Bước 1:Máy tổng hợp polypeptideChuẩn bị trước khi hoạt động - Đặt nền tảng cho thành công
Kiểm tra môi trường và thiết bị
Chọn nơi khô ráo, sạch sẽ và ổn định nhiệt độ (20 ℃ ± 5 ℃) để tránh sự xáo trộn của độ ẩm, nhiệt độ cao hoặc bụi.
Đảm bảo thiết bị được lắp đặt trơn tru, điện áp nguồn, tần số phù hợp với yêu cầu của thiết bị (ví dụ: máy đo áp suất khí nén "AIR" cần 60-100psi và máy đo N₂ cần 5-10psi).
Kiểm tra bình chứa dung môi, kết nối đường ống khí chặt chẽ để ngăn chặn rò rỉ.
Chuẩn bị vật liệu và thuốc thử
Chuẩn bị các axit amin có độ tinh khiết cao, thuốc thử kích hoạt (như HBTU), dung môi (DMF, DCM) và nhựa để đảm bảo không có tạp chất.
Cân thuốc thử theo sơ đồ tổng hợp, trộn đúng tỷ lệ (chẳng hạn như axit amin dư thừa 3x cho các phản ứng khớp nối).
Thêm nhựa vào lò phản ứng, sử dụng DCM hòa tan sau khi bơm khô, sau đó rửa DMF để loại bỏ tạp chất.
Thiết lập tham số và hiệu chuẩn
Nhập chuỗi polypeptide, đặt điều kiện phản ứng (nhiệt độ, thời gian, tỷ lệ dung môi).
Ví dụ: khử bảo vệ Fmoc (20% piperidine/DMF, 5 phút × 2 lần); Phản ứng kết hợp (3 lần dư thừa axit amin, 1 giờ).
Chạy chương trình tự kiểm tra thiết bị, hiệu chỉnh nhiệt độ, áp suất, kim lấy chất lỏng và các thông số khác để đảm bảo độ chính xác của cảm biến.
Bước 2: Hoạt động quá trình tổng hợp - Phân tích các bước cốt lõi
Khởi động chương trình tổng hợp.
Bật nguồn máy tổng hợp và công tắc khí nén, khởi động chương trình cài đặt sẵn.
Thiết bị tự động hoàn thành việc khử bảo vệ (chẳng hạn như loại bỏ nhóm Fmoc), ghép nối (liên kết chéo axit amin), chu trình giặt, theo dõi nhiệt độ phản ứng, áp suất và độ pH trong suốt quá trình.
Điểm hoạt động chính
Khử bảo vệ: Sử dụng dung môi kiềm như piperidine 20%/DMF để loại bỏ nhóm bảo vệ amin, cần lặp lại 2 lần để đảm bảo triệt để.
Phản ứng khớp nối: Dung dịch axit amin được kích hoạt được tiêm vào buồng phản ứng, bổ sung DMF đến nồng độ thích hợp, khuấy trong 1 giờ để tạo thành liên kết peptide.
Rửa: Rửa bằng DMF sau mỗi bước phản ứng, loại bỏ các chất không phản ứng và các sản phẩm phụ, giảm tích tụ tạp chất.
Giám sát và điều chỉnh thời gian thực
Quá trình phản ứng được theo dõi thông qua phân tích hấp thụ UV hoặc phổ khối, đảm bảo mỗi bước diễn ra như mong đợi.
Nếu phát hiện chất lỏng phản ứng không đều, điều chỉnh tốc độ quay của máy khuấy; Nếu nhiệt độ bất thường, hãy kiểm tra vị trí của đĩa sưởi.
Bước 3: Tổng hợp hậu xử lý và bảo trì - đảm bảo sự ổn định lâu dài
Thu thập và tinh chế sản phẩm
Thêm chất lỏng nứt (ví dụ: TFA/nước/triisopropylsilane=95: 2,5: 2,5) và khuấy ở nhiệt độ phòng trong 2 giờ để tách polypeptide ra khỏi nhựa.
Lọc loại bỏ nhựa, sau khi cô đặc chất lỏng cracking kết tủa peptide thô với ether, thông qua ly tâm, rửa để có được các sản phẩm rắn.
Sử dụng sắc ký lỏng hiệu quả cao (HPLC) để tinh chế, loại bỏ tạp chất và thu được polypeptide có độ tinh khiết cao (>95%).
Máy tổng hợp polypeptideVệ sinh&Chăm sóc thiết bị
Làm sạch ngay lập tức: Ngay sau khi kết thúc quá trình tổng hợp, hãy rửa bình phản ứng, kim, đầu bơm và đường ống bằng ethanol hoặc nước khử ion để tránh các chất phản ứng còn lại ăn mòn thiết bị.
Bảo trì định kỳ: thay thế các bộ phận mòn (ví dụ: vòng đệm, kim) hàng tháng, hiệu chỉnh độ chính xác của cảm biến; Bôi trơn phần cơ khí mỗi quý, giữ cho hoạt động trơn tru.
Lưu trữ lâu dài: Nếu thiết bị không hoạt động, sau khi rửa sạch tháo dỡ và lưu trữ ở nơi khô ráo, thông gió, ngăn ngừa rỉ sét hoặc ẩm ướt.
Xử lý sự cố và ghi chép
Các vấn đề thường gặp: rò rỉ đầu bơm (thay thế vòng đệm), nhiệt độ bình phản ứng quá cao (điều chỉnh vị trí đĩa sưởi), thiết bị không thể khởi động (kiểm tra nguồn điện và bảng điều khiển).
Ghi chép và báo cáo: Ghi lại chi tiết từng bước các thông số hoạt động (liều lượng thuốc thử, thời gian phản ứng, nhiệt độ) và độ tinh khiết của sản phẩm, tạo báo cáo thử nghiệm để cung cấp cơ sở cho tối ưu hóa tiếp theo.