Máy sắc ký lỏng phòng thí nghiệmHiệu chuẩn đo lường là một quá trình liên quan đến nhiều khía cạnh, sau đây là các bước và cân nhắc chi tiết:

I. Điều kiện môi trường

Trước khi thực hiện hiệu chuẩn đo sắc ký lỏng, cần đảm bảo rằng các điều kiện môi trường đáp ứng các yêu cầu sau:

Nhiệt độ phòng nên được giữ ở (15~30) ℃ và thay đổi nhiệt độ không quá 3 ℃ trong quá trình hiệu chuẩn (đối với máy dò chỉ số khúc xạ khác biệt, thay đổi nhiệt độ phòng không quá 2 ℃).

Độ ẩm tương đối trong nhà nên được duy trì (20~85%).

Các vật dụng dễ cháy, nổ, ăn mòn mạnh không được lưu trữ trong phòng.

Không có rung động cơ học rõ ràng và nhiễu điện từ, và thông gió tốt.

II. Chất tiêu chuẩn và thiết bị hiệu chuẩn

Cần sử dụng các chất tiêu chuẩn được cấp phép quốc gia và đảm bảo rằng thiết bị hiệu chuẩn được kiểm tra đo lường và đạt tiêu chuẩn. Các chất tiêu chuẩn thường được sử dụng bao gồm:

Chất tiêu chuẩn cho dung dịch naphthalene-methanol với giá trị xác định là 1,00 × 10 ^ -4 g/mL và độ không chắc chắn mở rộng dưới 4%.

Chất tiêu chuẩn của dung dịch methanol cholesterol, giá trị tiêu chuẩn là 200 μg/mL, độ không chắc chắn mở rộng dưới 2,0%.

Các chất tiêu chuẩn khác được lựa chọn theo nhu cầu hiệu chuẩn cụ thể.

Thiết bị hiệu chuẩn có thể bao gồm pipet, chai dung tích, nhiệt kế, v.v.

III. Các bước hiệu chuẩn

1. Hiệu chuẩn hệ thống truyền

Khả năng chịu áp lực của máy bơm: Kết nối tốt các bộ phận của thiết bị, lấy methanol (hoặc nước tinh khiết) làm pha chảy, tốc độ dòng chảy được đặt là 0,2 mL/phút. Khởi động thiết bị và giữ áp suất ổn định trong 10 phút, kiểm tra rò rỉ tại mỗi giao diện đường ống. Tháo cột sắc ký và chặn đầu ra của máy bơm để áp suất đạt 90% giá trị tối đa cho phép, giữ trong 5 phút, xác nhận không có rò rỉ.

Lỗi thiết lập lưu lượng bơm và ổn định dòng chảy: thiết lập tốc độ dòng chảy theo yêu cầu, khởi động dụng cụ và đợi áp suất ổn định, sử dụng chai công suất sạch để thu thập pha dòng chảy ở đầu ra pha dòng chảy, tính thời gian và cân, tính toán tốc độ dòng chảy đo được. Lặp lại hiệu chuẩn 3 lần để đảm bảo độ chính xác.

Lỗi gradient: Thiết lập quy trình rửa gradient để vẽ và tính toán đường cong thay đổi gradient với dung môi A (ví dụ: nước) và dung môi B (ví dụ: dung dịch nước có chứa 0,1% acetone).

2. Lỗi điểm đặt nhiệt độ hộp cột và hiệu chỉnh ổn định

Đặt đầu dò nhiệt kế kỹ thuật số ở cùng vị trí trong bộ điều nhiệt cột sắc ký như cột sắc ký.

Chọn nhiệt độ thiết lập (chẳng hạn như 35 ℃ và 45 ℃), ghi lại số đọc khi nhiệt độ ổn định và ghi lại mỗi 10 phút, tổng cộng 7 lần.

Tính toán sự khác biệt giữa giá trị trung bình và giá trị cài đặt là lỗi của giá trị cài đặt nhiệt độ cột và sự khác biệt giữa giá trị cực đại và giá trị tối thiểu trong 7 lần đọc là ổn định nhiệt độ cột.

3. Đánh dấu máy dò

Lấy máy dò ánh sáng khả kiến UV và máy dò mảng điốt làm ví dụ, kết nối tốt các bộ phận của thiết bị, chọn cột sắc ký thích hợp và pha chảy.

Đặt các thông số đo tương ứng, chẳng hạn như bước sóng, độ nhạy, v.v.

Sau khi ổn định đường cơ sở, tiêm một lượng dung dịch chất tiêu chuẩn nhất định (chẳng hạn như dung dịch naphthalene-methanol 1,0 × 10 ^ -4 g/mL), thời gian lưu giữ và diện tích đỉnh của đỉnh sắc ký được xác định liên tục và ghi lại.

4. Hiệu chuẩn chính xác khối lượng mẫu (nếu có)

Nó có thể được thực hiện bằng phương pháp hiệu chuẩn sản phẩm tiêu chuẩn, phương pháp cân, phương pháp hiệu chuẩn vòng định lượng hoặc phương pháp so sánh với bộ lấy mẫu tiêu chuẩn.

Hiệu chuẩn sản phẩm tiêu chuẩn: Sử dụng dung dịch sản phẩm tiêu chuẩn có nồng độ đã biết để lấy mẫu nhiều lần, ghi lại giá trị đáp ứng đỉnh sắc ký và tính toán độ chính xác của thể tích mẫu.

Phương pháp cân: Khối lượng dung môi thực sự hấp thụ được tính toán bằng cách cân và tương phản với khối lượng đã đặt.

Hiệu chuẩn vòng định lượng: Kiểm tra độ chính xác thể tích của vòng định lượng, được đánh giá bằng cách quan sát hình dạng đỉnh sắc ký và giá trị đáp ứng.

So sánh với bộ lấy mẫu tiêu chuẩn: Sử dụng bộ lấy mẫu tiêu chuẩn để phân tích so sánh, độ lệch của thể tích mẫu được tính toán và điều chỉnh.

IV. Hồ sơ và báo cáo hiệu chuẩn

Mỗi dữ liệu và quan sát cần được ghi lại chi tiết trong quá trình hiệu chuẩn.

Báo cáo hiệu chuẩn phải được chuẩn bị sau khi hiệu chuẩn hoàn tất, bao gồm các nội dung như ngày hiệu chuẩn, điều kiện môi trường, thiết bị hiệu chuẩn, các bước hiệu chuẩn, ghi dữ liệu và kết quả phân tích.

Báo cáo hiệu chuẩn phải được xem xét và xác nhận bởi một chuyên gia.

V. Chú ý

Quy trình vận hành và thông số kỹ thuật an toàn phải được tuân thủ nghiêm ngặt trong quá trình hiệu chuẩn.

Khi sử dụng các chất tiêu chuẩn phải đảm bảo rằng chúng có hiệu lực và được bảo quản đúng cách.

Thiết bị hiệu chuẩn phải được duy trì và kiểm tra thường xuyên để đảm bảo tính chính xác của nó.

Hiệu chuẩn đo lường của máy sắc ký lỏng trong phòng thí nghiệm là một quá trình phức tạp và tinh tế đòi hỏi các chuyên gia phải tuân thủ nghiêm ngặt các quy trình hoạt động để đảm bảo độ chính xác và độ tin cậy của thiết bị.