từĐội ngũ của Chae Hairong tại Bệnh viện trực thuộc thứ hai của Đại học Y Quảng ChâuBáo Đại học Đông y Quảng Châu đã công bố đề tàiTài liệu nghiên cứu "Ảnh hưởng của Sâm Linh Bạch Thuật Tán trên kháng insulin, tình trạng viêm ở chuột bị hội chứng chuyển hóa". Sử dụng chuột SD làm đối tượng thí nghiệm, nghiên cứu đã xây dựng mô hình chuột mắc hội chứng chuyển hóa (Metabolic Syndrome, MS) bằng cách sử dụng phương pháp cho ăn thức ăn giàu chất béo và đường, quan sát hiệu quả điều trị của bạch phẫu Sâm Linh ở chuột MS và khám phá cơ chế hoạt động của nó.

Tóm tắt

mạc đường ruột muqueuses digestives (MS) Tác dụng và cơ chế điều trị ở chuột.

[Phương pháp] sẽ40 con chuột được chia thành các nhóm bình thường (10) và các mô-đun (30). Chuột tạo mô-đun xây dựng mô hình MS bằng cách sử dụng phương pháp cho ăn thức ăn giàu chất béo, đường và muối. 21 con chuột MS thành công được chia ngẫu nhiên thành nhóm mô hình (7 con), nhóm thuốc Đông y (7 con), nhóm thuốc Tây (7 con), nhóm bình thường đưa vào 9 con chuột. Tổ thuốc Đông y cho sâm linh bạch thuật tán thủy sắc dịch rót dạ dày, tổ thuốc Tây cho dung dịch nước muối sinh lý metformin hydrochloride rót dạ dày, tổ bình thường và tổ mô hình cho nước muối sinh lý thể tích rót dạ dày, thời gian điều trị là 4 tuần. Sau khi kết thúc dùng, kiểm tra khối lượng cơ thể chuột, chu vi bụng, huyết áp tâm thu (SBP), huyết áp tâm trương (DBP), đường huyết lúc đói (FPG), insulin (FINS), tổng cholesterol (TC), triglyceride (TG), cholesterol lipoprotein mật độ thấp (LDL-C), cholesterol lipoprotein mật độ cao (HDL-C), axit béo (FFA), tính toán chỉ số kháng insulin (HOMA-IR), chỉ số béo phì, chỉ số Lee's được đánh giá bởi mô hình ổn định trạng thái; Phân tích miễn dịch liên kết enzyme (ELISA) phát hiện yếu tố hoại tử khối u huyết thanh alpha (TNF-alpha), interleukin 1 (IL-1), interleukin 8 (IL-8) ở chuột; Phương pháp phản ứng chuỗi polymerase định lượng thời gian thực (QPCR) phát hiện protein thụ thể giống NOD 3 (NLRP3), thụ thể giống Toll 4 (TLR4), biểu hiện mRNA của yếu tố phiên mã hạt nhân κB (NF-κB); Sự thay đổi bệnh lý của gan được quan sát bằng phương pháp nhuộm Sumulin-Erython (HE).

[Kết quả] So với nhóm bình thường, nhóm mô hình khối lượng cơ thể chuột, vòng bụng, chỉ số béo phì,Chỉ số Lee's, SBP, DBP, FPG, FINS, TC, TG, LDL-C, FFA, HOMA-IR, TNF-alpha, IL-1, IL-8 nước tăng trung bình, HDL-C giảm, gan NLRP3, TLR4, NF-κB mRNA biểu hiện tăng trung bình, kết quả nhuộm HE cho thấy thoái hóa mỡ gan và xâm nhập tế bào viêm; Tất cả các chỉ số trên trong nhóm thuốc Đông y đã được cải thiện so với nhóm mô hình (P<0,05) và sự khác biệt không có ý nghĩa thống kê so với nhóm thuốc Tây (P>0,05).

