Máy tổng hợp DNA/RNAPhương pháp sử dụng (lấy DNA làm ví dụ) bao gồm chuẩn bị thuốc thử, đầu vào trình tự, cài đặt thông số, kiểm tra cột tổng hợp, làm sạch đường ống, giám sát quá trình tổng hợp và xử lý sản phẩm và nhiều liên kết khác, sau đây là giới thiệu chi tiết:

Chuẩn bị thuốc thử:

Kiểm tra cẩn thận lượng thuốc thử trong tất cả các chai thuốc thử trên máy tổng hợp và thay thế chúng nếu cần thiết, đặc biệt chú ý đến các dung môi được sử dụng với số lượng lớn hơn như acetonitrile.

Đảm bảo bộ chai thuốc thử và bộ chai cơ sở được niêm phong tốt, duy trì áp suất nhất định, ngăn không khí bên ngoài xâm nhập ảnh hưởng đến hiệu quả tổng hợp.

Nhập chuỗi:

Trình tự DNA được đưa vào máy tổng hợp, có thể được thực hiện thông qua phần mềm thiết kế có sự hỗ trợ của máy tính, xem xét các yếu tố như sở thích codon, cấu trúc thứ cấp và các vị trí enzyme hạn chế.

Kiểm tra các bước tổng hợp đã chọn là chính xác và đảm bảo rằng quá trình tổng hợp diễn ra theo quy trình được đặt trước.

Cài đặt tham số:

Phương pháp kết thúc được chọn, trạng thái ban đầu của thiết bị thường là TritylOffAuto, được chuyển đổi thành trạng thái kết thúc TritylOffAuto nếu nó có ý định tinh khiết oligonucleotide với kết nối nhóm 5'-DMT.

Trong Username của mỗi Post Monitor, nhập tên lưu mong muốn để quản lý và theo dõi dễ dàng hơn.

Đánh dấu mỗi chai thu thập bằng mã thay vì trình tự DNA tương ứng để dễ dàng xác định và phân loại.

Kiểm tra cột tổng hợp:

Chạy bước StartColumn để kiểm tra vị trí của từng cột, đảm bảo rằng cột tổng hợp trên máy tổng hợp ở đúng vị trí và tránh thất bại tổng hợp do độ lệch vị trí.

Kiểm tra xem dư lượng dung môi (chai chất thải) gắn vào máy tổng hợp có đầy không, ngăn ngừa tràn chất lỏng do chai chất thải quá đầy, ảnh hưởng đến môi trường tổng hợp.

Làm sạch đường ống:

Nếu bộ thu phân chia được sử dụng để thu thập chất thải từ từng bước khử bảo vệ DMT, hãy đảm bảo rằng ống nghiệm được làm sạch hoàn toàn và sạch sẽ và bộ thu phân chia được bật để đảm bảo rằng đường ống chất thải DMT dẫn đến bộ thu phân chia.

Bắt đầu chu trình, chạy chương trình bắt đầu làm sạch đường ống thuốc thử, loại bỏ tác nhân gốc và ngăn chặn sự can thiệp của tác nhân cũ vào phản ứng tổng hợp mới.

Giám sát quá trình tổng hợp:

Trong quá trình tổng hợp, tổng độ dẫn của cation DMT được giải phóng trong mỗi chu trình tổng hợp DNA có thể được xác định bằng các tế bào dòng chảy dẫn, theo dõi sự tiến triển của phản ứng tổng hợp.

Thường xuyên kiểm tra trạng thái hoạt động của máy tổng hợp để đảm bảo rằng các thông số khác nhau (như nhiệt độ, áp suất, thời gian, v.v.) nằm trong phạm vi bình thường.

　　Máy tổng hợp DNA/RNAKết thúc tổng hợp và xử lý sản phẩm:

Sau khi tổng hợp hoàn thành, lấy ra chất mang để cắt và giải bảo vệ, thông thường các đoạn DNA trong vòng 40bp cần ít nhất 2 giờ, chuỗi càng dài cần thời gian càng dài.

Các mảnh ngắn và các ion muối được loại bỏ và cải thiện độ tinh khiết của sản phẩm bằng cách sử dụng phương pháp tinh khiết thích hợp (ví dụ: OPC tinh khiết, PAGE tinh khiết, khử muối tinh khiết, HPLC tinh khiết, vv).

Xác minh trình tự DNA tinh khiết được thực hiện để đảm bảo trình tự của nó phù hợp với mong đợi.