang, diện tích đỉnh, v.v.) hoặc các giá trị đại lượng (gán nồng độ trực tiếp, v.v.).

3. Vẽ biểu đồ phân tán của tín hiệu phát hiện/giá trị đại lượng (y) so với nồng độ dự kiến (x).

4. Phù hợp với một đường bằng cách phân tích hồi quy tuyến tính, tính toán độ dốc (k), đánh chặn (b) và hệ số tương quan (R)²) 。

5. theoR²Và tiêu chuẩn xác minh tỷ lệ thu hồi (thường yêu cầu độ lệch trong vòng ± 10%) xác định khoảng tuyến tính.

• Hồi quy tuyến tính (Linear Regression Method)：Nếu nồng độ của mẫu được kiểm tra không rõ,Sau đó, nồng độ nguyên dịch của mẫu này là nồng độ cao nhất, pha loãng liên tục (hoặc pha loãng từ tỷ lệ nguyên dịch) 4-5 gradient nồng độ với cùng một hệ thống đệm, thực hiện phương pháp đường cong tiêu chuẩn trên.Sự khác biệt là điều chỉnh nồng độ dự kiến thành nghịch đảo của bội số pha loãng của các mẫu gradient của mỗi nồng độ (1/N yếu tố mất).Vẽ một đường thẳng phù hợp với hồi quy tuyến tính giữa các phép đo nồng độ (hoặc trung bình nồng độ tại các điểm của gradient) và tỷ lệ pha loãng tương ứng và đánh giáR²(như bản vẽ).Phương pháp này là một trong những phương pháp thường được sử dụng trong xác minh phân tích.

Tuyến tính nồng độ của mẫu microsphere tiêu chuẩn NIST hỗn hợp

• Phương pháp phục hồi theo tiêu chuẩn (Spiked Recovery Method)Tương tự với Accuracy ValidationThí nghiệm thêm tiêu chuẩn,Các bước phân tích như sau:

1. Một loạt các mẫu được đánh dấu đã được chuẩn bị bằng cách thêm nồng độ phân tích mục tiêu đã biết vào ma trận trống.

2. Các phép đo được thực hiện trên các mẫu được đánh dấu bằng cách sử dụng các phương pháp được kiểm tra, tín hiệu phát hiện được ghi lại hoặc giá trị đại lượng trực tiếp và tỷ lệ thu hồi được tính toán.

3. Xác định khoảng tuyến tính dựa trên tỷ lệ thu hồi (thường là 80% -120%) và kết quả phân tích hồi quy tuyến tính^[6]。

Điều đáng chú ý là,Có sự khác biệt giữa phạm vi tuyến tính và phạm vi phát hiện：

Ví dụ, một thiết bị có thể phát hiện nồng độ 10⁶-10⁹particles/mL của các hạt nano (phạm vi phát hiện), nhưng chỉ ở mức 2 × 10⁸-8×10⁸ Mối quan hệ tuyến tính chặt chẽ được duy trì giữa các particles/mL (khoảng tuyến tính). Khoảng tuyến tính thường bắt đầu với LOQ và kết thúc với nồng độ hoặc kích thước hạt cao nhất mà phản ứng của thiết bị không còn là tuyến tính. Trong các ứng dụng thực tế, giới hạn phát hiện và khoảng tuyến tính cùng nhau xác định phạm vi đo lường và tính phù hợp của thiết bị phân tích hạt nano. Giới hạn phát hiện thấp hơn và khoảng tuyến tính rộng hơn có nghĩa là thiết bị có thể cung cấp các phép đo đáng tin cậy trên phạm vi nồng độ và kích thước hạt rộng hơn.

Trọng lượng (Đặc biệt/Chọn lựa)

Đặc tính riêng là phương pháp phân tích khi xác định vật thể mục tiêu, có thể tránh được sự quấy nhiễu của vật chất khác hay không, từ đó xác định chính xác hoặc định lượng vật thể mục tiêu.Xác minh thuộc tính độc quyền thường là một trong những điều đầu tiên cần xem xét trong xác minh phương pháp phân tích, nó liên quan đến việc lựa chọn phương pháp phát hiện thích hợp. Xác minh đặc tính mạnh mẽ của hạt nano thường được áp dụngThí nghiệm đánh dấuPhương pháp kiểm tra nhiễu:

1. Một lượng mẫu hoặc tạp chất nhất định không nhạy cảm với phương pháp hiện tại được trộn vào ma trận mẫu cần kiểm tra, chẳng hạn như các mẫu không áp dụng phương pháp kiểm tra đó hoặc các mẫu gây nhiễu bên ngoài phạm vi phát hiện. Kiểm tra xem sự pha trộn này có ảnh hưởng đến kết quả xét nghiệm hay không bằng cách so sánh các thay đổi dữ liệu trước và sau khi thêm mẫu can thiệp. Ví dụ: một thiết bị có phạm vi phát hiện 50-200 nm, bao gồm một giải pháp hạt vi cầu hoặc protein tiêu chuẩn với kích thước hạt nhỏ hơn (20-30 nm) được biết đến trong mẫu đang được thử nghiệm để phát hiện kích thước hạt và nồng độ của mẫu có chứa và mẫu không có chất bổ sung tương ứng, do đó đánh giá xem thiết bị có phù hợp để mô tả các mẫu đó hay không.