[Kết luận] Sâm linh bạch thuật tán có thể cải thiệnRối loạn chuyển hóa glycolipid, kháng insulin, giảm thoái hóa mỡ gan và xâm nhập tế bào viêm, cơ chế có thể liên quan đến việc ức chế sự biểu hiện của các yếu tố viêm TNF-alpha, IL-1, IL-8 và các gen liên quan đến phản ứng viêm NLRP3, TLR4, NF-κB mRNA, do đó làm giảm tình trạng viêm.

Thí nghiệmVật liệu&dụng cụ

Động vật thí nghiệm：

40 con chuột SD đực 6 tuần tuổi SPF với khối lượng cơ thể (180 ± 20) g

Thuốc：Sâm linh bạch thuật tán bởi đảng sâm12 g、 Bạch thuật 12 g, Phục linh 12 g, Cam thảo nướng 12 g, Khoai lang 12 g, Đậu lăng xào 9 g, Coix 6 g, Hạt cát 6 g, Hạt sen thịt 6 g, Cam cuống 6 g, Trần bì 6 g。Viên nén Metformin Hydrochloride

thức ăn chăn nuôi：Thức ăn cơ bản và thức ăn muối có hàm lượng chất béo cao

Thuốc thử chính：

thuốc nhét hậu môn suppositoires (FINS) Bộ xét nghiệm hấp phụ miễn dịch liên kết enzyme (ELISA) Bộ dụng cụ tổng lượng cholesterol (TC) Bộ dụng cụ triglyceride (TG) Bộ dụng cụ cholesterol lipoprotein mật độ thấp (LDL-C) Bộ dụng cụ cholesterol lipoprotein mật độ cao (HDL-C)、mạc đường ruột muqueuses digestives (FFA) ELISA Kit Yếu tố hoại tử khối u α (TNF-α) ELISA Kit Interleukin 1 (IL-1) ELISA Kit Interleukin 8 (IL-8) ELISA Kit、TRIzol Total RNA Extraction Kit,HiScript II U+One Step qRT-PCR,Bộ dụng cụ tổng hợp chuỗi cDNA

Dụng cụ chính

Ứng dụng Biosystems PCR StepOnePlus ™ Hệ thống PCR định lượng huỳnh quang thời gian thực、Máy quang phổ UV-5100 UV Visible, Máy ly tâm đông lạnh tốc độ cao C5080R、Cân điện tử BSA224S、Máy đo huyết áp đuôi chuột IITC MRBP

Máy đo huyết áp đuôi chuột IITC MRBP

Phương pháp và quy trình thử nghiệm

Xây dựng mô hình động vật

Sau khi 40 con chuột được cho ăn thích nghi trong 7 ngày, chúng được chia ngẫu nhiên thành các nhóm bình thường (10) và mô-đun (30), tất cả được cho ăn riêng trong lồng. Chuột nhóm bình thường được cho ăn thức ăn cơ bản, chuột nhóm làm khuôn được cho ăn thức ăn gia súc muối cao đường cao chất béo cao. Tất cả chuột được tự do uống nước trong 12 tuần.

Tiêu chuẩn xác định thành công khuôn mẫu

Sau 12 tuần để xác định sự thành công của việc tạo khuôn theo các tiêu chí sau: ① Khối lượng cơ thể, ② Đường huyết lúc đói (FPG), ③ Huyết áp tâm thu (SBP) hoặc huyết áp tâm trương (DBP), ④ TG cao hơn mức trung bình của chuột trong nhóm bình thường+1,4 lần độ lệch tiêu chuẩn, HDL-C thấp hơn mức trung bình của chuột trong nhóm bình thường -1,4 lần độ lệch tiêu chuẩn, trên cơ sở đầy đủ của ① Đáp ứng bất kỳ 2 mục nào trong ③ có thể đánh giá thành công của việc tạo khuôn MS. Cuối tuần thứ 12, nhóm làm khuôn chết 1 và 8 con không thành công trong việc loại bỏ, nhóm bình thường 1 con có mức insulin quá cao để loại bỏ.

