Trường Đại học Quốc tế Hồng Bàng (Đại học TuftsCác nhà nghiên cứu đã báo cáo một thuật toán tối ưu hóa cho một EV duy nhất được đánh dấu miễn dịch huỳnh quang cho NTA-FL, làm cho việc đánh dấu và phát hiện miễn dịch túi đơn dựa trên NTA với phân bố kích thước hạt và phân tích nồng độ chính xác hơn. Thuật toán này có thể cải thiện hiệu quả độ tin cậy của kết quả phát hiện NTA, cung cấp một công cụ mạnh mẽ để nghiên cứu sâu hơn về các chức năng và cơ chế của EV.。

Trong nghiên cứu ban đầu, các nhà nghiên cứu đã phát hiện ra rằng truyền thống利用Cơ quan thuế quốc giaTiến hànhEVhuỳnh quang phân tích subtype/Phương pháp phân tán tỷ lệ ánh sáng có thể dẫn đến sai lệch dữ liệu. Thông thường, tỷ lệ diện tích được bao quanh bởi đường cong huỳnh quang (FM) so với diện tích được bao quanh bởi đường cong ánh sáng tán xạ (LSM) có thể biểu thị độ tinh khiết của EV. Nhưng các nhà nghiên cứu đã phát hiện ra trong quá trình phân tích của họ rằng tỷ lệ FM (đường màu xanh) so với LSM (đường màu đỏ) lớn hơn 100% trong các thử nghiệm 1, 2, 4 (bảng 1, hình 1), cho thấy độ tinh khiết EV lớn hơn 100%, điều này rõ ràng là không hợp lý.

1. Trong quá trình phát hiện huỳnh quang, có thể xuất hiện rất nhiều tín hiệu giả.

2. Các hạn chế kỹ thuật của hệ thống NTA khiến LSM không thể phát hiện EV rất nhỏ hoặc các hạt khác có chỉ số khúc xạ thấp.Phát hiện EV không đầy đủ trong chế độ ánh sáng tán xạ và một số dữ liệu EV không được phát hiện, làm cho diện tích LSM nhỏ hơn, dẫn đến tỷ lệ lớn hơn 100%.

Các nhà nghiên cứu cũng phát hiện ra rằng mô hình FM có đỉnh tín hiệu rõ ràng xuất hiện ở các khu vực dưới 50 nm, trong khi mô hình LSM tương phản, tín hiệu của nó dưới 50 nm về cơ bản bị suy giảm thành 0, đây có thể là một trong những nguyên nhân dẫn đến tỷ lệ lớn hơn 100%.Cụ thể, điều này có thể là do các phân tử huỳnh quang tự do không được loại bỏ đầy đủ và các protein tự do trong hệ thống được đánh dấu bởi các phân tử huỳnh quang, gây ra tín hiệu huỳnh quang tăng cường trong các phân vùng kích thước nhỏ.

Để giải quyết tình trạng này, các nhà nghiên cứu đã đề xuất hai phương pháp đánh giá:

Phương pháp đầu tiênĐó là phương pháp tính toán truyền thống, tức là tính toán số lượng hạt lớn hơn 50 nm trong mẫu và so sánh số lượng hạt trong FM và LSM để đưa ra tỷ lệ giữa FM và LSM. (Hình 2b, c)

Phương pháp thứ haiĐó là phương pháp tính toán được tối ưu hóa để tính toán các vùng chồng chéo giữa các đường cong phân bố kích thước hạt thu được bằng cả hai phương pháp và so sánh khu vực này với tổng số hạt lớn hơn 50 nanomet trong LSM để tạo ra tỷ lệ vùng chồng chéo. (Hình 2D)

Trong quá trình nghiên cứu, các nhà nghiên cứu nhấn mạnh sự lựa chọn kích thước hạt của họ. Để phân tích EV chính xác hơn, các nhà nghiên cứu thu hẹp phạm vi phân tích xuống50-200nmLý do tại sao phạm vi này được chọn là bởi vìHầu hết các kích thước EV nằm trong phạm vi nàyHơn nữa,LSM có khả năng phát hiện hạn chế các hạt nhỏ hơn 50 nanomet, và các hạt lớn hơn 200 nanomet có thể không phải là EV. Do đó, thu hẹp phạm vi phân tích xuống50-200Nano có thể loại trừ hiệu quả các loại hạt khác, cải thiện độ chính xác của kết quả phân tích。

Hình 2 Sơ đồ thuật toán đánh dấu miễn dịch dựa trên NTA

B5-05=giá trị thông số Kd, (cài 2)

NanoCoulter NanoGranular Meter Thông quaNguyên tắc Kurt, phá vỡ giới hạn của nguyên tắc quang học, có thể phân tích chính xác từng hạt quá lỗ, nhận ra ý nghĩa thực sự của việc phát hiện hạt đơn, phân phối rộng rãi kích thước hạtHệ phân tánCác mẫu có kết quả đo tốt hơn. Và không bị ảnh hưởng bởi chỉ số khúc xạ của mẫu, độ hấp thụ và các tính chất quang học khác, dữ liệu không phù hợp, trạng thái mẫu phản ứng chân thực nhất.