Một,Máy phân tán ánh sáng laser đa góc wyattChuẩn bị trước khi test
Chuẩn bị dung môi
Hệ thống pha nước: Sử dụng nước siêu tinh khiết hoặc dung dịch muối công thức (khoảng 1L), thêm chất ức chế NaN₃0,02%, lọc bằng màng lọc 0,22μm.
Hệ thống pha hữu cơ: sử dụng dung môi cấp HPLC, cũng được lọc bằng màng lọc 0,22 μm (thuốc thử nhập khẩu được xử lý theo điều kiện thực tế).
Chuẩn bị mẫu
Nồng độ công thức theo phạm vi trọng lượng phân tử (vòng định lượng 100 μL):
Trọng lượng phân tử~1000kDa: 0,5-1mg/mL
Trọng lượng phân tử~100kDa: 1-2mg/mL
Trọng lượng phân tử~10kDa: 3-5mg/mL
Trọng lượng phân tử~5kDa: 5-10mg/mL
Các mẫu cần được lọc bằng màng lọc 0,22μm hoặc 0,45μm hoặc loại bỏ tạp chất bằng cách xử lý ly tâm, sử dụng pha chảy bất cứ khi nào có thể.
Kiểm tra dụng cụ
Đảm bảo rằng kết nối dây nguồn, công tắc nguồn và công tắc (đối với kết nối tín hiệu cáp mạng) đã được bật.
Thứ hai, khởi động thiết bị và cân bằng
Thứ tự khởi động
Mở máy bơm, hộp nhiệt độ cột (nhiệt độ cài đặt), hệ thống lấy mẫu (bộ lấy mẫu thủ công/tự động), máy dò hiển thị hoặc tia cực tím, máy dò độ nhớt, máy dò tán xạ ánh sáng laser đa góc và máy tính theo thứ tự.
Hệ thống xả và cân bằng
Bật máy bơm và xả hệ thống bằng nước siêu tinh khiết trong khoảng 5 phút (bơm purge), đóng van purge.
Sử dụng hệ thống xả pha dòng chảy được xây dựng mới nhất (hệ thống hữu cơ sử dụng pha dòng chảy trực tiếp).
Điều chỉnh tốc độ dòng chảy đến 0,1 mL/phút (nếu kết nối với bộ dò độ nhớt, cần phải đợi nó vào giao diện làm việc trước khi bật máy bơm và IP&DP đang ở trạng thái purge on).
Nếu cột GPC/SEC không được kết nối trong hệ thống, tốc độ dòng chảy có thể được điều chỉnh trực tiếp đến 0,1-1,0mL/phút (van purge của máy dò độ nhớt phải ở trạng thái "Purge On" khi không có máy dò độ nhớt).
Nếu cột GPC/SEC đã được kết nối trong hệ thống, cần tăng 0,1mL/phút làm tốc độ dòng chảy bắt đầu, tăng 0,1mL mỗi 1-2 phút và điều chỉnh tốc độ dòng chảy đến 0,4-0,5mL/phút để cân bằng đầy đủ hệ thống.
Thời gian cân bằng: hệ thống pha nước đề nghị rửa sạch và cân bằng trước một ngày, bắt đầu thử nghiệm vào ngày hôm sau; Thời gian cân bằng hệ thống pha hữu cơ thường là 3-12 giờ.
III. Hoạt động kiểm tra và thu thập dữ liệu
Cân bằng hệ thống với Baseline Stability
Sau khi hệ thống cân bằng đầy đủ, từng bước điều chỉnh tốc độ dòng chảy đến tốc độ dòng chảy thử nghiệm.
Điều chỉnh van Purge của máy dò chênh lệch đến trạng thái "Purge Off" và về 0 khi tín hiệu ổn định.
Phương pháp vận hành Visco Star được đính kèm để ổn định đường cơ sở.
Gọi mẫu thử nghiệm
Gọi mẫu thử nghiệm tương ứng trong Astra Software (được khuyến khích sử dụng Template/Method được tạo bởi kỹ sư cài đặt).
Chọn File → New → Experiment from Template/Method → My Templates/Methods.
Chọn File → New → sample set Template/blank sequence → My Templates/method.
Lấy mẫu và thu thập dữ liệu
Van lấy mẫu được chuyển từ "load" sang trạng thái "inject", được lấy mẫu thông qua hệ thống lấy mẫu.
Phần mềm Astra tự động bắt đầu thu thập dữ liệu và sau khi hoàn thành việc thu thập dữ liệu, phần mềm dừng lại theo thời gian đã đặt hoặc dừng thủ công (Experiment → Stop).
lưu trữ dữ liệu
Sau khi thu thập dữ liệu hoàn tất, nhấp vào File → Save as..., đặt tên tệp và lưu.
Bốn,Máy phân tán ánh sáng laser đa góc wyattXử lý dữ liệu và xem báo cáo
Quy trình xử lý dữ liệu
Điều chỉnh đường cơ sở: Nhấp đúp vào Baseline, đánh dấu LS 11 (góc 90 °), điều chỉnh điểm cuối đường cơ sở, đảm bảo mức cơ sở, nhấn OK/Apply để lưu.
Xác định đỉnh: Di chuyển chuột đến điểm bắt đầu của đỉnh, nhấn và giữ nút trái để kéo đến điểm rơi của đỉnh, thả nút trái để xác định vùng đỉnh, tinh chỉnh cạnh của vùng đỉnh, nhấn OK/Apply để lưu.
Nhập và chuẩn hóa giá trị dn/dc: Nhập giá trị dn/dc và chọn normalise (không cần lặp lại thao tác nếu mẫu chuẩn<50kDa như BSA, dextran đã được chuẩn hóa trong mẫu).
Xem báo cáo: Sau khi hoàn thành các bước trên, hãy xem báo cáo để có kết quả kiểm tra.
Chỉnh sửa dụng cụ (được thực hiện thường xuyên)
Hiệu chỉnh khối lượng trễ: Hiệu chỉnh khối lượng đường ống giữa các đầu dò riêng lẻ, đảm bảo vị trí đỉnh được căn chỉnh, thường được thực hiện bởi kỹ sư lắp đặt và kết quả được lưu trong mẫu phần mềm Astra.
Hiệu chỉnh tín hiệu góc 90 ° (hiệu chỉnh toluene): Lấy hệ số hiệu chỉnh cho giá trị cường độ ánh sáng tán xạ góc 90 ° so với giá trị điện áp, được khuyến nghị hàng năm hoặc nửa năm một lần.
Hiệu chỉnh chuẩn hóa mười tám góc: Hiệu chỉnh 17 máy dò khác với góc 90 ° làm chuẩn, được thực hiện bằng cách sử dụng các sản phẩm tiêu chuẩn Rg<10nm, chẳng hạn như dextran cho 30kDa hoặc albumin huyết thanh gia súc BSA.