Phân nhóm và quản lý

Chế tạo khuôn thành công21 con chuột MS được chia ngẫu nhiên thành nhóm mô hình (7), nhóm y học cổ truyền Trung Quốc (7), nhóm thuốc tây (7), và nhóm bình thường 9 là nhóm bình thường. Theo phương pháp chuyển đổi liều thuốc giữa chuột và người, chuột trong nhóm y học cổ truyền Trung Quốc được cho uống dung dịch sắc nước giải phẫu bạch sâm (liều thô 10 g · kg ⁻U · d ⁻U) vào dạ dày, chuột trong nhóm thuốc tây được cho dung dịch muối sinh lý metformin hydrochloride (liều 105 mg · kg ⁻U · d ⁻U) vào dạ dày, chuột trong nhóm bình thường và nhóm mẫu được cho dung dịch muối sinh lý bằng nhau vào dạ dày trong 4 tuần liên tục.

Thu thập mẫu vật

Nhịn ăn sau liều cuối cùng không được uống nước12 h， Sau khi gây mê tiêm celiac, máu được lấy từ động mạch chủ bụng sau khi mổ qua đường giữa bụng 10 mL, ly tâm 3000 r/phút (bán kính ly tâm là 16 cm), lấy chất lỏng trong, -80 ℃ để bảo quản để đo. Mô mỡ tuần thận đôi của chuột được lấy, cân khối lượng và ghi lại. Mô gan chuột được lấy, -80 ° C để bảo quản để kiểm tra.

Quan sát tình trạng chung và phát hiện chỉ số

Ghi lại trạng thái tinh thần, hoạt động, lượng nước tiểu, tóc và nhiều hơn nữa ở chuột. Cân điện tử đo khối lượng cơ thể chuột; Thước mềm đo chu vi bụng và chiều dài cơ thể của chuột; Máy đo huyết áp không xâm lấn đo huyết áp động mạch đuôi chuột; Tính toánChỉ số Lee's=khối lượng cơ thể (g) × 1000/chiều dài cơ thể (cm); Chỉ số béo phì=khối lượng mỡ thận (g)/khối lượng cơ thể (g) × 100%. Máy đo đường huyết phát hiện FPG; Phương pháp ELISA phát hiện hàm lượng FINS, FFA, TNF-alpha, IL-1, IL-8 trong huyết thanh chuột; Máy phân tích sinh hóa phát hiện nồng độ TC, TG, LDL-C, HDL-C trong huyết thanh chuột.

Phương pháp QPCR phát hiện biểu hiện mRNA

lấy mô gan,Tổng RNA được chiết xuất bằng phương pháp TRIzol và phiên mã ngược tổng hợp cDNA để thực hiện phản ứng PCR định lượng huỳnh quang. Điều kiện phản ứng: 95 ℃ tiền biến tính 30 s; 95 ℃ biến tính 5 s, 60 ℃ ủ 30 s, tổng cộng 40 chu kỳ. Dẫn được tổng hợp bởi Quảng Châu Taisheng Biotechnology Co., Ltd. Số lượng biểu hiện gen cho từng mục đích được tính toán bằng cách sử dụng định lượng tương đối 2⁻ΔCt.

HE nhuộm quan sát sự thay đổi bệnh lý của mô gan

Cắt lát parafin mô gan để mất sáp vào nước. Cắt lát để nhuộm summarin3 ~ 8 min， Nước máy rửa, 1% hydrochloride cồn phân hóa trong vài giây, nước máy rửa, 0,6% amoniac trở lại màu xanh, nước chảy rửa, vào màu đỏ nhuộm trong 1~3 phút. Mất nước. Kính hiển vi, phân tích thu thập hình ảnh.

