I. Lỗi liên quan đến thiết bị tổng hợp gen 48 kênh:

1. Lỗi hệ thống mẫu

Độ chính xác pipet dao động:

Có thể có sự khác biệt giữa bơm pipet hoặc van cho các kênh khác nhau, dẫn đến sự không nhất quán trong việc bổ sung mẫu (chẳng hạn như phân phối monomer cơ bản không đồng đều).

Sau khi sử dụng lâu dài, các bộ phận pipet bị mòn hoặc bị tắc, gây ra độ lệch thể tích.

Ô nhiễm chéo:

Không đủ độ kín giữa các kênh dẫn đến dư lượng chất lỏng hoặc khuếch tán các chất dễ bay hơi, gây ô nhiễm cơ sở hoặc enzyme.

2. Lỗi kiểm soát nhiệt độ

Sự khác biệt nhiệt độ của hệ thống phản ứng:

Độ đồng đều nhiệt độ của mô-đun sưởi 48 kênh là không đủ, một số vị trí lỗ có nhiệt độ cao hoặc thấp, ảnh hưởng đến hiệu quả mở rộng.

Tốc độ làm nóng/làm mát không nhất quán, dẫn đến phản ứng PCR hoặc kết nối không đồng bộ.

Áp suất nắp nóng không đồng đều:

Nắp nhiệt không tiếp xúc chặt chẽ với tấm phản ứng, và một số lỗ bốc hơi nghiêm trọng, làm thay đổi thể tích của hệ thống phản ứng.

3. Phát hiện lỗi hệ thống

Độ lệch phát hiện huỳnh quang/hấp thụ:

Sự khác biệt về độ nhạy của máy dò quang học trong các kênh khác nhau dẫn đến phán đoán sai về hiệu quả tổng hợp.

nhiễu tiếng ồn nền (chẳng hạn như làm nguội huỳnh quang hoặc tán xạ), ảnh hưởng đến độ chính xác của giám sát thời gian thực.

4. trục trặc cơ học

Tách hạt từ hoặc dao động trộn đều không đều:

Sự khác biệt về cường độ từ trường của mô-đun từ, dẫn đến hiệu quả thu hồi hạt từ khác nhau, ảnh hưởng đến hiệu quả giặt hoặc tinh khiết.

Tần số dao động hoặc thời gian không phù hợp, dẫn đến hỗn hợp phản ứng không đầy đủ.

Lỗi thao tác và quy trình của 48 máy tổng hợp gen:

1. Thiết lập chương trình sai

Độ lệch đầu vào tham số:

Chu kỳ tổng hợp (chẳng hạn như thời gian kéo dài, nhiệt độ biến tính) được thiết lập không đúng cách, dẫn đến tăng độ dài mảnh hoặc tỷ lệ sai khớp.

Các tham số không được điều chỉnh theo loại mẫu, chẳng hạn như hàm lượng GC cao, cấu trúc bậc hai.

Lỗ hổng kịch bản tự động:

Các quy trình nhiều bước (ví dụ: cắt, nối, tinh chế) được liên kết không đúng cách, dẫn đến phản ứng bị gián đoạn hoặc xử lý quá mức.

2. Vấn đề tải mẫu

Thứ tự mẫu hoặc vị trí sai:

Việc bổ sung nhân tạo không được thực hiện theo thông số kỹ thuật (chẳng hạn như đầu súng không được thay thế), ô nhiễm DNA ngoại lai được giới thiệu.

Sự khác biệt về khối lượng vật liệu ban đầu trong các kênh khác nhau (chẳng hạn như nồng độ mồi khác nhau), dẫn đến hiệu quả tổng hợp không đồng đều.

3. Hiệu quả thanh lọc và tái chế thấp

Mất tinh khiết từ hạt hoặc màng silicone:

Quá trình tinh chế mất đi sự hấp phụ của các mảnh DNA nhỏ, chẳng hạn như oligonucleotide ngắn, làm giảm sản lượng.

Rửa không hoàn thiện *, với muối dư hoặc tạp chất ức chế phản ứng tiếp theo.