Máy tách polypeptideChuyển đổi các protein phức tạp thành các phân đoạn peptide có thể phân tích bằng cách phá vỡ các liên kết peptide trong chuỗi polypeptide bằng các phương pháp vật lý, hóa học hoặc sinh học.Máy tách polypeptideCon đường công nghệ của nó chủ yếu được chia thành ba hệ thống chính:

Phương pháp enzyme

Nguyên tắc: Sử dụng khả năng cắt đặc hiệu của các enzyme sinh học (ví dụ trypsin, pepsin), xác định chính xác và phá vỡ các liên kết peptide của đầu carboxyl của dư lượng axit amin cụ thể (ví dụ: lysine, arginine) ở điều kiện nhẹ (ví dụ: nhiệt độ không đổi 37 ℃).

Ưu điểm: chiều dài mảnh vỡ của sản phẩm nứt là đồng nhất, thích hợp cho phân tích chuỗi polypeptide, xác định phổ khối và các kịch bản khác. Ví dụ, trypsin có thể tách albumin huyết thanh bò thành hỗn hợp phân đoạn peptide với độ bao phủ lý thuyết trên 80% trong vòng 16 giờ.

Hạn chế: Nhạy cảm với các điều kiện phân giải enzyme như pH, nhiệt độ và khó xử lý polypeptide chứa nhiều proline hoặc axit amin biến đổi.

Phương pháp cracking hóa học

Nguyên tắc: Phá vỡ cấp phân tử đạt được ở nhiệt độ cao (100 ℃) thông qua các axit mạnh (như axit clohydric 6M) hoặc kiềm mạnh (như dung dịch natri hydroxit), thích hợp cho collagen khó phân hủy, keratin, v.v.

Ưu điểm: hiệu quả cracking cao, có thể xử lý các mẫu phức tạp.

Hạn chế: Điều kiện phản ứng mạnh mẽ, có thể dẫn đến gãy không đặc hiệu hoặc sửa đổi chuỗi bên axit amin, yêu cầu các bước tinh chế tiếp theo.

Phương pháp tách vật lý

Nguyên tắc: Sử dụng laser (chẳng hạn như xung laser excimer 193nm) để tạo ra nhiệt độ cực cao cục bộ trong thời gian nano giây, cho phép phá vỡ liên kết peptide không nhiệt động học.

Ưu điểm: Không có dư lượng thuốc thử hóa học, thích hợp cho các mẫu nhạy cảm với ô nhiễm hóa chất (ví dụ: mẫu chẩn đoán lâm sàng).

Hạn chế: Chi phí thiết bị cao, yêu cầu kỹ thuật vận hành nghiêm ngặt.