Cột sắc ký ngược có thể gặp nhiều lỗi trong quá trình sử dụng, đây là giải pháp cho những lỗi này:
1. tăng áp lực bất thường
1. Chặn tấm sàng
- Hiệu suất: Áp suất cột tăng hoặc dao động đáng kể.
- Giải pháp: Tháo tấm sàng, đặt trong 10% axit nitric loãng làm sạch bằng siêu âm trong 10 phút, lắp lại sau khi rửa sạch bằng nước tinh khiết. Cũng có thể rửa ngược bằng dung môi mạnh. Chú ý tránh va chạm áp suất cao.
2. Chất độn ô nhiễm
- Hiệu suất: Chất độn đầu cột được bao phủ bởi các chất giữ lại mạnh, dẫn đến giảm hiệu quả cột.
- Giải pháp: tháo khớp cột, đào chất độn ô nhiễm bề mặt, thay thế bằng chất độn mới và nén chặt. Phương pháp này có thể khôi phục một phần hiệu ứng cột, nhưng khó đạt được cấp độ cột mới.
3. Kết quả kết tinh muối
- Hiệu suất: Khi pha chảy chứa dung môi hữu cơ nồng độ cao, tinh thể muối đệm chặn đường chảy.
- Giải pháp: hòa tan muối với nồng độ methanol/nước thấp trước khi chuyển sang pha hữu cơ nồng độ cao.
Thứ hai, hiệu ứng tách giảm
1. Sự bất thường của núi
- Kéo/ngã ba: do đầu cột sụp đổ hoặc khối lượng chết tăng lên, cần phải lấp đầy và san lấp cùng mô hình. Nếu do ô nhiễm kim loại, hãy chuyển sang cột silicon có độ tinh khiết cao.
- Đỉnh ma: Các chất ô nhiễm còn lại chảy ra ở nhiệt độ cao và có thể được loại bỏ bằng cách tăng cột sắc ký nướng ở nhiệt độ cuối cùng.
2. Giảm hiệu quả cột
- Nguyên nhân: mất pha cố định hoặc silicone hòa tan.
- Giải pháp: Tối ưu hóa pha lỏng pH (khuyến nghị 2~9), tránh điều kiện kiềm đẩy nhanh quá trình thủy phân pha liên kết.
III. Thời gian giữ trôi
1. Không đủ cân bằng: ít nhất thông qua 10~20 lần cân bằng khối lượng cột sau khi thay thế pha dòng chảy.
2. Sụp đổ kỵ nước: C18 cột hoạt động pha nước dài hạn có thể gây ra lỗ chân lông co lại, cần tiêm 5% phục hồi pha hữu cơ.
IV. Chiến lược bảo trì phòng ngừa
1. Quy trình hoạt động đặc tả
- Tránh thay đổi áp suất đột ngột, van mở cần chậm.
- Chuyển đổi pha chảy yêu cầu chuyển đổi gradient, cấm chuyển trực tiếp từ pha hữu cơ sang pha nước tinh khiết.
2. Làm sạch sâu thường xuyên
- Rửa thường xuyên: rửa lần lượt với 95% nước - 5% methanol → methanol nguyên chất → isopropyl alcohol, mỗi dung môi ít nhất 10 lần thể tích cột
- Chất gây ô nhiễm cứng đầu: dư lượng protein chọn DMSO, tinh bột được rửa sạch bằng nước.
3. Tối ưu hóa điều kiện lưu trữ
- Khi sử dụng lâu dài, cột chứa đầy methanol hoặc acetonitrile, thắt chặt khớp để ngăn khô [^2^]. Không để lại bộ đệm qua đêm.
Việc giải quyết sự cố cột sắc ký ngược đòi hỏi sự kết hợp của rửa vật lý, tái tạo hóa học và các thông số kỹ thuật hoạt động. Ưu tiên loại trừ các yếu tố không có nguồn gốc cột (chẳng hạn như tắc nghẽn thiết bị) và tái nhắm mục tiêu giải quyết vấn đề của cột sắc ký. Thiết lập nhật ký bảo trì hoàn chỉnh, ghi lại từng điều kiện xả, thay đổi áp suất và kết quả thử nghiệm có thể kéo dài đáng kể tuổi thọ của cột.