Tế bào gốc trung mô(hUC-MSC) là một loại tế bào gốc có khả năng phân biệt đa năng được chiết xuất từ dây rốn của trẻ sơ sinh. Tế bào gốc trung mô có nguồn gốc từ dây rốn không chỉ duy trì các đặc tính sinh học của tế bào gốc trung mô (dấu hiệu kháng nguyên bề mặt, có khả năng phân biệt thành tế bào xương, sụn và tế bào mỡ), mà còn an toàn hơn, nguyên thủy hơn so với các tế bào gốc trung mô có nguồn gốc khác, khả năng tăng sinh, biệt hóa và điều hòa miễn dịch của tế bào mạnh hơn.
Ngoài ra, tế bào gốc đầy đủ giữa dây rốn cũng có các đặc điểm như lấy vật liệu thuận tiện và dễ phân tách, miễn dịch thấp, không có vấn đề đạo đức hạn chế, số lượng tế bào có sẵn nhiều hơn, có thể đạt được sản xuất tiêu chuẩn hóa quy mô lớn và có triển vọng ứng dụng lâm sàng rộng lớn. Sản phẩm này trải qua kiểm soát chất lượng nghiêm ngặt và thử nghiệm để đảm bảo tính an toàn và hiệu quả của nó.
(1) khi mật độ tế bào đạt 80% -90% có thể được truyền lại (lưu ý rằng các tế bào không thể quá dày đặc, nếu không sẽ dễ dàng phân biệt), loại bỏ nuôi cấy thanh lọc, sử dụng DPBS không chứa canxi và magiê để làm sạch các tế bào 1-2 lần;
(2) Thêm 1 mL enzyme tụy tái tổ hợp trong chai nuôi cấy, cho phép dịch tiêu hóa thấm vào tất cả các tế bào, đặt trong một môi trường 37 ℃ để tiêu hóa trong 1-3 phút, quan sát dưới kính hiển vi cho đến khi hầu hết các tế bào tròn và rơi ra (tùy thuộc vào tình trạng tế bào).
(3) Thêm vào ống ly tâm vô trùng, ly tâm 1000rpm 5 phút, bỏ vào môi trường MSC 3ml để chấm dứt tiêu hóa. Nhẹ nhàng đánh đều, khử nước sạch, bổ sung 1 - 2 ml môi trường MSC rồi thổi đều.
(4) Di truyền theo tỷ lệ 1: 3 hoặc 1: 4, hoặc sau khi đếm tế bào được tiêm vào chai nuôi cấy mới với nồng độ 5-8 × 103cells/cm2, sau khi bổ sung khối lượng tương ứng của môi trường MSC, được đặt ở 37 ° C, 5% CO2 nuôi cấy.
(5) Cứ 2 - 3 ngày thay dịch một lần, bồi dưỡng đến 2 - 4 ngày đợi mật độ tăng trưởng của tế bào đạt khoảng 80%, tiến hành thao tác truyền đời hoặc đông lạnh tiếp theo.
Thời gian tiêu hóa: Quá trình tiêu hóa enzyme tụy cần được kiểm soát trong khoảng 1 phút, tránh tiêu hóa quá mức dẫn đến tổn thương tế bào.
Mật độ tiêm chủng: truyền theo tỷ lệ 1:3 đến 1:4 theo diện tích cơ sở, tránh quá dày hoặc quá loãng.
Lựa chọn thế hệ: Nên sử dụng các tế bào thế hệ thấp như thế hệ P2 để đảm bảo hiệu quả thí nghiệm.
Môi trường đặc biệt: Sử dụng môi trường đặc biệt có chứa các yếu tố tăng trưởng để thúc đẩy sự nhân lên và biệt hóa tế bào.