I. Giới thiệu

• SF9Tế bào côn trùng là một dòng tế bào nhân chuẩn quan trọng có nguồn gốc từ tổ chức buồng trứng nhộng ấu trùng, nguyên lý nuôi cấy của nó là thông qua mô phỏng môi trường sinh lý trong cơ thể côn trùng (thích hợp với nhiệt độ, dinh dưỡng và trao đổi khí), để hỗ trợ tăng sinh tế bào và làm vật chủ của virus que, từ đó đạt được mức độ biểu hiện protein tái tổ hợp cao.

Cấu hình chung:

• Nhiệt độ:27℃

• Tốc độ quay:120-140 vòng / phútNuôi cấy lơ lửng

II. Chi tiết chương trình

• Cảnh điển hình:

SF9Ứng dụng chính của tế bào là với các hệ thống biểu hiện virus que (ví dụ:Bac đến BacHệ thống) kết hợp để biểu hiện mức độ cao của các protein tái tổ hợp phức tạp, các hạt giống virus và kháng nguyên vắc-xin, là một công cụ quan trọng trong dược phẩm sinh học và nghiên cứu cơ bản.

• Thông số cấu hình và nguyên tắc:

Nhiệt độ:SF9Nhiệt độ nuôi cấy tế bào phải được kiểm soát chặt chẽ26-28giữa ℃, thường được đặt là27℃。 Điều này là do các tế bào có nguồn gốc côn trùng có nhiệt độ tăng trưởng tối ưu thấp hơn nhiều so với các tế bào động vật có vú. Nhiệt độ là một yếu tố quan trọng ảnh hưởng đến sự phát triển của tế bào và biểu hiện protein, một khi nhiệt độ nuôi cấy vượt quá30Độ C, sẽ dẫn đến stress nhiệt tế bào, trì trệ tăng trưởng thậm chí tử vong hàng loạt, gây ra tổn thương không thể đảo ngược. Do đó, việc hiệu chỉnh nhiệt độ trong môi trường nuôi cấy và theo dõi liên tục là rất quan trọng.

Tốc độ quay:Khi thực hiện nuôi cấy lơ lửng, tốc độ quay thường được đặt ở120Đến140 vòng / phútTrong phạm vi. Tốc độ này đảm bảo rằng các tế bào được treo đồng đều trong môi trường, tránh lắng đọng trong khi cung cấp trao đổi khí đầy đủ (truyền oxy) cho sự phát triển của tế bào. Tốc độ quay quá thấp có thể dẫn đến sự kết tụ tế bào và thiếu oxy; Quá cao sẽ tạo ra lực cắt quá lớn, gây tổn thương cơ học cho tế bào. Ngoài ra, để đảm bảo hiệu quả trao đổi khí, khối lượng nuôi cấy thường không vượt quá tổng công suất lắc.2/5。

• Các điểm lưu ý và thao tác:

Tiến hànhSF9Khi nuôi cấy tế bào, một số khâu sau đây cần đặc biệt chú ý:

1. Độ nhạy nhiệt độ:SF9Các tế bào rất nhạy cảm với nhiệt độ. Nhiệt độ nuôi cấy tuyệt đối không thể cao hơn30Độ C, nếu không sẽ dẫn đến tổn thương không thể đảo ngược của tế bào. Ngay cả trong các hoạt động thoát khỏi môi trường nuôi cấy trong thời gian ngắn, chẳng hạn như hồi sức, nên được thực hiện càng sớm càng tốt và tránh để lâu ở nhiệt độ phòng hoặc cao hơn.

2. Tránh thiệt hại cơ học:SF9Các tế bào rất nhạy cảm với các lực cơ học như thổi và bong bóng. Tất cả các hoạt động, chẳng hạn như treo nặng, thổi di truyền, phải di chuyển nhẹ nhàng và cố gắng tránh tạo ra quá nhiều bong bóng để duy trì sức sống cao của tế bào.

3. Quan sát hình thái tế bào:Trong quá trình nuôi cấy quan sát thấy có một số hạt đen trong tế bào thuộc về hiện tượng bình thường, là bong bóng tiết ra của chính tế bào và khúc xạ bào quan. Sau một thời gian nuôi cấy trên tường, một số tế bào có thể vươn ra các xúc tu dài hơn, điều này cũng không phải là dấu hiệu của sự ô nhiễm hoặc tình trạng kém. Nếu mảnh vỡ bên ngoài tế bào tăng lên, có thể được loại bỏ bằng cách thay dịch ly tâm tốc độ thấp.

4. Phục hồi và đông lạnh:Sau khi hồi phục đề nghị24Thay thế môi trường tươi trong vòng một giờ để loại bỏ các chất độc hại được giải phóng bởi các tế bào chết. Hộp làm mát theo chương trình được khuyến khích khi đông lạnh và thường xuyên hồi sức để kiểm tra hoạt động của các tế bào dự trữ để đảm bảo chất lượng của ngân hàng tế bào hạt giống.

III. Xuất xứ văn học

1. Truy cập ngày 1 tháng 3 năm 1992. O'Reilly, D. R., Miller, L. K., & Luckow, V. A. (1992). Vector biểu hiện Baculovirus: Một hướng dẫn sử dụng phòng thí nghiệm. W.H. Freeman và Công ty

   Mô tả: Cuốn sách này là một hướng dẫn sử dụng cổ điển trong lĩnh vực hệ thống biểu hiện virus que, giải thích chi tiết bao gồmSF9Trong đó có sinh học cơ bản, phương pháp bồi dưỡng và quá trình thí nghiệm truyền nhiễm, nhiễm trùng của hệ tế bào côn trùng.

2. Luckow, V. A., & Summers, M. D. (1988). Xu hướng phát triển của vector biểu hiện baculovirus. * Công nghệ sinh học, 6*(1), 47-55.

   Mô tả: Hệ thống bài viết tổng quan có ảnh hưởng cao này xem xét quá trình phát triển của vector pole và làm rõSF9Vai trò then chốt của hệ thống đẳng tế bào trong tối ưu hóa hệ thống.