Kết quả thí nghiệm

So sánh trạng thái chung

Nhóm chuột bình thường lông dày, màu sắc sáng bóng, hoạt bát hiếu động, tinh thần sung mãn, phản ứng linh mẫn, ăn uống bình thường, bài tiết không có mùi lạ; Bộ lông chuột tổ mô hình thưa thớt, màu sắc tối tăm, tinh thần uể oải, phản ứng chậm chạp, mệt mỏi lười biếng, ăn uống tăng lên, bài tiết rõ ràng có mùi lạ; Tóc, tinh thần, phản ứng, ăn uống và bài tiết của chuột trong nhóm thuốc Đông y và nhóm thuốc Tây đều tốt hơn so với nhóm mô hình.

Chỉ số béo phì và so sánh huyết áp

So sánh với nhóm bình thường, nhóm mô hình chất lượng cơ thể chuột, vòng bụng, chỉ số béo phì,Chỉ số Lee's, SBP và DBP đều tăng (P<0,05); So với nhóm mô hình, các chỉ số trên chuột ở nhóm thuốc Đông y và thuốc Tây y đều giảm (P<0,05); So sánh giữa nhóm thuốc Đông y và nhóm thuốc Tây, sự khác biệt về chỉ số trên không có ý nghĩa thống kê (P>0,05).

So sánh các chỉ số chuyển hóa đường

So sánh với nhóm bình thường, chuột trong nhóm mô hìnhFPG, FINS, HOMA-IR đều tăng (P<0,05); So sánh với nhóm mô hình, giảm FPG, FINS, HOMA-IR ở chuột ở cả nhóm thảo dược Trung Quốc và nhóm thuốc tây (P<0,05); So sánh nhóm thuốc Đông y và nhóm thuốc Tây, sự khác biệt không có ý nghĩa thống kê (P>0,05).

So sánh các chỉ số chuyển hóa lipid

So sánh với nhóm bình thường, huyết thanh chuột của nhóm mô hìnhTC, TG, LDL-C, FFA tăng trung bình nước (P<0,05), giảm HDL-C (P<0,05); Giảm trung bình TC, TG, LDL-C, FFA nước (P<0,05) và tăng nồng độ HDL-C (P<0,05) ở chuột trong nhóm thảo dược Trung Quốc và thuốc tây so với nhóm mô hình; So sánh nhóm thuốc Trung Quốc và nhóm thuốc Tây, sự khác biệt về nồng độ TC, TG, LDL-C và FFA trong huyết thanh không có ý nghĩa thống kê (P>0,05).

So sánh các chỉ số viêm huyết thanh

So sánh với nhóm bình thường, huyết thanh chuột của nhóm mô hìnhTăng TNF-alpha, IL-1, IL-8 (P<0,05); So với nhóm mô hình, nồng độ TNF-alpha, IL-1, IL-8 trong huyết thanh ở chuột trong nhóm thảo dược Trung Quốc và thuốc tây đều giảm (P<0,05); So sánh nhóm thuốc Đông y và nhóm thuốc Tây, sự khác biệt không có ý nghĩa thống kê (P>0,05).

GanSo sánh biểu hiện mRNA NLRP3, TLR4, NF-κB

So sánh với nhóm bình thường, gan chuột trong nhóm mô hìnhTăng trung bình nước biểu hiện mRNA NLRP3, TLR4, NF-κB (P<0,05); So sánh với nhóm mô hình, giảm trung bình biểu hiện mRNA ở trên trong nước ở chuột trong nhóm y học cổ truyền Trung Quốc và nhóm thuốc tây (P<0,05); So sánh nhóm thuốc Đông y và nhóm thuốc Tây, sự khác biệt không có ý nghĩa thống kê (P>0,05).

So sánh những thay đổi bệnh lý mô gan

Cấu trúc dây gan của chuột trong nhóm bình thường là rõ ràng và các tế bào gan được sắp xếp chặt chẽ; Nhóm mô hình tế bào gan chuột thoái hóa chất béo rộng, sưng tế bào, đầy bong bóng lipid, xâm nhập tế bào viêm; Cả nhóm thuốc Đông y và nhóm thuốc Tây đều giảm thoái hóa mỡ, xâm nhập tế bào viêm. Không có sự khác biệt rõ rệt giữa nhóm thuốc Đông y và nhóm thuốc Tây về mức độ nhiễm mỡ, tế bào viêm.