2. Trong khi các mẫu được thử nghiệm được thêm vào một tiêu chuẩn bên trong của số lượng đã biết, các mẫu được đo, phản ứng thử nghiệm của thiết bị đối với chất tiêu chuẩn được đánh giá là phù hợp với kỳ vọng lý thuyết và xác minh rằng các phép đo phân phối sau khi trộn các hạt có kích thước khác nhau là chính xác. Ví dụ, một microsphere CRM với kích thước hạt bằng nhau (cùng nồng độ hạt) 150 nm được thêm vào mẫu exosomes (thường có kích thước hạt trong khoảng 30-150 nm) để phát hiện sự thay đổi kích thước hạt và nồng độ của mẫu sau khi thêm vào so với trước khi đánh dấu. Nếu tín hiệu tiêu chuẩn bên trong tương ứng có thể được phát hiện, đồng thời giá trị kích thước hạt trung bình của hỗn hợp sau khi đánh dấu phù hợp với giá trị trung bình kích thước hạt lý thuyết (tỷ lệ thu hồi trong phạm vi chấp nhận), giá trị nồng độ không thay đổi, thì phương pháp phát hiện này có thể được đánh giá là có đặc tính riêng đối với mẫu exosome này. Thí nghiệm này đặc biệt thích hợp để đánh giá khả năng phát hiện của thiết bị trên các mẫu hệ thống đa phân tán (polydisperse system).

Ngoài ra, các thí nghiệm độc quyền cũng có thể được so sánh bằng phương pháp trực giao (một nguyên tắc đo lường khác nhưng đã được chứng minh đầy đủ). Đồng thời, nếu nguyên lý của bản thân kỹ thuật phân tích có thể đảm bảo tính đặc hiệu cao, thì không cần kiểm chứng thực nghiệm bổ sung, chỉ cần hỗ trợ lý thuyết hợp lý.^[2]。

Mạnh mẽ(Độ bền vững)

Mạnh mẽ(còn gọi là độ bền)Phương pháp phân tích thay đổi điều kiện thí nghiệm trong phạm vi nhỏ(Chẳng hạn như nhiệt độ, pH, nồng độ thuốc thử, v.v.)Dưới đây, vẫn có thể duy trì sự ổn định và độ tin cậy của kết quả đo lường.。Nó đo lường khả năng chịu đựng của phương pháp đối với các biến động môi trường nhỏ. Ngoài ra, kiểm tra độ bền cũng có thể được sử dụng để đánh giá sự ổn định của việc chuẩn bị mẫu và tác nhân, đảm bảo rằng dữ liệu không bị ảnh hưởng bởi những thay đổi trong các yếu tố này trong suốt quá trình thử nghiệm. Nói một cách thông thường, đó là đánh giá trước "khả năng chống nhiễu" của phương pháp phát hiện, đảm bảo nó cũng có thể hoạt động bình thường trong điều kiện thử nghiệm thực tế (không lý tưởng). Kết quả kiểm tra độ bền có thể được gửi dưới dạng dữ liệu tham khảo trong giai đoạn phát triển phương pháp hoặc được cung cấp khi có yêu cầu của cơ quan quản lý.

03

Kết luận

Các thông số và thí nghiệm được phân tích ở trên không chỉ liên quan đến khả năng thích ứng của thiết bị trong các điều kiện mẫu khác nhau, mà còn bao gồm các chỉ số cốt lõi như độ chính xác, độ lặp lại và độ ổn định lâu dài của dữ liệu. Chỉ thông qua những xác minh nghiêm ngặt này mới có thể đảm bảo rằng thiết bị cung cấp sự đảm bảo đo lường tiêu chuẩn và hỗ trợ dữ liệu đáng tin cậy trong môi trường nghiên cứu và sản xuất thực tế và cung cấp cơ sở khoa học cho các nhà nghiên cứu giải thích chính xác kết quả kiểm tra.

Tài liệu tham khảo:

1. Tổng cục Quản lý giám sát thị trường nhà nước. (2020). Nguyên tắc hoạt động của Thị trường cổ phiếu Nasdaq (

Hội đồng quốc tế về sự hòa hợp các yêu cầu kỹ thuật cho dược phẩm sử dụng với con người (ICH). (2023). Xác nhận các thủ tục phân tích Q2(R2).

Cơ quan Quản lý Thực phẩm và Dược phẩm Hoa Kỳ (FDA). (2011). Quá trình xác thực: Các nguyên tắc và thực tiễn chung.

Hội đồng quốc tế về sự hòa hợp các yêu cầu kỹ thuật cho dược phẩm sử dụng với con người (ICH). ICH Q7: Hướng dẫn thực hành sản xuất tốt cho các thành phần dược phẩm hoạt động [S]. 2016.

5.USP Chương tổng quát <1058>: Điều kiện dụng cụ phân tích [S]. United States Pharmacopeia, năm 2023.

Cơ quan Quản lý Thực phẩm và Dược phẩm Hoa Kỳ (FDA). Hướng dẫn xác nhận phương pháp phân tích sinh học cho ngành công nghiệp [S]. 2018.

Video tổng hợp báo cáo tin tức dựa trên luật sử dụng hợp lý – Fair use for news reporting ((