Trong thí nghiệm Western Blot (WB), việc rửa màng đầy đủ là một bước quan trọng để giảm nền và tăng tỷ lệ tín hiệu tiếng ồn.Máy lắc qua lạiDo chuyển động qua lại tuyến tính của nó có thể thúc đẩy hiệu quả việc trao đổi tiếp xúc giữa kem dưỡng da và bề mặt màng, nó được sử dụng rộng rãi trong liên kết rửa TBST sau khi ủ một/hai kháng. Tuy nhiên, cài đặt biên độ và tốc độ của nó ảnh hưởng trực tiếp đến hiệu quả giặt và tính toàn vẹn của màng.
Thí nghiệm cho thấy:
Biên độ quá nhỏ (<10 mm): không đủ nhiễu loạn chất lỏng, dư lượng kháng thể cao, nền cao;
Biên độ quá lớn (>30 mm): màng dễ dàng gấp lại, khung ma sát, làm cho dải bị rách hoặc rơi ra;
Tốc độ quá thấp (<30 vòng/phút): Tốc độ trao đổi chậm, cần thời gian giặt kéo dài;
Tốc độ quá cao (>80 vòng/phút): tạo ra nhiễu loạn và bong bóng, can thiệp vào vùng liên kết kháng nguyên-kháng thể.
Sự kết hợp lý tưởng của các thông số là: biên độ 20-25 mm, tốc độ 50-60 rpm. Trong điều kiện này, rửa 3 × 5 phút có thể giảm sự kết hợp không đặc hiệu xuống thấp hơn và màng PVDF hoặc NC vẫn phẳng và không bị phá hủy. Thử nghiệm so sánh cho thấy độ rõ nét của dải mục tiêu tăng 30% theo tham số này và giá trị màu xám nền giảm hơn 50%.
Ngoài ra, hướng đi lại nên song song với cạnh dài của màng, tránh kéo ngang. Sử dụng khay WB chuyên dụng để bảo đảm vị trí màng và ngăn ngừa trôi dạt.
Điều quan trọng cần lưu ý là biên độ thực tế của các máy lắc qua lại của các thương hiệu khác nhau có thể có độ lệch danh nghĩa và người dùng nên sử dụng thước đo hoặc xác minh thực tế video chuyển động chậm. Một số thiết bị mới đã cung cấp "Chế độ đặc biệt WB", tự động phù hợp với các thông số tốt hơn.

Tóm lại, thiết lập hợp lý.Máy lắc qua lạiBiên độ và tốc độ là một chiến lược chi phí thấp và hiệu quả để cải thiện khả năng lặp lại và chất lượng hình ảnh của Western Blot, đáng được các nhà thử nghiệm chú ý và chuẩn hóa.