Bằng cách tuân thủ nghiêm ngặt các quy tắc hoạt động trên, mật độ nấm có thể được cải thiện đáng kể (điển hình lên đến OD600=8-12), tỷ lệ sản phẩm và tuổi thọ của thiết bị. Trong thao tác thực tế cần kết hợp với đặc tính sinh lý cụ thể của giống vi - rút để thiết lập quy trình tiêu chuẩn hóa và ghi chép nhật ký vận hành để ngược dòng tối ưu hóa.

Sau đây là chi tiết sử dụng máy lắc nấm lỏng và giải thích điểm mấu chốt:

Chuẩn bị trước và xử lý container

1. Lựa chọn container và khử trùng

Bình tam giác (thường được sử dụng 250-500mL) hoặc máy lên men loại vách ngăn được ưu tiên, dựa trên khối lượng nuôi cấy để nạp chất lỏng theo tỷ lệ không vượt quá 70% thể tích bình chứa. Thủy tinh cần được khử trùng bằng hơi nước áp suất 121 ℃ trong 30 phút, chai nhựa có thể được khử trùng bằng ethylene oxide để tránh các chất ức chế còn lại ảnh hưởng đến sự phát triển của nấm.

2. Xây dựng môi trường

Cấu hình môi trường thích hợp theo đặc tính chủng (ví dụ: môi trường LB cho E. coli), điều chỉnh độ pH ban đầu (pH6.8-7.2 cho vi khuẩn nói chung, tính axit của nấm). Để làm giàu một chất chuyển hóa cụ thể, bạn có thể thêm chất cảm ứng hoặc tiền chất.

II. Đặc điểm kỹ thuật tiêm chủng và tải

1. Hoạt động vô trùng

Hoàn thành tiêm chủng trong tủ an toàn sinh học, ngọn lửa đốt cháy miệng chai sau đó loại bỏ nút bông, đưa vào lượng nấm vừa phải (lượng tiêm chủng khoảng 5% -10%), nhanh chóng bịt miệng và chuyển sang giường lắc qua cửa sổ truyền. Chú ý rằng thời gian hoạt động được kiểm soát trong phạm vi hiệu quả của ngọn lửa đèn cồn.

2. Tải cân bằng đối xứng

Các thùng chứa chất lỏng vi khuẩn được đặt đối xứng trên máy lắc để đảm bảo cân bằng tải. Tải lệch tâm có thể gây rung động bất thường cho động cơ và rút ngắn tuổi thọ cơ học. Nên sử dụng các khối đối trọng để lấp đầy khoảng trống khi nuôi cấy khối lượng lớn.

III. Thiết lập tham số và giám sát

1. Kiểm soát nhiệt độ

Tùy thuộc vào cài đặt nhiệt độ tăng trưởng tối ưu của chủng (ví dụ: nấm mốc 30 ° C, vi khuẩn thermophilus 55 ° C), bắt đầu chức năng làm nóng trước làm cho sự khác biệt nhiệt độ trong khoang ≤ ± 0,5 ° C. Kiểm tra nhiệt độ thực tế mỗi 4 giờ trong thời gian dài để tránh sự thất bại của kiểm soát nhiệt độ dẫn đến cái chết của nấm.

2. Điều chỉnh tốc độ quay

Chú ý đến hiệu quả hòa tan oxy và tổn thương lực cắt: vi khuẩn hiếu khí thông thường được đặt 200-300 vòng/phút, nấm sợi có thể được điều chỉnh dưới 150 vòng/phút; Nuôi cấy kỵ khí cần giảm xuống 80-120 vòng/phút và nạp nitơ để thay thế khí. Quan sát việc tạo bọt và thêm chất khử bọt nếu cần thiết.

3. Quản lý chương trình thời gian

Chiến lược kiểm soát thời gian phân đoạn được sử dụng: thời gian trễ (0-6h) thích ứng với tốc độ thấp, giai đoạn logarit được nâng lên tốc độ quay mục tiêu và thời gian ổn định giảm tốc độ kéo dài giai đoạn hình thành enzyme/bào tử. Thiết lập chương trình giảm tốc trước 15 phút, phòng ngừa đột ngột ngừng bắn gây ra xung kích xoáy nước.

IV. Quản lý quá trình vận hành

1. Kiểm tra tình trạng

Kiểm tra các mặt hàng sau mỗi giờ: a) Các thiết bị cố định có lỏng lẻo hay không; b) Tính thông suốt của cửa xả nước ngưng tụ; ③ Thay đổi chiều cao bề mặt chất lỏng trong chai (đánh giá tốc độ bay hơi); Âm thanh bất thường hoặc mùi lạ xuất hiện.

2. Kiểm soát thời gian bổ sung

Với chiến lược cộng dòng chảy không liên tục, nguồn carbon/nitơ được bổ sung bằng ống silicone vô trùng khi các điện cực DO cho thấy sự sụt giảm oxy hòa tan. Khối lượng bổ sung không vượt quá 10% khối lượng làm việc một lần, tránh đột biến áp suất thẩm thấu.

3. Kiểm soát ô nhiễm

Phát hiện độ đục bất thường cao lập tức chấm dứt nuôi cấy, lấy mẫu kiểm tra nội soi xác nhận tình trạng ô nhiễm. Khi ô nhiễm nghiêm trọng nên dùng chất khử trùng lau sạch vách trong giường lắc, sau đó dùng tia cực tím chiếu xạ 30 phút mới có thể tiếp tục sử dụng.

V. Thu hoạch và xử lý hậu quả

1. Mẹo lấy mẫu

Lấy mẫu bên bằng phương pháp siphon hoặc ống tiêm để tránh làm xáo trộn kết tủa đáy. Cân trước và sau khi lấy mẫu ghi lại sự thay đổi trọng lượng ướt và chuyển đổi đường cong tích lũy sinh khối.

2. Xử lý chất thải

Tàu có áp lực cần phải hạ áp suất trước khi mở, nuôi cấy có chứa các yếu tố gây bệnh nên được thải ra sau 30 phút bất hoạt ở 121 ℃. Vật cố kim loại được khử trùng bằng cách ngâm ethanol 75%, và các bộ phận nhựa được thay thế bằng túi rác đặc biệt được niêm phong và loại bỏ.

3. Chăm sóc thiết bị

Làm sạch bụi tích tụ của màn hình quạt mỗi tháng và sửa chữa độ đàn hồi của vành đai truyền động hàng quý. Khi không sử dụng trong thời gian dài, xả sạch bể nước và bôi mỡ silicone chống gỉ, màn hình kỹ thuật số được phủ thêm lớp bảo vệ chống bụi.