Máy đo protein nucleic là thiết bị quan trọng trong phòng thí nghiệm sinh học phân tử để định lượng nhanh nồng độ axit nucleic (DNA/RNA) và protein. Hoạt động chính xác không chỉ đảm bảo độ chính xác của dữ liệu mà còn kéo dài tuổi thọ của thiết bị. Bài viết này sẽ giới thiệu các thông số kỹ thuật hoạt động cơ bản, các câu hỏi thường gặp và các kỹ thuật thực tế của máy đo protein nucleic cho những người mới trong phòng thí nghiệm.
I. Chuẩn bị trước khi hoạt động
1. Hiệu chuẩn dụng cụ
- Hiệu chuẩn trống: Trước mỗi lần sử dụng, cần thực hiện hiệu chuẩn trống bằng nước siêu tinh khiết hoặc dung dịch đệm như dung dịch đệm TE để loại bỏ nhiễu nền.
- Bảo trì định kỳ: Nếu dụng cụ không được sử dụng trong một thời gian dài, cần hiệu chỉnh lại và kiểm tra xem nguồn sáng, máy dò có bình thường không.
2. Chuẩn bị mẫu
- Mẫu axit nucleic: Đảm bảo không có hạt hoặc tạp chất, nếu cần thiết, tiến hành ly tâm (12.000 vòng/phút, 1-2 phút) để loại bỏ tạp chất.
- Mẫu protein: Tránh chất khử nhiễm nồng độ cao (như SDS) trong trường hợp ảnh hưởng đến phát hiện hấp thụ.
3. Chọn chế độ phát hiện phù hợp
Phương pháp hấp thụ tia cực tím (như NanoDrop): thích hợp để xác định nhanh DNA/RNA (260nm) và protein (280nm).
- Phương pháp huỳnh quang (như Qubit): thích hợp để phát hiện nồng độ axit nucleic thấp, độ nhạy cao hơn.
II. Quy trình vận hành tiêu chuẩn
1. Khởi động và khởi tạo
- Mở dụng cụ, làm nóng trước 5-10 phút (một số thiết bị cần làm nóng lâu hơn).
- Chọn chế độ phát hiện tương ứng (axit nucleic/protein).
2. Lấy mẫu và phát hiện
1. Nền tảng phát hiện sạch: Lau bề mặt phát hiện bằng cách nhúng một lượng nhỏ nước siêu tinh khiết hoặc ethanol bằng giấy không bụi để tránh ô nhiễm dư.
2. Thêm mẫu:
- Thiết bị loại NanoDrop: nhỏ giọt với mẫu 1-2 µL trên bàn phát hiện, thả cánh tay phát hiện.
- Dụng cụ đo màu: Đảm bảo đĩa đo màu sạch sẽ, thêm mẫu vừa phải (thường là 50-200 µL).
3. Đọc: Nhấp vào "Measure" để ghi lại dữ liệu.
4. Làm sạch: Sau khi phát hiện, ngay lập tức làm sạch bàn thử nghiệm bằng nước siêu tinh khiết hoặc ethanol để ngăn chặn sự kết tinh của mẫu ảnh hưởng đến việc phát hiện tiếp theo.
3. Ghi chép và phân tích dữ liệu
- Đánh giá độ tinh khiết axit nucleic:
- DNA: A260/A280 ≈ 1,8 (DNA tinh khiết), A260/A230>2,0 (không gây ô nhiễm).
- RNA: A260/A280≈2.0 (RNA tinh khiết).
- Nếu tỷ lệ bất thường (ví dụ: A260/A280<1,6), nó có thể gợi ý nhiễm protein hoặc phenol.
Xác định protein: Khi sử dụng phương pháp Bradford hoặc BCA, bạn cần tạo đường cong tiêu chuẩn.
III. Các vấn đề và giải pháp thường gặp
Kết quả phát hiện bất thường (ví dụ: tỷ lệ A260/A280 thấp)
- Nguyên nhân có thể: ô nhiễm protein hoặc dung môi hữu cơ.
- Giải pháp: làm sạch lại mẫu hoặc chuyển sang định lượng huỳnh quang (như Qubit).
Lỗi thiết bị (ví dụ "Sampletooconcentrated")
- Nguyên nhân có thể: nồng độ mẫu vượt quá phạm vi phát hiện.
- Giải pháp: Kiểm tra lại sau khi pha loãng mẫu.
3. trôi cơ bản hoặc không ổn định
- Nguyên nhân có thể xảy ra: ô nhiễm bảng phát hiện hoặc lão hóa nguồn sáng.
- Giải pháp: Làm sạch bàn kiểm tra hoặc liên hệ với kỹ sư để hiệu chỉnh nguồn sáng.
IV. Kỹ năng thực tế
1. Tránh nhiễu bong bóng: đảm bảo các giọt chất lỏng còn nguyên vẹn và không có bong bóng khi lấy mẫu, nếu không sẽ dẫn đến dao động hấp thụ.
2. Kiểm tra mẫu nồng độ thấp:
- Định lượng bằng phương pháp huỳnh quang (như Qubit), nhạy hơn phương pháp UV.
- Nếu phải sử dụng phương pháp tia cực tím, có thể tăng thể tích mẫu thích hợp (ví dụ: 2µL → 3µL).
3. Đề xuất lưu trữ dài hạn:
- Bật ít nhất một lần một tuần để ngăn chặn độ ẩm của quang học.
- Bảo quản trong môi trường khô ráo, không bụi.