Kết luận&Thảo luận

thuốc nhét hậu môn suppositoires (MS) bao gồm huyết áp cao, lượng đường trong máu cao, lipid bất thường và béo phì loại bụng. Kháng insulin là liên kết trung tâm của MS và có liên quan chặt chẽ đến viêm. Trong lý thuyết Đông y, MS thuộc phạm trù "đờm đục" "béo phì", bệnh cơ chủ yếu là tỳ hư đàm trọc. Tham linh bạch thuật tán xuất phát từ "Thái Bình Huệ Dân Hòa Dược Cục Phương", có tác dụng kiện tỳ hóa thấp.

Kết quả nghiên cứu này cho thấy, chất lượng cơ thể, vòng bụng,SBP, DBP, FPG, FINS, TC, TG, LDL-C đều tăng, HDL-C giảm và HOMA-IR tăng, gợi ý rằng mô hình chuột MS đã được xây dựng thành công và đi kèm với tăng insulin máu. Khối lượng cơ thể chuột, vòng bụng, chỉ số béo phì, chỉ số Lee's, FPG, FINS, HOMA-IR, SBP, DBP, TC, TG, LDL-C đều giảm và HDL-C tăng; Kết quả nhuộm HE gợi ý thoái hóa mỡ gan và giảm xâm nhập tế bào viêm. Sâm linh bạch phẫu có thể làm giảm khối lượng cơ thể chuột MS, cải thiện chuyển hóa glycosid và kháng insulin, giảm thoái hóa mỡ gan và xâm nhập tế bào viêm.

Nghiên cứu này cũng cho thấy huyết thanh chuột trong nhóm y học cổ truyền Trung Quốc.Nồng độ FFA giảm so với nhóm mô hình. FFA là sản phẩm trung gian của quá trình chuyển hóa chất béo, có thể làm giảm độ nhạy insulin của các cơ quan đích insulin, gây tăng insulin máu. Sâm linh bạch thuật có thể cải thiện sức đề kháng insulin bằng cách giảm hàm lượng FFA.

MS là một tình trạng viêm hệ thống ở mức độ thấp, thường đi kèm với mức độ cao của các yếu tố viêm. Các con đường NLRP3, TLR4, NF-κB làm trung gian sản xuất các yếu tố gây viêm như TNF-α, IL-1, IL-8, gây nhiễu đường dẫn tín hiệu IRS/PI3K, dẫn đến kháng insulin. Kết quả nghiên cứu này cho thấy biểu hiện mRNA huyết thanh TNF-α, IL-1, IL-8 và mô gan NLRP3, TLR4, NF-κB ở chuột trong nhóm y học cổ truyền Trung Quốc giảm so với nhóm mô hình, gợi ý rằng bạch phẫu Sâm Linh làm giảm tình trạng viêm ở chuột MS bằng cách ức chế biểu hiện mRNA NLRP3, TLR4, NF-κB.

Tóm lại, sâm linh bạch thuật tán có thể cải thiệnRối loạn chuyển hóa glycolipid, kháng insulin, giảm thoái hóa mỡ gan và xâm nhập tế bào viêm ở chuột MS, cơ chế có thể liên quan đến việc ức chế các yếu tố viêm TNF-alpha, IL-1, IL-8 giải phóng và biểu hiện mRNA NLRP3, TLR4, NF-κB, do đó làm giảm tình trạng viêm.

Tài liệu tham khảo

[1] Nhóm biên soạn báo cáo sức khỏe tim mạch và bệnh tật Trung Quốc. Báo cáo sức khỏe và bệnh tim mạch Trung Quốc 2021 Tóm tắt [J]. Tạp chí Tuần hoàn Trung Quốc, 2022, 37 (6): 553-578.

(văn) ① Lầm lẫn; ② Giả dối. B5-05=giá trị thông số Kd, (cài 2) Bắc Kinh: Nhà xuất bản Y tế Nhân dân, 2010: 69 - 73.